生理學(xué)試驗(yàn)講義

1、生理學(xué)實(shí)驗(yàn)講義實(shí)驗(yàn)三 影響紅細(xì)胞滲透脆性及血液凝固的因素一、影響紅細(xì)胞滲透脆性的因素【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹?、本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)測定紅細(xì)胞滲透脆性的方法。2、加深對細(xì)胞外液滲透張力在維持紅細(xì)胞正常形態(tài)與功能重要性方面的理解。3、觀察不同因素對紅細(xì)胞滲透脆性的影響。 【實(shí)驗(yàn)原理】將紅細(xì)胞懸浮于等滲 NaCI 液中，其形態(tài)不變。假設(shè)置于低滲 NaCI 溶液中那么發(fā)生膨脹破裂，此現(xiàn) 象稱為紅細(xì)胞滲透脆性。但紅細(xì)胞對低滲鹽溶液具有一定抵抗力，其大小可用 NaCI 溶液濃度的 上下來表示。將血液滴入不同濃度的低滲 NaCI 溶液中，開始出現(xiàn)溶血現(xiàn)象的 NaCI 溶液濃度為 該血液紅細(xì)胞的最小抵抗力正常為 0.42-0.4

2、6%NaCI 溶液。出現(xiàn)完全溶血現(xiàn)象時的 NaCI 溶 液濃度為該紅細(xì)胞的最大抵抗力正常為 0.28-0.32%NaCI 溶液。前者代表紅細(xì)胞的最大脆性 最小抵抗力 ，后者代表紅細(xì)胞最小脆性 最大抵抗力 。生理學(xué)上將能使懸浮于其中的藥細(xì)胞 保持正常形態(tài)的溶液稱為等張溶液， 不能跨過細(xì)胞膜的微粒所形成的力， 但等滲溶液并不一定是 等張溶液如 1.9% 的尿素溶液 。【材料與方法】一、實(shí)驗(yàn)對象 家兔二、器械藥品： 試管架、 小試管 45 支、載玻片、 蓋玻片、 注射器、 8 號注射針頭、 棉簽， 1%NaCI 溶液、 0.85% 氯化鈉溶液、蒸餾水， 1.9% 尿素溶液、地塞米松、皂甙。三、方法與

3、步驟一配制不同濃度的低滲 NaCI 溶液 取口徑相同的干潔小試管 36 支，分別編號排列在三個試 管架上， 按下表分別向各試管內(nèi)參加 1%NaCI 溶液和蒸餾水混勻， 配制從 0.68-0.24%12 種不同 濃度的 NaCI 低滲溶液，每管總量均為 2.5ml 。表 7-1 不同濃度低滲氯化鈉溶液的配制試劑 試管編號1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 121%NaClml 1.7 1.6 1.5 1.4 1.3 1.2 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 蒸溜水 ml 0.8 0.9 1.0 1.1 1.2 1.3 1.4 1.5 1.6 1.7 1.8 1.9 Na

4、Cl 濃度 % 0.68 0.64 0.60 0.56 0.52 0.48 0.44 0.40 0.36 0.32 0.28 0.24 實(shí)驗(yàn)結(jié)果 皂甙 ml 另取 9 支小試管，在三個試管架中分別編號 13-15 ，分別參加 0.85%NaCI 溶液、 1.9% 尿素和蒸 溜水 2.5ml 。二采集標(biāo)本 家兔麻醉后，仰臥固定于兔手術(shù)臺上，別離一側(cè)頸總動脈或股動脈插管備放血 用具體方法參見第 章。依次向 15 支試管內(nèi)各加 1 滴，輕輕顛倒混均，切忌用力振蕩。先觀 察 13 、14、 15 管的變化，其他 12 管在室溫下放置 1 小時。【觀察指標(biāo)】 血液溶血情況，其現(xiàn)象可分為以下幾種：1、試管

