八例范可尼貧血患兒的細(xì)胞遺傳學(xué)研究

1、    八例范可尼貧血患兒的細(xì)胞遺傳學(xué)研究        【摘要】目的研究范可尼貧血(FA)的臨床學(xué)、血液學(xué)和細(xì)胞遺傳學(xué)的特征。方法培養(yǎng)FA患兒的外周血淋巴細(xì)胞并以絲裂霉素C(MMC)誘導(dǎo)，以計(jì)數(shù)染色體自發(fā)斷裂和誘發(fā)斷裂，并計(jì)數(shù)姊妹染色單體互換(SCE)。結(jié)果FA患兒的臨床和血液學(xué)的表現(xiàn)是多樣化的。自發(fā)性和MMC誘發(fā)之染色體斷裂明顯高于正常。結(jié)論由于FA遺傳學(xué)上的異質(zhì)性，其遺傳表型也多樣化。因此，染色體斷裂研究是一個(gè)診斷FA的非常重要的方法，基因互補(bǔ)分析能證實(shí)患者所攜帶的是何

2、互補(bǔ)群。【關(guān)鍵詞】范可尼貧血染色體不穩(wěn)定性先天畸形致斷裂劑交連物CYTOGENETIC STUDY IN EIGHT CASES OF FANCONI ANEMIAZheng Yi*【Abstract】ObjectiveTo study the clinical, hematological and cytogenetical characteristics in Fanconi anemia(FA).MethodsCulture the peripheral lymphocytes with Mitomycin C(MMC) induction to count the chromosome

3、 breakages and to count the sister chromatid exchanges(SCE) in FA.ResultsThe clinical and hematological manifestations in FA varied at all.Spontaneous chromosome break and MMC induced break in FA were significantly higher than those in normal. Spontaneous and induced SCE were also higher in FA.Concl

4、usionOwing to genetic heterogeneity in FA, the phenotypes in FA are diversified also. So, chromosome breakage study is a very important method in the diagnosis of FA, and gene complementation analysis may identify which complementation group the patient carries.【Key words】Fanconi anemiaChromosome in

5、stabilityCongenital anomalyClastogenic agentsCross-linker范可尼貧血(Fanconi's anemia,FA)是常染色體隱性遺傳病，患者的外周血淋巴細(xì)胞培養(yǎng)或成纖維細(xì)胞培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)染色體有高度不穩(wěn)定性，自發(fā)斷裂增加，對(duì)一些DNA交連物質(zhì)(cross-linkers)如MMC，二環(huán)氧丁烷(diepoxybutane，DEB)等烷化劑有高度敏感性，能誘發(fā)染色體改變，19951998年，我們對(duì)部分原因不明的全血細(xì)胞減少患兒做了外周血淋巴細(xì)胞染色體檢查和骨髓檢查(骨髓未做染色體檢查)，發(fā)現(xiàn)8例患兒自發(fā)性染色體斷裂增加，MMC誘發(fā)試驗(yàn)出現(xiàn)大量染

6、色體改變和SCE增加，報(bào)告如下。1材料與方法1.1研究對(duì)象8例患兒臨床表現(xiàn)和血液學(xué)資料見(jiàn)表1。1.2方法按常規(guī)方法，每瓶培養(yǎng)基中分別加入0.2ml患兒外周血，37培養(yǎng)24小時(shí)后，分為4組作不同處理。(1)自身對(duì)照組，未加MMC和/或5-溴脫氧尿嘧啶核苷(BUdR)；(2)誘變組1：加入日本產(chǎn)MMC，最終濃度為80ng/ml；(3)誘變組2：加入BUdR，最終濃度為10g/ml，避光；(4)誘變組3：加入MMC及BUdR濃度同上，避光。4組均37繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí)，常規(guī)制片，鏡檢，每組各計(jì)數(shù)30個(gè)細(xì)胞。以同樣方法設(shè)正常人10例，求其平均值作為對(duì)照。2結(jié)果2.1臨床表現(xiàn)男女比為44，出現(xiàn)貧血和出血的

7、年齡均在510歲之間，貧血發(fā)展過(guò)程緩慢。身高體重都低于正常，隨著年齡增長(zhǎng)體格發(fā)育落后更為突出。4例皮膚有牛奶咖啡斑，1例有面部畸形、室間隔缺損(VSD)和甲狀腺功能低下(HT)，3例有小頭畸形(ME)。腹部B超、上肢X線片各查1例未見(jiàn)異常。兩例為同胞兄妹，均合并IDDM，因多次酮癥酸中毒和嚴(yán)重貧血而住院治療，其父母為近親婚配(染色體檢查未發(fā)現(xiàn)自發(fā)染色體斷裂)。 表1FA臨床和血液學(xué)表現(xiàn)Tab 1Clinical and hematologic manifestations of FACaseNo.(例號(hào))Clinical manifestations(臨床表現(xiàn))Hematologic exam

