臨床免疫學(xué)檢查操作規(guī)程

1、臨床免疫學(xué)檢查操作規(guī)程傳染病免疫學(xué)檢查乙型肝炎血清標(biāo)志物（HBV M）檢測(cè)【 方 法 】ELISA 法?！?試 劑 】國(guó)內(nèi)有商品化試劑盒供應(yīng)。但必須按規(guī)定使用經(jīng)中國(guó)藥 品生物制品檢定所檢定并貼有“中國(guó)藥品生物制品檢定所檢 定合格”字樣的防偽標(biāo)簽的試劑?！?操 作 】按試劑盒內(nèi)說(shuō)明書(shū)書(shū)進(jìn)行?！?附 注 】1 試劑盒應(yīng)置冰箱中保存，取出后平衡至室溫方可使 用，未用完的微孔條須密封保存；2 每次應(yīng)設(shè)空白 1 孔（不加標(biāo)本及標(biāo)酶試劑，其余各 步相同），陰性對(duì)照 3 孔，陽(yáng)性對(duì)照 2 孔；3 洗滌液須用蒸鎦水或去離子水配制，洗滌時(shí)各孔均應(yīng)加滿洗液，以防孔口內(nèi)邊緣有游離酶殘存不能洗凈；4 用洗板機(jī)洗板，每

2、次洗板反復(fù) 5 遍，最后一次要求微孔內(nèi)不殘留洗滌液，如達(dá)不到要求，需扣干；5 洗板機(jī)洗板時(shí)應(yīng)設(shè)定 3060 秒的浸泡時(shí)間；6 滴加試劑前應(yīng)將滴瓶翻轉(zhuǎn)數(shù)次，使液體均勻并棄去 一滴。滴加時(shí)瓶身應(yīng)保持垂直，以使滴量 準(zhǔn)確，注意勿將 試劑滴在孔壁上；7 . 37 C溫育須采用水浴箱， 不可使用37 C干式恒溫箱，且微孔條必須接觸 37 C水浴水面，不可懸空；8 不同批號(hào)試劑不可混合使用?！?結(jié)果判斷 】酶標(biāo)儀雙波長(zhǎng) 450/630nm 比色測(cè)定；1 . HBSAg、抗一HBS、HBeAg臨界值（C.O）二陰性對(duì)照孔A值的均值NX 2.1 （陰性對(duì)照A值V 0.05時(shí)按0.05計(jì)）;標(biāo)本 A值 S/C.

3、O > 1 為 HBsAg 抗一HBs HBeAg陽(yáng)性（S/N> 2.1 );標(biāo)本 A值 S/C.O v 1 為 HBsAg 抗一HBs HBeAg陰性(S/N v 2.1 )。2 .抗一HBe 抗一 HBb;臨界值(C.O)二陰性對(duì)照孔A值的均值NX 0.5 ;標(biāo)本A值S/C.O < 1者為抗一HBe抗一 HB陽(yáng)性(S/N< 0.50 );標(biāo)本A值S/C.O > 1者為抗一HBe抗一 HEC陰性(S/N >0.50 )。抗甲型肝炎病毒免疫球蛋白 M( Anti-HAV-IgM )測(cè)定【 方 法 】ELISA 法?！?試 劑 】市售合格試劑、要求同 HBV兩

4、對(duì)半；【 操 作 】按試劑說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行，要求可參考HBV兩對(duì)半；結(jié)果判斷 】要求同HBV兩對(duì)半中HBsAg抗丙型肝炎病毒免疫球蛋白G(Anti-HCV-IgG )測(cè)定【 方 法 】ELISA 法?！?試劑 】市售合格試劑、要求同 HBV兩對(duì)半?！?操作 】按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行、要求可參考HBV兩對(duì)半?！?結(jié)果判斷 】1 .陰性對(duì)照：正常情況下， A值W 0.08 ;2 .陽(yáng)性對(duì)照：正常情況下， A值0.50 ;3 .臨界值(C.O)=陰性對(duì)照均值X 2.8。陰性對(duì)照孔A值0.08應(yīng)舍棄、如所有陰性對(duì)照孔 A值 均0.08，試驗(yàn)應(yīng)重做。陰性對(duì)照孔 A值0.05時(shí)以0.05計(jì) 算。標(biāo)本A值S/C.

5、0 1者為陽(yáng)性。 標(biāo)本 A 值 S/C.O<1 為陰性?？?HIV（ 1+2）測(cè)定在選用測(cè)定方法時(shí)、需根據(jù)自身?xiàng)l件和需要加以綜合考慮、盡管所述方法靈敏度特異性都很高、但在實(shí)際工作中， 假陽(yáng)性仍然可見(jiàn)，為達(dá)到最佳的檢測(cè)目的，一般需采用下列 程序。ELISA 、金標(biāo)等過(guò)篩試驗(yàn)陰性排除后；陽(yáng)性者應(yīng)以同類另一方法或另類某種方法重新過(guò)篩試驗(yàn)，以排除假陽(yáng)性，若仍為陽(yáng)性，可用免疫印跡法證實(shí)，再次排除假陽(yáng)性，經(jīng)重復(fù) 檢測(cè)均為陽(yáng)性者，方可慎重發(fā)出陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告。【 方 法 】1 篩選： ELISA 法、金標(biāo)法、明膠凝集試驗(yàn)、免疫熒光 法和乳膠凝集試驗(yàn)等。試劑：必須使用經(jīng)中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定并貼有 “中國(guó)藥品生物制品檢定所檢定合格”防偽標(biāo)簽的商品試劑 盒。2 確認(rèn)：免疫印跡法和放射免疫沉淀試驗(yàn)。試劑：使用經(jīng)國(guó)家衛(wèi)生部正式批準(zhǔn)的快速免疫轉(zhuǎn)印試劑盒和相應(yīng)的放射免疫沉淀試劑盒。【 操 作 】按試劑說(shuō)明書(shū)要求進(jìn)行。【 結(jié)果判斷 】按試劑說(shuō)明書(shū)要求判定?！?附 注 】1 判斷是否感染 HIV 應(yīng)十分慎重，對(duì)可能是陽(yáng)性的樣 品還應(yīng)結(jié)合其它測(cè)定項(xiàng)目的結(jié)果和臨床情況作出判斷。2 金標(biāo)法必須