5、內(nèi)液體完全變成透明紅色，說明紅細(xì)胞完全破裂，稱為完全溶血。2、試管內(nèi)液體下層為混濁紅色，上層無色透明，表示局部紅細(xì)胞沒有破壞，稱為不完全深血。3、試管內(nèi)液體下層為混濁紅色，上層無色透明，說明紅細(xì)胞完全沒有破壞?！居^察工程】1、觀察不同濃度低滲 NaCI混合液的顏色和透明度。2、比擬第一個試管架第 13、14、15管的溶血情況及第二、第三個試管架中與第一個試管架中對應(yīng)試管的溶血情況并分析其原因。【考前須知】1、 每支試管內(nèi)血液滴入量應(yīng)準(zhǔn)確無誤只加一滴。2、確保每支試管 NaCI溶液的濃度、容量一致。3、小試管必須清潔、枯燥。4、觀察結(jié)果時應(yīng)以白色為背景?！疽笈c思考】1、實(shí)驗(yàn)前要預(yù)習(xí)?機(jī)能實(shí)驗(yàn)指

6、導(dǎo)?與本實(shí)驗(yàn)有關(guān)的內(nèi)容。2、 復(fù)習(xí)和掌握生理學(xué)教材有關(guān)血液、滲透壓的概念以及紅細(xì)胞的形態(tài)、可塑變形性等根本知識。3、要掌握等滲、等張、最大脆性、最小脆性、最大抵抗力和最小抵抗力等根本概念。【作業(yè)題】1、為什么紅細(xì)胞在等滲的尿素溶液中迅速發(fā)生溶血？2、測定紅細(xì)胞滲透脆性有何臨床意義？3、同一個體的紅細(xì)胞的滲透脆性不一樣，為什么？二、影響血液凝固的因素【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹勘緦?shí)驗(yàn)以發(fā)生血液凝固的時間為指標(biāo)，向血液中參加或去掉某些因素或改變某些條件如溫度等，以觀察對血液凝固的影響?！緦?shí)驗(yàn)原理】血液流岀血管后很快就會凝固。血液凝固分為內(nèi)源性凝血系統(tǒng)與外源性凝血系統(tǒng)是指在組織因子的參與下血液凝固的過程。本實(shí)驗(yàn)直接

7、從動物動脈放血，由于血液幾乎沒有和組織因子接觸，其凝血過程主要由內(nèi)源性凝血系統(tǒng)所發(fā)動。血液凝固受許多因素的影響，凝血因子可直接影響血液凝固過程。溫度、接觸面的光滑程度等也可影響血液凝固過程?！静牧吓c方法】一、實(shí)驗(yàn)對象家兔二、 器材藥品 小燒杯、帶橡皮刷的玻棒或竹簽或小號試管刷、清潔試管10支、秒表、水浴 裝置一套、冰塊、棉花、石蠟油、肝素或草酸鉀、生理鹽水。三、方法與步驟一動物準(zhǔn)備 家兔麻醉后，仰臥固定于兔手術(shù)臺上，行一側(cè)頸總動脈或股動脈插管，備取血用。二試管的準(zhǔn)備 取8支干凈的小試管，按表 7-2準(zhǔn)備各種不同的實(shí)驗(yàn)條件。表7-2影響血液凝固的因素實(shí)驗(yàn)工程實(shí)驗(yàn)結(jié)果凝血時間不加其它物質(zhì)放棉花少許

8、用石蠟油潤滑試管內(nèi)外表C水浴糟中保溫于37冰水中加肝素8單位加草酸鉀 1-2mg 肺組織浸液 1ml三觀察指標(biāo) 凝血時間【觀察工程】1 、取兔動脈血 10ml ，注入兩個小燒杯內(nèi)，一杯靜置，另一杯用帶有橡皮刷的玻棒或竹簽也可 用小號試管刷輕輕攪拌，數(shù)分鐘后，玻棒或竹簽上結(jié)成紅色血團(tuán)。用水沖洗，觀察纖維蛋白形 狀。然后比擬兩杯的凝血情況。2 、準(zhǔn)備好的每支試管中滴入兔血 1ml ，觀察血液是否發(fā)生凝固及發(fā)生凝固的時間。 【考前須知】1、加強(qiáng)分工合作，記時須及時、準(zhǔn)確。最好由一位同學(xué)負(fù)責(zé)將血液參加試管，其它同學(xué)各掌握 1-2 支試管，每隔半分鐘觀察一次。2、試管、注射器及小燒杯必須清潔、枯燥。3、

