水產(chǎn)口服疫苗研究進(jìn)展.docxVIP

1、必述摘杵"綜文水產(chǎn)口服疫苗研究進(jìn)展黃鈞I,施金谷"，陳明二黃艷華I（1.廣西大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，廣西南寧530005；2.廣西壯族自治區(qū)水產(chǎn)研究所，廣西南寧530021）中圖分類號：S942.5文獻(xiàn)標(biāo)識碼：B每年全球?qū)︳~產(chǎn)品的消費(fèi)最約為12億噸，從1980年開始，水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)為全球漁業(yè)產(chǎn)業(yè)提供的水產(chǎn)品以每十年兩倍的速度增長，并且有不斷上升趨勢。為了滿足不斷增長的水產(chǎn)品需求，集約化養(yǎng)殖業(yè)迅猛發(fā)展，隨之帶來的是養(yǎng)殖環(huán)境不斷惡化、病害頻發(fā)肆虐、病原耐藥性增強(qiáng)、藥物殘留等制約水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展和危害消費(fèi)者健康等諸多問題。因此，水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)急需一種及時(shí)有效、可持續(xù)發(fā)展、經(jīng)濟(jì)適用的疾病

2、防治方法。1942年，隨著Duff首次將殺鯉氣單胞菌（Aeromonas.Salmonici-da）的滅活口服疫苗應(yīng)用于硬頭鱷并獲得成功后，意味著一種新的魚病防治方式開啟。隨后，國內(nèi)外不少學(xué)者對疫苗在魚類中的應(yīng)用進(jìn)行了大最的研究開發(fā)，特別是近年來，隨著對魚類腸道粘膜免疫系統(tǒng)機(jī)制研究的不斷深入，抗原載體的不斷研發(fā)，抗原包裹技術(shù)的不斷完善,魚類口服疫苗研究取得了一定進(jìn)展。本文僅對水產(chǎn)口服疫苗的研究進(jìn)展做一綜述。1魚類腸道免疫機(jī)理11魚類腸道粘膜免疫的細(xì)胞及應(yīng)答魚類的腸道主要包含固有層和上皮層，巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞等白細(xì)胞主要分布在固有層，上皮層中則較為少見，但鯉魚腸道上皮層中分布有大量T

3、淋巴細(xì)胞（Ig-）,固有層中為B淋巴細(xì)胞（I廠）。在舌齒鱗腸道中，1廠密度大于Ig',且主要存在于腸上皮中，越是靠近肛門，淋巴細(xì)胞的數(shù)量就越多，表明魚類的后腸具有更高的免疫相關(guān)性。Companjen也證實(shí)了魚類后腸為抗原的主要吸收和加工的部位，抗原可在后腸被巨噬細(xì)胞吞噬，誘導(dǎo)產(chǎn)生免疫應(yīng)答。一般認(rèn)為，可溶性抗原較顆粒性抗原更容易被吸收，相應(yīng)地也更容易被降解，運(yùn)用包裹技術(shù)制成的可溶性微囊可減基金項(xiàng)目：廣西科學(xué)研究與技術(shù)開發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目（桂科攻1123006-4）。文章編號：1002-5235（2013）01-0055-03緩抗原的降解，持續(xù)性釋放抗原，從而引起更強(qiáng)的免疫應(yīng)答。通常認(rèn)為，口服疫苗

4、引起的免疫反應(yīng)主要是以粘膜免疫為主，它對魚類疾病的防御起到?jīng)Q定性作用，但對于魚類粘液免疫運(yùn)轉(zhuǎn)機(jī)制目前尚未清楚。魚類雖然缺乏如哺乳動物淋巴集結(jié)（Peyer節(jié)）等的腸道相關(guān)淋巴組織（GALT）,但卻具有大量的淋巴細(xì)胞?？乖谶M(jìn)入腸道后，小分子或可溶性物質(zhì)經(jīng)細(xì)胞間隙滲透進(jìn)入血液，大分子顆粒則被巨噬細(xì)胞吞噬后呈遞給相關(guān)淋巴組織，從而引起機(jī)體進(jìn)一步的免疫反應(yīng)。鯉魚的腸細(xì)胞與哺乳動物中GALT的M細(xì)胞類似，能將抗原從腸道上皮轉(zhuǎn)移到淋巴聚集部位，通過胞飲和內(nèi)吞作用,將抗原呈遞到巨噬細(xì)胞和外周組織中。大分子蛋白或細(xì)菌抗原則主要經(jīng)后腸上皮細(xì)胞吞飲吸收。有研究證明，前腸及后腸等組織的粘膜具有能夠獨(dú)立完成免疫應(yīng)答的

5、細(xì)胞基礎(chǔ)，口服免疫不僅能引起粘膜免疫，還能引起系統(tǒng)免疫，口服免疫滅活的食果糖乳桿菌可使黑躺腸道內(nèi)I”淋巴細(xì)胞數(shù)量和游走于身體各部位的嗜酸性顆粒細(xì)胞（EGC）數(shù)量顯著增加U0-,21o表明口服免疫不僅能夠誘導(dǎo)抗體介導(dǎo)的免疫應(yīng)答,還能夠誘導(dǎo)包括細(xì)胞免疫在內(nèi)的全身性免疫反應(yīng)。12魚類腸道免疫分子哺乳動物主要組織相容性復(fù)合體（MHC）是外源性抗原呈遞的主要物質(zhì)。在很多真骨魚類中也能克隆到大量MHC-2的cDNA,同時(shí)MHC-2的mRNA可在大西洋錐鯉中大量表達(dá)，免疫后魚類的MHCmRNA表達(dá)量顯著增加方。表明MHC分子在魚類粘膜免疫中對抗原的呈遞起著重要的作用。另外，感染絳蟲后的褐第腸道中的血清素、P