8、ination(血液學(xué)檢查)Sex(性別)Age(年齡)(year)Height(身高)(cm)Weigth(體重)(kg)HC(頭圍)(cm)Cafe aulait spots(咖啡斑)Complications(合并癥)Peripheral blood(外周血)Bone marrow examination(骨髓象)Hb(g/L)MCV(fl)MCH(pg)BPC(109/L)LC(%)ANC(109/L)M/ELCM(%)RBC(N/S)1male10.5118.52251.5-IDDM521124036431.50.35160.07MC2female610214.251-IDDM211

9、0026.129412.52.5152.05MC3female6.5-16-+-45963722581.671.8150.50MC4male6-20-+VSDHT421103248475.081351.50MC5female12-29-+-44914220770.480.7170.00MC6female121312749-ME501193420750.81318.54MC7male9-2548-ME541093418401.21.3171.00MC8male13-3048+ME941184032392.70.2182.50MCHC:head circumference(頭圍), LC:lymp

10、hocyte(淋巴細(xì)胞)，ANC：absolute neutrophil cell(中性粒細(xì)胞絕對(duì)值)，M/E：myeloid/erythorid(粒比紅)，M：megakaryocyte(巨核細(xì)胞)，N/S：number/slide(個(gè)/片)，IDDM：Insulin dependent diabetes millitus(胰島素依賴性糖尿病)，MC：macrocyte(巨紅細(xì)胞)，VSD：ventricular septal defect(室間隔缺損)，HT：hypothyroidism(甲狀腺功能降低)，ME：microencephaly(小頭畸形)2.2血液學(xué)表現(xiàn)外周血全血細(xì)胞減少，貧

11、血為重度(Hb60g/L)，MCV和MCH偏高，RBC大小不等，大細(xì)胞偏多，偶見(jiàn)巨大嗜多色RBC，中心淺染區(qū)不擴(kuò)大，ANC降低。骨髓檢查：骨髓增生減低，增生旺盛者主要為L(zhǎng)C，比值高達(dá)50%70%。粒、紅、巨核增生減低。晚紅偏大，偶見(jiàn)巨晚紅，花瓣樣晚紅，雙核晚紅。例4外周血WBC增加，單核細(xì)胞(MC)增加達(dá)13%19%，原幼MC 6%，骨髓為病態(tài)造血，原幼MC達(dá)17%，肝、脾浸潤(rùn)，符合骨髓增生異常綜合癥-慢性單核細(xì)胞白血病型(MDS-CMMOL)。2.3染色體檢查患兒染色體有多種改變，有單體互換，雙著絲粒，三射體和四射體(tri and quadriradial cross-configurat

12、ion)，內(nèi)復(fù)制(endoreduplication)，染色體單體斷裂和裂隙(break and gap)，尤以斷裂和裂隙較多。患兒染色體自發(fā)斷裂較正常對(duì)照高，以濃度為80ng/ml的MMC誘發(fā)，斷裂猛增，遠(yuǎn)高于正常對(duì)照和自發(fā)斷裂，BUdR試驗(yàn)SCE，自發(fā)SCE數(shù)較正常對(duì)照稍高，經(jīng)MMC誘發(fā)后亦較正常對(duì)照和自發(fā)SCE數(shù)增加(表2)。 表28例FA患兒染色體斷裂試驗(yàn)Tab 2Chromosome breakage test of FA patientsCase No.(例號(hào))Spontaneous(N/30 cells)自發(fā)(次/30個(gè)細(xì)胞)MMC induced(N/30 cells)MMC誘

13、發(fā)(次/30個(gè)細(xì)胞)Spontaneous SCE(mean/cell)自發(fā)SCE(平均次/細(xì)胞)MMC induced SCE(mean/cell)MMC誘發(fā)SCE(平均次/細(xì)胞)Break(斷裂)Gap(裂隙)Break(斷裂)Gap(裂隙)143201811.6200231231711.020031612-10.0200422-582-6rare-23-9-7rare-23-8-75-8.8-Control(對(duì)照)00467.613.03討論本組患兒體格形態(tài)(體態(tài))最常表現(xiàn)為矮小和牛奶咖啡斑，也是文獻(xiàn)報(bào)道中最常見(jiàn)的畸形，約占60%1，2。其它如骨骼、面部、泌尿生殖系、神經(jīng)、消化、心血管畸