9、每支試管參加的血液量要力求一致?！疽笈c思考】1、復(fù)習(xí)生理學(xué)教科書有關(guān)血液凝固的根本理論知識。2、弄清楚血液凝固對機(jī)體的利弊關(guān)系。3、試分析在本實(shí)驗(yàn)中有可能哪些因素影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果？如何克服這些因素？ 【作業(yè)題】1、肝素和草酸鉀皆能抗凝，其機(jī)理一樣嗎？為什么？2、如何加速或延緩血液凝固？試說明機(jī)理。3、分析上述各因素影響凝固時間的機(jī)制。4 、 正常人體內(nèi)血液為什么不發(fā)生凝固？5 、 如何認(rèn)識纖維蛋白原在凝血過程中的作用？ 第三次機(jī)能實(shí)驗(yàn)教學(xué)集體備課教案日期： 2002/3/8 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：心血管活動的神經(jīng)和體液因素調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)： 備課內(nèi)容：1 、 主講教師講課2 、 討論3 、 預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)方法：直接

10、進(jìn)行左側(cè)頸總動脈插管，將動脈血壓的變化經(jīng)壓力換能器轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘枺?MS-302 系統(tǒng)下記錄并觀察改變神經(jīng)體液因素的情況下動脈血壓和心率的變化。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如下：實(shí) 驗(yàn)工程 血壓kPa 心率次/分實(shí)驗(yàn)前 實(shí)驗(yàn)后 實(shí)驗(yàn)前 實(shí)驗(yàn)后1 正常觀察 15.35 3002 牽拉左側(cè)頸總動脈15.3613.57 300 2683 夾閉右側(cè)頸總 A 14.00 15.45 297 3304 刺激右側(cè)減壓 N 完整 16.2114.10312240刺激減壓 N 中摳端 16.2114.10296249刺激減壓 N 外周端 16.2116.212862865刺激右側(cè)頸迷走N 外周端15.9612.42305607

11、刺激左側(cè)頸迷走N 外周端15.6714.752831978 . i.v.腎上腺素15.7018.882953608 i.v. 腎上腺素15.7018.882953609 i.v. 乙酰膽堿實(shí)驗(yàn)討論：16.8612.2731085由上述結(jié)果可看出；一級波；心搏波，二級波；呼吸波，三級波；血管運(yùn)動波，牽拉左側(cè)頸總動 脈，動納脈血壓下降， 心率變慢， 夾閉右側(cè)頸總動脈， 動脈血壓升高， 心率變快， 刺激減壓神經(jīng)， 動脈血壓下降， 心率變慢， 刺激減壓種經(jīng)外周端， 無變化， 刺激迷走神經(jīng)外周端， 動脈血壓下降， 心率減慢，靜脈注射腎上腺素，動脈血壓先升后降，逐漸恢夏正常，心率增快，靜脈注射乙酷膽 堿，

12、動脈血壓下降，心率變慢至停搏。分析：1正常動脈血壓波形曲線可見；一級波；心跳波，是心室舒縮引起的血壓波動，心縮時上升，心舒下降。 頻率與心率一致。 二級被； 呼吸時胸腔擴(kuò)大與縮小引起的血壓波動呈現(xiàn)呼吸節(jié)律一致周 期性變化。吸氣時先降后升，呼氣時先一口后降。一個二級波周期內(nèi)可見多個與心率一級波，吸氣時，靜脈回流加速，但吸氣時，胸腔內(nèi)大靜脈。肺血管擴(kuò)張，容量增大，局部血滯留，故吸氣 初由肺靜脈回左心血量暫時下降，左心搏出量暫時下降，動脈血壓暫時下降。吸氣后期，胸內(nèi)壓更負(fù)，促進(jìn)靜脈回流，左心搏出量增多，動脈血壓上升。呼氣時，反之亦然。其次，由于呼吸中 樞對心中樞的影響， 吸氣時心率稍快， 呼氣時心率

13、較慢， 心率的變化也會引起血壓的改變。 最后， 呼吸中樞對縮血管中樞的影響，吸氣時，縮血管中樞興奮，引起小血管收縮。，動脈血壓升高。反之亦然。三級波，可能系血管中樞的周期性緊張性活動有關(guān)。2正常時，心臟射血經(jīng)主動脈弓、頸總動脈而到達(dá)頸動脈竇。當(dāng)血壓升高時，該處動脈管壁受 到機(jī)械牽張而擴(kuò)張，從而使血管壁外膜上作為壓力感受器的感覺神經(jīng)末梢興奮，引起降壓反射， 使血壓下降。當(dāng)竇內(nèi)壓降低，低于壓力感受器的閾值時，感受器無沖動上傳，降壓反射停止，血 壓將升高。 在實(shí)驗(yàn)中夾閉一例頸總動脈后， 心室射出的血液不能流經(jīng)該側(cè)頸動脈竇， 使竇內(nèi)壓力 降低，壓力感受器受到刺激減弱，經(jīng)竇神經(jīng)上傳中樞的沖動減少，降壓反

