樹(shù)脂切片制作過(guò)程

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上樹(shù)脂切片制作過(guò)程一、實(shí)驗(yàn)儀器及試劑1.器具電子天平、70恒溫箱、玻璃制刀機(jī)、半/超薄切片機(jī)、顯微鏡、包埋模、制刀用的玻璃條、鑷子、刀片。2.試劑 (1)固定劑：FAA (2)脫水劑：20%、40%、60%、80%、90%、95%、100%的乙醇；丙酮(3)樹(shù)脂：Spurr樹(shù)脂(4)染色劑：1%堿性品紅二、實(shí)驗(yàn)步驟1.取材和固定：取樣時(shí)所用的器具必須干凈，刀、剪等必須鋒利，在操作時(shí)盡量避免拉、鋸、壓等動(dòng)作對(duì)組織細(xì)胞造成的機(jī)械損傷。一般樣品塊的大小約為1立方毫米，取材完成后立即放入固定液中，真空泵抽氣兩到三次，每次1-2min（注意不要讓固定液沸出，如抽完后液體較少，可再

2、補(bǔ)加固定液）。2.脫水：用50%、60%、70%、85%、95%、100%的乙醇分別浸漬固定的材料，每種濃度處理1015min。3.置換 (1)在管瓶中加入2ml無(wú)水乙醇和1ml丙酮，處理材料10min。(2)向管瓶中追加1ml丙酮，處理材料10min。(3)向管瓶中再追加2ml丙酮，處理材料10min。(4)傾倒出管瓶中的無(wú)水乙醇和丙酮混合液，加入純丙酮3次，每次10min。4.浸透(1)在管瓶中加入1ml丙酮，向內(nèi)滴入1滴Spurr樹(shù)脂， 12h。(2)向管瓶中追加1至數(shù)滴Spurr樹(shù)脂，使Spurr樹(shù)脂的濃度逐漸提高，每滴加一次Spurr樹(shù)脂，放置12h，共滴加0.3ml左右的樹(shù)脂，使樹(shù)

3、脂濃度達(dá)到25%左右。(3)用吸管吸去管瓶中0.50.8ml的丙酮和Spurr樹(shù)脂的混合液，然后加入純Spurr樹(shù)脂0.5ml，使樹(shù)脂濃度達(dá)到50%60%左右，23h。(4)用吸管吸去管瓶中的丙酮和Spurr樹(shù)脂的混合液，加入0.50.8ml的Spurr樹(shù)脂，23h。(5)更換新配制的Spurr樹(shù)脂1ml，過(guò)夜。(6)重復(fù)換樹(shù)脂3次，每次12h。5.包埋與聚合(1)先將恒溫箱調(diào)至溫度至70，包埋模事前烘干置干燥器中存放。(2)在濕度小的房間里進(jìn)行包埋操作。在包埋模的中放上已浸透的材料(用牙簽不損傷樣品地桃)，用滴管吸取新配制的Spurr樹(shù)脂，并注滿每個(gè)穴孔，用牙簽撥樣品，使樣品按一定方位(有利

4、修塊、切片和觀察)排列。做好記載(各穴孔中放的是什么樣品)。(3) 聚合：將包埋樣品的包埋模放入70恒溫箱中聚合，8h后取出置干燥器中存放。多余的樹(shù)脂可放在膠囊中或放在包埋模的穴孔中同樣品一同聚合。6.修塊用銼刀或鐵砂皮磨樣品塊，使樣品稍稍暴露，使待切部位呈方形或長(zhǎng)方形，最后用刀片將樣品塊的磨面切平7.玻璃刀的制作用玻璃制刀機(jī)先將玻璃條制成邊長(zhǎng)為25mm的正方塊，然后再將每正方塊制作成2把璃制刀。8.切片、貼片(1)固定樣品塊和玻璃刀 將樣品塊和玻璃刀固定在半薄切片機(jī)上，玻璃刀的避樣品角約為5度，切片機(jī)裝樣品部位平放時(shí)，玻璃刀刀口與樣品塊處于同一高度。調(diào)節(jié)玻璃刀前后位置，使刀口接近樣品塊。(2)荒切 開(kāi)動(dòng)切片機(jī)，調(diào)節(jié)進(jìn)刀距離和速度，讓玻璃刀荒切樣品塊，使樣品塊的切面逐漸平整光滑起來(lái)。 (3)切片 當(dāng)樣品塊的切面平整光滑后便可正式切片。作為光鏡觀察用的半薄切片厚度一般控制在1-2m左右。(4)貼片 當(dāng)切到理想切片時(shí)，用尖頭鑷子夾住切片，并把切片釋放到滴有水滴的載玻片的水滴上，然后將載玻片放到烤片機(jī)上45烤片，當(dāng)載玻片上的水滴被烤干時(shí)切片就被貼在載玻片上。(5) 染色 將堿性品紅染液均