6、物質(zhì)（SP）、腸血管肽（VIP）等水平均呈不同程度的上升，證明這些免疫調(diào)節(jié)因子參與了魚類的腸道免疫調(diào)節(jié)3、可見一些調(diào)節(jié)因子對魚類的粘膜免疫也起到一定作用,但其調(diào)節(jié)機(jī)制還知之甚少。2目前幾種較為成功的口服疫苗2.1微囊或包裹疫苗目前已報(bào)道的包裹材料主要有海藻酸鈉、殼聚糖和脂質(zhì)體。以海藻酸鈉包裹溶藻弧菌后免疫鯉魚和虹第，試驗(yàn)組具有更高的抗體效價(jià)，同時(shí)粘膜上的漿細(xì)胞數(shù)量大幅增加。用其包裹嗜水氣單胞菌制成微囊對銀鯽進(jìn)行口服免疫后，血清和后腸粘膜抗體效價(jià)可高達(dá)1：80和1：320皈；將一種表達(dá)半乳糖昔酶的DNA疫苗包裹于殼聚糖中免疫羅非魚，在其腮、胃、脾臟中均檢測到半乳糖昔酶3);將載有淋巴囊腫病毒的核

7、酸疫苗包裹于殼聚糖中制成殼聚糖微囊核酸疫苗免疫牙鮮，該微囊疫苗被腸道吸收后能持續(xù)釋放抗原長達(dá)45d,在牙鮮各組織中均能檢測到包含淋巴囊腫病毒主要衣殼蛋白(MCP)基因的mRNA,在組織切片中同時(shí)也發(fā)現(xiàn)病毒蛋白表達(dá)，血清中抗體的濃度大幅度增加，免疫效應(yīng)為陽性用脂質(zhì)體包裹殺氣單胞菌制成微囊免疫鯉魚，發(fā)現(xiàn)其血清、腸道粘液、膽汁中的抗體水平明顯增高,感染后的存活率達(dá)到83.5%3)。2.2生物載體疫苗于俊紅等將生物包埋技術(shù)和化學(xué)包埋技術(shù)相結(jié)合，讓鹵蟲分別攜帶全菌疫苗和微囊疫苗，同時(shí)設(shè)計(jì)了微囊疫苗組和全菌疫苗組，喂食免疫虢魚，攻毒后，攜帶微囊疫苗的鹵蟲組免疫保護(hù)率最高，達(dá)73.17%；其次為微囊疫苗組，

8、為56.18%,最低為攜帶全菌疫苗組，為36.18%(20oLin等)則通過生物包埋和重組蛋白技術(shù)相結(jié)合，運(yùn)用基因重組技術(shù)制備口服疫苗，以鹵蟲無節(jié)幼體為生物載體對魚類進(jìn)行免疫，在石斑魚中運(yùn)用，存活率可由30%提高到82%。轉(zhuǎn)基因口服疫苗在獸用疫苗中已獲得了較大進(jìn)展。目前已成功構(gòu)建了將草魚呼腸孤病毒VP6、大腸桿菌不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)、綠色熒光蛋白(GFP)融合表達(dá)的植物載體pCAMBIA1302-LTB-VP6")o將LTB和一種病毒多肽或者GFP融合后在馬鈴薯莖塊中獲得表達(dá)，用該植物疫苗免疫鯉魚，發(fā)現(xiàn)鯉魚對LTB的吸收增加,并能引起特異性免疫反應(yīng)習(xí)O2.3其他口服疫苗龔輝

9、等刃構(gòu)建了攜帶嗜水氣單胞菌溶血素基因的重組菌，該菌能夠表達(dá)嗜水氣單胞菌溶血素，利用其胞外產(chǎn)物制成的免疫刺激復(fù)合物，經(jīng)口服免疫，發(fā)現(xiàn)鰻穌淋巴細(xì)胞的增殖轉(zhuǎn)化能力顯著提高，并能誘導(dǎo)免疫保護(hù)和免疫記憶，一免的保護(hù)率為44.4%,二免后其保護(hù)率可達(dá)100%e此外，魚類寄生蟲的口服疫苗也逐漸被人們關(guān)注和研究。3面臨問題和發(fā)展趨勢水產(chǎn)口服疫苗現(xiàn)在所面臨的最大問題是抗原的保護(hù)問題，核心是如何使抗原在載體和水體中具有較好的穩(wěn)定性和如何在魚體內(nèi)保持抗原的完整性。因此選擇合適的抗原處理方式、合理的有效劑景、適當(dāng)?shù)拿庖邥r(shí)間、免疫程序和免疫次數(shù)等都是口服疫苗研究中亟待解決的問題。盡管目前注射型疫苗在疫苗市場中仍占主要位

10、置，但因其在使用過程中勞動強(qiáng)度大、容易造成動物受傷引起感染甚至死亡等不利因素的存在，研發(fā)具有低刺激性、高敏感性、使用簡便和低成本的口服疫苗是未來魚用疫苗發(fā)展的趨勢。參考文獻(xiàn)1NelsonMcmillan.D,Secombes.ChristohcrJ.Isolationofrainbowtrout(Oncorhynchusmykiss)intestinalintraepitheliallymphocytes(TEL)andmeasurementoftheircytotoxicactivityJ.Fish&ShellfishImmunology,1997,7(8)：527-541.2 Ro

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