14、射活動減弱， 因而心率加快、心縮力加強(qiáng)、回心血量增加(因容量血管收縮 )、心輸出量增加；阻力血管收縮，外周阻力增加。導(dǎo)致動脈血壓升高。在試驗(yàn)中，牽拉左側(cè)頸總動脈后，竇內(nèi)壓增加，頸動脈竇受到刺激增 強(qiáng)，經(jīng)竇神經(jīng)傳入沖動增多，降壓反射活動增強(qiáng)，心率減慢，心縮力減弱，回心血量減少，外周 阻力減小。導(dǎo)致動脈血壓下降。3. 主動脈弓壓力感受器的傳入纖維一般均在迷走神經(jīng)中上傳入中樞，但家兔主動脈弓壓力感受 器的傳入纖維卻自成一束， 在頸部與迷走神經(jīng)及頸交感神經(jīng)伴行， 稱之為主動脈神經(jīng)或減壓神經(jīng)。 所以， 電刺激完整的減壓神經(jīng)或切斷后的向中端， 其傳入沖動相當(dāng)于壓力感受器的興奮， 可引起 降壓反射而使動脈血

15、壓下降。 減壓神經(jīng)是單純的傳入神經(jīng)， 故刺激其外周端對動脈血壓無影響。4. 刺激心迷走神經(jīng)外周端即刺激到心臟的迷走神經(jīng)纖維，這些纖維末梢釋放的遞質(zhì)是乙酰膽堿(ACh)，ACh與心肌細(xì)胞膜上的 M膽堿受體結(jié)合，可導(dǎo)致心率減慢，心房肌收縮力減弱，心房肌 不應(yīng)期縮短，房室傳導(dǎo)速度減慢，甚至出現(xiàn)房室傳導(dǎo)阻滯，即負(fù)性變時、變力和變傳導(dǎo)效應(yīng)。一 般說，右側(cè)迷走神經(jīng)以支配竇房結(jié)為主，而左側(cè)迷走神經(jīng)那么主要支配房室傳導(dǎo)系統(tǒng)。在實(shí)驗(yàn)中， 刺激外周端右側(cè)迷走神經(jīng)，其末梢釋放的ACh 一方面使竇房結(jié)細(xì)胞在復(fù)極過程中K'外流增加，結(jié)果使最大復(fù)極電位絕對值增大；另一方面，其4期K通透性的增加使lx衰減過程減弱，

16、自動去極速度減慢。這兩種因素均使竇房結(jié)自律性降低，心率因而減慢。刺激強(qiáng)度加大時，可出現(xiàn)竇性停搏，使血壓迅速下降。刺激去除后，血壓上升。刺激左側(cè)迷走神經(jīng)外周端也可使血壓下降， 但主要是由于 ACh抑制房室交界區(qū)細(xì)胞膜上的Ca2通道，減少Ca2內(nèi)流，使其動作電位幅度減小，興奮傳導(dǎo)速度減慢，出現(xiàn)房室傳導(dǎo)阻滯而減慢心率， 進(jìn)而使血壓下降。故刺激左側(cè)迷走神經(jīng) 出現(xiàn)的心率減慢及血壓下降的程度均不如刺激右側(cè)時明顯，因而實(shí)驗(yàn)時多項(xiàng)選擇用右側(cè)迷走神經(jīng)。5靜脈注射腎上腺素，血壓先升高后降低然后逐漸恢復(fù)。這是因?yàn)殪o脈注射腎上腺素后，開始濃度較高，對心臟和 a 受體占優(yōu)勢的血管發(fā)生作用，使心跳加快心肌收縮力加強(qiáng)，心輸

