冷浸法提取丹參脂溶性部位工藝研究

1、冷浸法提取丹參脂溶性部位工藝研究    【摘要】  【目的】探討冷浸法提取丹參脂溶性部位的最佳工藝條件?！痉椒ā坎捎酶咝б合嗌V(HPLC)法為測(cè)定方法，以丹參酮A提取量為指標(biāo)，考察不同濃度乙醇和粉碎對(duì)丹參酮A提取率的影響，并用正交試驗(yàn)法進(jìn)一步優(yōu)選提取條件?！窘Y(jié)果】最佳提取工藝條件為采用8倍量體積分?jǐn)?shù)95%乙醇冷浸提取2次(每次3 h)，在這種條件下，可獲得較高的丹參酮A提取率?！窘Y(jié)論】此工藝條件簡(jiǎn)單、穩(wěn)定，提取率高。 【關(guān)鍵詞】  丹參/生產(chǎn)與制備;丹參/化學(xué);丹參酮A/分析;色譜法，高壓液相;正交試驗(yàn)丹參為唇形科植物丹參Salvi

2、a miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖，具有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩的功效1。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，丹參具有擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈，增加冠狀動(dòng)脈血流量，防止心肌缺血和心肌梗死，加快微循環(huán)血流，促進(jìn)毛細(xì)血管網(wǎng)開放，抑制心肌收縮，減少能量消耗，擴(kuò)張血管，降低膽固醇、血脂，抑制凝血，激活纖溶，穩(wěn)定紅細(xì)胞膜，提高缺氧耐受力，增加肝臟血流量，保護(hù)肝損傷細(xì)胞，抗肝纖維化，抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)以及消炎抗菌等作用2。其脂溶性成分具有抗菌、抗炎、抗氧化等藥理作用3。目前提取丹參脂溶性成分的方法主要有乙醇回流法和超臨界CO2萃取法4。丹參酮A是丹參脂溶性主要成分之一，丹參酮A對(duì)熱敏感，在提取制備過(guò)程中容易被破壞5，超

3、臨界CO2萃取法成本較高。冷浸提取法工藝簡(jiǎn)單，可室溫下操作且成本低。本文對(duì)冷浸法提取丹參中的脂溶性部位工藝進(jìn)行系統(tǒng)研究，旨在優(yōu)選最佳提取工藝條件，現(xiàn)報(bào)道如下。1儀器和試藥LC10AT高效液相色譜儀(日本島津);SPD10A紫外檢測(cè)器(日本島津);N2000工作站;丹參酮A對(duì)照品購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所(批號(hào)：0766200011);丹參購(gòu)自山東藥材市場(chǎng)，鑒定人為廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院關(guān)世俠副教授;甲醇為色譜純，購(gòu)自SIGMA公司;純水以雙蒸法自制。2方法與結(jié)果21對(duì)照品溶液的制備取丹參酮A對(duì)照品約10 mg，精密稱定，置25 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻;精密量取1 mL，置25 mL

4、量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。22色譜條件色譜柱：Kromasil C18柱(250 mm×46 mm);流動(dòng)相：甲醇水(體積比為7525);流速：1 mL/mim;檢測(cè)波長(zhǎng)：270 nm。在此條件下測(cè)定丹參酮A對(duì)照品及丹參提取物。23標(biāo)準(zhǔn)曲線分別吸取對(duì)照溶液25、50、75、100、150、200 L，注入液相色譜儀。以丹參酮A進(jìn)樣量(X)對(duì)峰面積(Y)進(jìn)行線性擬合，丹參酮A回歸方程為Y=4×106X，r=0999 4。結(jié)果表明：丹參酮A在0039 20313 6 g范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。24溶劑乙醇濃度選擇取8份丹參粉末(過(guò)3號(hào)篩)，每份約03 g，精密稱定后將每2份

5、分成1組，分別精密加入10 mL體積分?jǐn)?shù)為65%、75%、85%、95%的乙醇，冷浸5 h，濾過(guò)，收集續(xù)濾液，精密量取1 mL置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取5 L注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。計(jì)算藥材提取物中丹參酮A含量：p丹參酮A=m丹參酮A(g)/m藥材(g)×100%。表1結(jié)果顯示，體積分?jǐn)?shù)85%乙醇提取丹參酮A含量比體積分?jǐn)?shù)95%乙醇提取丹參酮A含量低125%,故本實(shí)驗(yàn)選擇體積分?jǐn)?shù)95%乙醇作為提取溶劑。25粉碎提取試驗(yàn)取同一批丹參藥材，一份粉碎(過(guò)3號(hào)篩)，一份切碎，再分別稱取3份，每份50 g，加8倍量體積分?jǐn)?shù)95%乙醇冷浸過(guò)夜，濾過(guò)，精密吸取1 mL

