半邊旗中黃酮的提取工藝研究

1、半邊旗中黃酮的提取工藝研究                                 作者：呂應(yīng)年 鄧亦峰， 梁念慈【摘要】  目的確定提取半邊旗總黃酮的最佳工藝條件，并精制以提高黃酮的含量。方法采用正交實(shí)驗(yàn)法，考察溶劑用量、乙醇濃度、提取時(shí)間以及提取次數(shù)對(duì)半邊旗

2、中總黃酮溶出量的影響，確定最佳提取條件，然后對(duì)半邊旗總黃酮進(jìn)行精制，用高效液相色譜測(cè)定已知黃酮的含量。結(jié)果在所考察的因素中，對(duì)半邊旗總黃酮提取影響程度為乙醇濃度>提取次數(shù)>溶劑用量>提取時(shí)間，半邊旗總黃酮最佳提取條件為12倍用量80%乙醇回流提取2次、每次回流2 h，精制后半邊旗黃酮含量達(dá)到84.3%以上。結(jié)論 該工藝設(shè)計(jì)合理，操作簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低廉，有較高的生產(chǎn)應(yīng)用價(jià)值。 【關(guān)鍵詞】  半邊旗 黃酮 正交實(shí)驗(yàn) 精制Abstract:ObjectiveTo optimize the extraction conditions for flavonoids from

3、Pteris semipinnata L., and refine the flavonoids to improve the purity.  MethodsOptimized conditions including ethanol quantity, ethanol concentration , reflux duration and extraction times were determined by the orthogonal test. The flavonoids were refined with different solutions and the puri

4、ty was determined by HPLC. ResultsThe order of factors to affect the flavonoid extraction was ethanol concentration > extraction times > ethanol quantity > reflux duration. The best extraction technology was that 12-fold and 80% ethanol, refluxing for 2 hour at water bath and 2 times of ext

5、raction. The purity of refined flavonoids was up to 84.3%. ConclusionThis technology is simple,reasonable and the cost is lower, which is suitable for industralization.Key words：Pteris semipinnata L.;  Flavonoids;  Orthogonal test;   Refine半邊旗Pteris semipinnata L.，又名半邊蕨、半邊蓮、單邊旗，系

6、鳳尾蕨科植物，是一種南方常用草藥，始載于嶺南采藥錄，稱半邊旗。該植物有止血、生肌、解毒、消腫之功效，民間用于吐血、外傷出血、發(fā)背、疔瘡、跌打損傷、目赤腫痛等1。研究表明，半邊旗中含有揮發(fā)油、萜類、黃酮、皂苷等多種物質(zhì)2。有關(guān)半邊旗的藥效成分研究主要集中在萜類化合物3,4，半邊旗中黃酮類物質(zhì)的研究報(bào)道較少。黃酮類化合物是中草藥中一類重要的藥效成分，具有抗腫瘤、抗病毒、抗氧化、降血脂等廣泛的生物活性，天然黃酮主要以游離的苷元或與糖結(jié)合成糖苷的形式存在于植物中。本研究采用正交實(shí)驗(yàn)法考察溶劑用量、乙醇濃度、提取次數(shù)、提取時(shí)間對(duì)半邊旗總黃酮溶出量的影響，以確定最佳提取條件，并研究了半邊旗黃酮的精制方法，

7、為合理開(kāi)發(fā)利用半邊旗資源提供依據(jù)。1  器材島津LC-10A高效液相色譜儀(LC-10ATVP泵，SCL-10AVP控制器，SPD-10AVP紫外檢測(cè)器，CTO-10AVP柱溫箱)；紫外分光光度計(jì)(島津UV3101PC)；分析天平（Mettler, AE240）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海申越儀器公司）；四用紫外分析儀（上海顧村科學(xué)器材廠）。芹菜素和木犀草素標(biāo)準(zhǔn)品購(gòu)于天津尖峰植物提取物公司，甲醇為色譜純（TEDIA Company Inc. USA），提取及精制用乙醇、氯仿、醋酸乙酯均為分析純（廣州大華試劑公司），其他化學(xué)試劑均為分析純。半邊旗植物采收于廣東湛江郊區(qū)，經(jīng)廣東海洋大學(xué)楊燕君副教授

8、鑒定為半邊旗。2  方法與結(jié)果2.1  半邊旗總黃酮的測(cè)定1         2.2   半邊旗總黃酮的提取工藝考察由表 2 和表3分析結(jié)果可知，在半邊旗總黃酮的提取工藝中，各因素對(duì)提取效果的影響程度依次為B>C>A>D，且因素B（乙醇濃度）和C（提取次數(shù)）的影響具有統(tǒng)計(jì)意義，因此應(yīng)選B2和C2，確定最優(yōu)水平組合為A3B2C2D3，即溶劑為12倍量的80% 乙醇回流提取 2次、2 h/次。2.3  半邊旗黃酮的精制半邊旗黃酮的精制采用溶劑抽提法。稱