17、出量增多， 皮膚、腎和胃腸等內(nèi)臟血管收縮，所以血壓升高。隨著血中腎上腺素的代謝，其濃度逐漸降低，對a受體占優(yōu)勢的血管作用減弱，而對B受體占優(yōu)勢 的骨胳肌.肝臟、冠脈血管發(fā)生作用， 使之?dāng)U張，引起血壓下降，最后逐漸恢復(fù)正常。6靜脈注射乙酰膽堿，引起血壓下降。因?yàn)橐阴Ｄ憠A作用于心臟的M受體，引起心率減慢至停搏，心肌收縮力減弱，房室傳導(dǎo)減慢甚至阻滯，心輸出量明顯減少，血壓下降。其次，乙酰膽堿 還作用于血管內(nèi)皮的 M 受體，使血管內(nèi)皮細(xì)胞釋放 松弛因子 ，引起血管平滑肌舒張，外周阻 力下降，這也血壓下降的機(jī)制之一。最后，ACH 激活交感神經(jīng)的突觸前 M-R ，產(chǎn)生突觸前調(diào)制效應(yīng)，致交感神經(jīng)末捎釋放去甲

18、腎減少， 從而減少交感縮血管緊張效應(yīng)。 這不但可降低外周阻力， 減少心輸量，還可擴(kuò)張容量血管而減少循環(huán)血量。因而血壓下降。綜上所述：減壓反射是動脈血壓調(diào)節(jié)的重要反射之一， 心血管活動受自主神經(jīng)及體液因素的調(diào)控。實(shí)驗(yàn)教學(xué)集體備課教案日期： 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：刺激頻率與骨骼肌收縮的關(guān)系備課內(nèi)容：1 、主講教師講課2 、討論3 、預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)會使用 MS302 生物信號記錄分析，系統(tǒng)觀察不同頻率的刺激對蟾蜍坐骨神經(jīng)腓腸 肌標(biāo)本所引起的肌肉收縮形式。實(shí)驗(yàn)對象：蟾蜍實(shí)驗(yàn)方法： 將蟾蜍的坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本固定在張力換能器上 ,使用 MS302 系統(tǒng)調(diào)節(jié)不同的刺激 頻率，記錄骨骼肌收縮曲線。實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 注：

19、每個波形所用實(shí)驗(yàn)參數(shù)見下表 波形編號 刺激方式 波寬 ( ms ) 刺激強(qiáng)度v ) 波間隔 ( ms ) 增益 (mv/cm) 顯速 (mm/s) 頻率(Hz)1 單次 0.1 2.0( 閾上 ) 2 250 2 單次 0.1 2.0( 閾上 ) 8 25 3 連續(xù)雙次 0.1 2.0(4 連續(xù)雙次 0.1 2.0(5 連續(xù)雙次 0.1 2.0(6 連續(xù)雙次 0.1 2.0(7 連續(xù)雙次 0.1 2.0(閾上 ) 2.0 8 25 476.2 閾上 ) 3.0 8 25 322.6 閾上 ) 4.0 8 25 243.9 閾上 ) 50.0 8 25 20.0 閾上 ) 80.0 8 25 1

20、2.58 連續(xù) 10 次 0.1 2.0 閾上 80.0 8 25 12.59 連續(xù) 50 次 0.1 2.0 閾上 20.0 16 25 49.8討論與結(jié)論： 由實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出， 給坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本施加不同方式的電刺激， 骨骼肌的收縮可表現(xiàn)出多 種形式。給單個電刺激時，可以記錄到一個收縮舒張曲線曲線1 、2，這種收縮方式稱為單收縮，這種收縮曲線稱為單收縮曲線， 從曲線 1 上可以看出單收縮曲線分為三個時相ab、b c、c d,其中ab段為施加刺激到肌肉開始收縮縮短之前的一段時間即潛伏期，bc段為肌肉開始收縮縮短到收縮結(jié)束的一段時間即收縮期，cd 段為肌肉開始舒張到舒張結(jié)束的一段時間即舒張

21、期。給連續(xù)刺激時，有可能發(fā)生肌肉收縮波形的融合如曲線5、6、7、8、9、，也有可能只引起一次單收縮而不發(fā)生波形融合如曲線3、4，如果波形發(fā)生融合，肌肉的收縮形式就稱為復(fù)合收縮，復(fù)合收縮以分為不完全性強(qiáng)直收縮和完全性強(qiáng)直收縮，從曲線7、8 可以看出，第二次刺激落到了第一次刺激引起的肌肉收縮舒張曲線的下降支即舒張期內(nèi)，這種復(fù)合收縮稱為不完全強(qiáng)直收縮，從曲線5、6、9 可以看出第二次落到了第一次刺激引起的肌肉收縮舒張曲線的上升支即收縮期內(nèi)， 這種復(fù)合收縮稱為完全性強(qiáng)直收縮， 而且從曲線圖上還可以看出復(fù)合收縮 時，后一次肌肉收縮的幅度通常比前一次幅度大。本實(shí)驗(yàn)將電刺激直接施加到神經(jīng)干上， 它引起肌肉收