14、形也常見(jiàn)3，本組發(fā)現(xiàn)面部畸形合并VSD和HT 1例，ME 3例。例1、例2為父母近親婚配生下的親兄妹，同患FA和IDDM，有人作糖尿病流行病學(xué)調(diào)查4，發(fā)現(xiàn)FA患者的親屬中，糖耐量試驗(yàn)異常、糖尿病的患病率高，并認(rèn)為FA患者攜有糖尿病易感基因。近年來(lái)用細(xì)胞融合雜交分析發(fā)現(xiàn)FA至少有5個(gè)遺傳互補(bǔ)群：FAAC，F(xiàn)ABC，F(xiàn)ACC，F(xiàn)ADC，F(xiàn)AEC5，6，有的做了基因的染色體定位，如FACC位于16q24.36，F(xiàn)ACC位于9q22.37，F(xiàn)ADC位于11q238。FA患者合并糖尿病和其家族中糖尿病患病率高的發(fā)現(xiàn)提示，F(xiàn)A的某些遺傳互補(bǔ)群可能與某些類型的糖尿病在遺傳學(xué)上有一定的關(guān)聯(lián)，此點(diǎn)尚待今后的研究

15、闡明。內(nèi)分泌研究發(fā)現(xiàn)某些FA患者的生長(zhǎng)激素降低，本組1例T3、T4降低，TSH正常表明為HT。FA的血液學(xué)特點(diǎn)：貧血出血多起病于510歲，全血細(xì)胞減少呈緩慢進(jìn)行性(慢性再障)，BPC減少先出現(xiàn)則易誤診為特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)。與ITP不同的是骨髓內(nèi)巨核細(xì)胞減少或消失。外周血RBC的特點(diǎn)是大小不等，體積偏大。巨大RBC偏多，中心淺染區(qū)不擴(kuò)大。骨髓示骨髓造血功能減低，特別是巨核細(xì)胞減少，有時(shí)見(jiàn)到骨髓有核細(xì)胞增生活躍實(shí)為L(zhǎng)C比值增加所致，紅系有巨幼樣變和病態(tài)造血3，需與MDS鑒別。FA的血液學(xué)也可首先表現(xiàn)為或后來(lái)轉(zhuǎn)變?yōu)镸DS或AML9，例4查體肝脾大，血液學(xué)也符合MDS-CMMOL。FA確

16、診有賴于染色體自發(fā)斷裂分析和致斷裂劑(clastogenic agents)對(duì)染色體的誘發(fā)斷裂試驗(yàn)，F(xiàn)A染色體改變有單體互換，三射體，四射體，雙著絲點(diǎn)，斷裂，裂隙及內(nèi)復(fù)制，據(jù)IFAR報(bào)告，自發(fā)染色體斷裂FA組為0.021.9/細(xì)胞(平均0.27)，非FA組為00.12/細(xì)胞(平均0.02)，經(jīng)DEB作用后，染色體斷裂，F(xiàn)A組為1.3023.90/細(xì)胞(平均8.96)，非FA組為00.36/細(xì)胞(平均0.06)2。Cervenk等10以交連物MMC作實(shí)驗(yàn)，結(jié)果與IFAR相似。本研究結(jié)果亦顯示自發(fā)斷裂FA高于對(duì)照，MMC誘發(fā)后斷裂明顯高于對(duì)照和自發(fā)斷裂。SCE分析是檢驗(yàn)染色體損傷的敏感方法，本組結(jié)

17、果FA患者SCE略高于正常對(duì)照，加入MMC后SCE顯著增加?？傊現(xiàn)A由于遺傳學(xué)上的異質(zhì)性，現(xiàn)已知至少有5個(gè)遺傳互補(bǔ)群，故在遺傳表型上也顯示多樣化，如體態(tài)發(fā)育異常的多樣化和血液學(xué)異常的多樣化，這些異?？蓡为?dú)出現(xiàn)，也可多種組合而聯(lián)合出現(xiàn)，如先天畸形合并再障就是經(jīng)典的FA，如體態(tài)無(wú)異常則僅有再障即稱為Estren-Dameshek綜合征。若體態(tài)異常而無(wú)或晚出現(xiàn)再障則有賴染色體檢查作出早期診斷。由于染色體的不穩(wěn)定性和易受致斷裂劑的損傷，故FA有罹患各種實(shí)體瘤的潛在素質(zhì)11。腫瘤出現(xiàn)可不伴體態(tài)和血液異常。因此應(yīng)對(duì)先天畸形，慢性再障，骨髓增生異常綜合征，急性髓細(xì)胞性白血病和實(shí)體瘤的患兒進(jìn)行染色體檢查，則

18、可能發(fā)現(xiàn)更多的染色體不穩(wěn)定病例。再者，對(duì)這些患者應(yīng)慎用各種交鏈藥物，以防對(duì)患者的染色體造成更大損傷。 作者單位：750004銀川，寧夏醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院兒科(鄭漪、鄭傳經(jīng)、石林)，遺傳學(xué)教研室(焦海燕、彭亮、墻克信)參考文獻(xiàn)1Giampietro PF, Adler-Brether B, Verlander PC, et al. The need for more accurate and timely diagnosis in Fanconi anemia: A report from the international Fanconi anemia registry (IFAR). Pedia

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