6、置10 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，分別精密吸取5 L注入液相色譜儀測(cè)定。結(jié)果見表2。兩組間比較無(wú)顯著性差異(P>005)。所以從節(jié)省能源上考慮，丹參藥材不必粉碎成粉末，只需切碎后進(jìn)行投料。26正交試驗(yàn)選用體積分?jǐn)?shù)95%乙醇作溶劑，取丹參50 g，共9份，按正交條件進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果見表3、表4表1溶劑乙醇濃度選擇試驗(yàn)結(jié)果表2粉碎提取試驗(yàn)結(jié)果表3因素水平表27方差分析將正交試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行方差分析。表5結(jié)果顯示，A(乙醇用量)、B(冷浸次數(shù))、C(冷浸時(shí)間)影響冷浸提取效果的因素順序?yàn)椋築>C>A，B因素對(duì)提取有顯著性影響，A因素和C因素對(duì)提取無(wú)顯著性影響，考慮到節(jié)省能源和時(shí)

7、間以有利于工業(yè)生產(chǎn)，因此確定提取工藝為A2B2C2，即用8倍量體積分?jǐn)?shù)95%乙醇冷浸提取2次，每次3 h。28工藝驗(yàn)證試驗(yàn)為考察上述優(yōu)選提取工藝的穩(wěn)定性，取丹參3份，每份50 g，按該工藝條件即藥材用8倍量體積分?jǐn)?shù)95%乙醇冷浸提取2次，每次3 h，分別測(cè)定丹參酮A提取量。結(jié)果見表6。按正交實(shí)驗(yàn)優(yōu)先的最佳工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，3次結(jié)果都處于較高水平，這說(shuō)明該提取工藝是穩(wěn)定可行的。表4正交水平表表5正交方差分析表6工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果3討論丹參脂溶性部位傳統(tǒng)提取方法是乙醇加熱回流，有效成分容易受破壞，而且提取得膏率高，影響藥物治療作用及制劑載藥量6;超臨界CO2萃取能在低溫下提取，且得膏率低，但生產(chǎn)成本

8、較高，加重生產(chǎn)廠家負(fù)擔(dān)7。冷浸法提取丹參脂溶性部位可以避免有效成分在加熱過(guò)程中被破壞，提取效率高，得膏率低，操作簡(jiǎn)單且成本低;脂溶性的丹參酮A分布于丹參藥材的皮層中，木質(zhì)部中沒有分布或分布甚微8，容易被體積分?jǐn)?shù)95%乙醇浸出，因此冷浸過(guò)程中丹參粉碎或切碎提取差異不顯著。本實(shí)驗(yàn)采用單因素法和正交設(shè)計(jì)法對(duì)丹參脂溶性部位的提取工藝進(jìn)行篩選，并考慮了節(jié)省能源和時(shí)間等因素，得出最佳工藝，即將丹參藥材切碎，用8倍量體積分?jǐn)?shù)95%乙醇冷浸2次，每3 h?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典S.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005:25.2鄭虎占，董澤宏，佘靖.中藥現(xiàn)代研究與應(yīng)用M.石家莊:河北醫(yī)科大學(xué)出版社,1999:1108.3程文君,張艷萍.丹參脂溶性成分抗菌消炎作用及其臨床應(yīng)用J.中國(guó)現(xiàn)代實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志,2007,3(6):61.4趙小亮,雷浩東,張繼.丹參有效成分提取的研究概述J.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(6):1795.5蘇子仁,劉中秋.丹參醇提液在濃縮、干燥工藝過(guò)程中的化學(xué)成分變化研究(I)丹參酮A濕熱降解機(jī)理探討J.中成藥,1997,19(1):5.6周昊,彭國(guó)平.丹參的傳統(tǒng)提取工藝與超臨界CO2萃取大孔樹脂聯(lián)用工藝的比較研究J.中華中醫(yī)藥學(xué)刊,200