22、縮應(yīng)該經(jīng)歷以下過程： 閾上刺激施加到坐骨 神經(jīng)干上， 引起神經(jīng)干興奮爆發(fā)動作電位， 產(chǎn)生的動作電位沿神經(jīng)傳導(dǎo)至神經(jīng)纖維末稍接頭前膜， 激活接頭前膜電壓門控式 Ca2+ 通道并開放， Ca2+ 進(jìn)入末稍內(nèi)帶動含有神經(jīng)遞質(zhì)的囊泡向接頭 前膜移動、靠近，囊泡膜與接頭前膜融合，然后釋放出神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿，乙酰膽堿與接頭后膜 上的受體結(jié)合，激活接頭后膜的化學(xué)門控式通道的活性，Na+內(nèi)流，K+外流，其中以 Na+內(nèi)流為主， 骨骼肌運(yùn)動終板膜去極化， 產(chǎn)生終板電位， 終板電位經(jīng)總和到達(dá)閾電位水平時爆發(fā)動作電 位，動作電位將傳遍整個細(xì)胞膜，當(dāng)動作電位傳到橫管，通過三聯(lián)管結(jié)構(gòu)，終將影響到縱管膜對Ca2+ 的通透

23、性，鈣通道開放， Ca2+ 從縱管向肌漿釋放，肌漿中 Ca2+ 濃度迅速上升， Ca2+ 與肌 鈣蛋白結(jié)合，啟動肌絲滑行過程，肌肉收縮張力不斷增大，當(dāng)肌張力增大到等于后負(fù)荷 換能器彈簧片的反作用力時等長收縮 ，肌肉長度開始縮短，從施加刺激至神經(jīng)干上到肌肉長度開 始縮短之前，所發(fā)生的這些過程是潛伏期ab 段產(chǎn)生的原因。肌肉長度開始縮短，收縮曲線離開基線開始上升直至收縮結(jié)束曲線頂峰，即收縮期，肌張力不再增加，屬于等張收縮曲線1 的 bc 段。進(jìn)入舒張期，由于肌漿網(wǎng)上鈣泵作用加強(qiáng)，肌漿中的Ca2+ 又被泵回肌漿網(wǎng)中，肌漿中的 Ca2+ 濃度降低， Ca2+ 與肌鈣蛋白解離，肌鈣蛋白分子構(gòu)型恢復(fù)到以前

24、狀態(tài)，導(dǎo)致原 肌寧蛋白分子構(gòu)型也恢復(fù)到以前狀態(tài)再次占據(jù)肌纖蛋白分子上的結(jié)合位點(diǎn)粗細(xì)肌絲解離，所有粗細(xì)肌絲全部解離，肌肉舒張曲線再次回到基線，此為舒張期曲線1的cd段，舒張期歷時較收縮期稍長。本實(shí)驗(yàn)在記錄曲線 3、4、5、6、7 時，采用連續(xù)雙次刺激，調(diào)節(jié)兩次刺激的刺激間隔，使其由 小到大，從本記錄結(jié)果可以看出，當(dāng)兩次刺激的刺激間隔小于3ms 時，連續(xù)雙次刺激記錄的肌肉收縮曲線與單收縮曲線完全一樣曲線3、4，這說明標(biāo)本對連續(xù)雙次刺激的第二次刺激未發(fā)生反響， 其原因是第二次刺激落在第一次刺激產(chǎn)生的動作電位的不應(yīng)期內(nèi)，當(dāng)刺激間隔大于 3ms時，連續(xù)雙次刺激記錄的肌肉收縮曲線與單收縮曲線形態(tài)不再相同，