9、取上述粗黃酮適量，按重量比32混入硅藻土，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯進(jìn)行索氏抽提，分別抽提至無(wú)色，取醋酸乙酯溶液，減壓蒸干得棕黃色固體即為精制的半邊旗黃酮。2.4  半邊旗精制黃酮的測(cè)定采用峰面積歸一化法。以木犀草素和芹菜素混合溶液為對(duì)照品，以半邊旗精制黃酮為供試品，分別進(jìn)樣高效液相色譜。以供試品中木犀草素與芹菜素的面積和與供試品出峰總面積的比值確定供試品中的黃酮含量。    色譜條件：色譜柱Diamonsil C18 (150 mm×4.6 mm，5 )；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)283 nm；流動(dòng)相為甲醇-水溶液，按照甲醇含量 0100%梯度洗脫；流速

10、0.2 ml/min；柱溫為35。對(duì)照品溶液的配制：精密稱取木犀草素和芹菜素對(duì)照品各1m，置10l容量瓶中，加甲醇超聲溶解，定容至刻度，即為對(duì)照品溶液。供試品溶液制備：稱取精制的半邊旗黃酮約2 mg，置10 ml容量瓶中，加甲醇超聲溶解，定容至刻度，即為供試品溶液。吸取上述溶液5 l，分別進(jìn)樣高效液相色譜。色譜圖見(jiàn)圖12。經(jīng)峰面積歸一化法計(jì)算供試品中木犀草素與芹菜素的面積和與供試品出峰總面積的比值，計(jì)算得供試品中已知黃酮含量占84.3%。3  討論以總黃酮溶出量為考核指標(biāo)，半邊旗用乙醇提取有利于黃酮類化合物的溶出，提高溶劑乙醇的濃度，可加快半邊旗中總黃酮的溶出速度，從而使溶出量增加。

11、但溶劑乙醇濃度過(guò)高時(shí)，黃酮物質(zhì)的溶出量下降，這可能是溶劑乙醇濃度增加，反而使植物細(xì)胞脫水、皺縮，不易于溶脹破裂及總黃酮的溶出。    結(jié)合正交設(shè)計(jì)得出優(yōu)選的最佳因素水平為 12倍用量的80%乙醇溶劑回流提取 2次，2 h/次。正交統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明，提取時(shí)間因素的水平對(duì)總黃酮含量影響最小，從節(jié)能、考慮，樣品的提取工藝最終采用每次提取 1.5 h 為佳。    采用最佳工藝條件放大提取半邊旗，所得提取物中總黃酮溶出量達(dá)1.68 mg/g生藥，總黃酮的質(zhì)量分?jǐn)?shù)占11%。進(jìn)一步的研究表明該提取物中還含有脂溶性色素及萜類物質(zhì)，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別占5%和

12、78%。    半邊旗黃酮物質(zhì)主要是木犀草素、芹菜素及其結(jié)合的糖苷6，精制后的半邊旗黃酮成分含量占84.3%，達(dá)到新藥開(kāi)發(fā)的要求。有關(guān)藥理及臨床實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明木犀草素在體內(nèi)具有抗菌、抗病毒及降低血脂和膽固醇的作用7，芹菜素具有抗炎、降血壓、抗動(dòng)脈硬化和血栓癥、抗菌、抗病毒以及抗氧化作用等多方面的生物學(xué)活性8。因此開(kāi)展半邊旗黃酮的研究，為從該植物中開(kāi)發(fā)新型中藥提供了依據(jù)，有利于天然植物資源的綜合利用?！尽?#160; 1謝宗萬(wàn).全國(guó)中草藥名鑒M.北京：人民衛(wèi)生出版社, 1996：53.2Maurakami T, Tanaka N. Occurrence, struc

13、ture and taxonomic applications of ferm constituentsJ. Prog Chem Organic Nat Prod, 1988, 54：1.3張曉, 崔燎，田中信壽 ，等. 半邊旗有效成分及抗腫瘤活性研究J.藥學(xué)雜志，1997，32（1）：37.4Li JH, Cui L. Effects of antitum or compounds is isolated from Pteris semipinnata L on DNA topoisomerases and cell cycle of HL-60 cellsJ. Acta Phamacol Sin, 1999,20(6)：541.5傅玉萍，茍