25、從曲線5、6 可以看出波形只有一個， 但幅度較單收縮曲線高， 其原因是發(fā)生了收縮期的復(fù)合收縮， 由于第一次刺激引起的 肌肉收縮還沒完成，第二次刺激又引起Ca2+從肌漿網(wǎng)向肌漿中釋放，使肌漿中Ca2+濃度進(jìn)一步升高，這也是所有復(fù)合收縮曲線幅度逐漸升高的直接原因。從曲線7 可以看出，第二次刺激引起的肌肉收縮落在第一次刺激引起肌肉收縮的舒張期，出現(xiàn)一個鋸齒波。本實(shí)驗(yàn)記錄曲線 8、9 采用連續(xù)屢次刺激，記錄復(fù)合收縮曲線。曲線8 用連續(xù) 10 次、刺激間隔為 80ms 的連續(xù)刺激， 從曲線上可以看出逐漸增高的 10 個鋸齒波相互融合 舒張期融合 ，即不 完全強(qiáng)直收縮，曲線 9 用連續(xù) 50 次、刺激間隔

26、為 20ms 的連續(xù)刺激，從曲線上可以看出融合的 波形平滑無鋸齒且收縮幅度上升最明顯，收縮張力最大收縮期融合 ，此即完全性強(qiáng)直收縮。 通過上述分析討論， 我們可得出這樣的結(jié)論： 使用不同的刺激方式， 骨骼肌和收縮形式可分為單 收縮和復(fù)合收縮， 隨著刺激頻率的不斷增高， 復(fù)合收縮又可分為不完全性強(qiáng)直收縮和完全性強(qiáng)直 收縮，且以完全性強(qiáng)直收縮的肌肉收縮張力最大，作功能力最強(qiáng)?？记绊氈?. 保持坐骨神經(jīng)腓腸肌標(biāo)本活性加任式液、不要用手和器械夾捏2. 刺激時間和強(qiáng)度一定按要求給予。3. 刺激后要讓標(biāo)本恢復(fù) 5 分鐘。實(shí)驗(yàn)八 化學(xué)因素及藥物對小腸活動的影響實(shí)驗(yàn)?zāi)康模? 、 觀察哺乳動物動物胃腸平滑肌的

27、一般特性及某些理化因素對它的影響。2 、 學(xué)習(xí)哺乳動物離體器官灌流方法。 實(shí)驗(yàn)原理：消化道平滑肌具有自動節(jié)律性、收縮性，對某些藥物、理化因素及牽拉敏感。小腸離 體后置于適宜環(huán)境中，改變其所處環(huán)境的理化因素、某些藥物濃度，其收縮會發(fā)生相應(yīng)改變。 實(shí)驗(yàn)對象：家兔器械藥品：見?機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué)? 147 頁。實(shí)驗(yàn)方法： 取一段家兔十二指腸，固定于離體器官恒溫灌流裝置， BL-420 系統(tǒng)記錄分析在藥物等因素影響 下離體小腸平滑肌收縮情況。1、 標(biāo)本制備：擊昏家兔，從幽門與十二指腸交界處取腸管30厘米，洗凈；分成2-3厘米數(shù)段，兩端系線，保存于供氧的38 C臺氏液中備用。2、儀器連接與調(diào)試： 標(biāo)本連接 BL

28、-420 軟件使用3、觀察指標(biāo)：小腸平滑肌收縮的節(jié)律性、幅度及張力。4 、 觀察工程：共七項(xiàng)，見?機(jī)能實(shí)驗(yàn)學(xué)? 148 頁。考前須知：1 、 連接標(biāo)本時，連線必須垂直，并且不得與周圍接觸。2、 實(shí)驗(yàn)中，腸管必須完全浸入臺氏液中，并且保證標(biāo)本的供氧和恒溫38 °Co3、每次加藥現(xiàn)象明顯后，應(yīng)立即放掉臺氏液，屢次沖洗后參加新的臺氏液。4、每項(xiàng)記錄結(jié)果前必須有對照記錄曲線。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：暫缺實(shí)驗(yàn)討論：1 、正常情況下，我們觀察到離體小腸平滑肌在臺氏液中可以自動地、緩慢地收縮，但其節(jié)律性很不規(guī)那么。小腸平滑肌自律性產(chǎn)生的離子根底尚未完全清楚，目前認(rèn)為，它的產(chǎn)生可能與細(xì)胞膜上生電性鈉泵的活動具有波

29、動性有關(guān)， 當(dāng)鈉泵的活動暫時受抑制時， 膜便發(fā)生去極化； 當(dāng)鈉泵活 動恢復(fù)時，膜的極化加強(qiáng)，膜電位便又回到原來的水平。2、在浴槽中參加 0.01% 乙酰膽堿 Ach 2 滴約 0.2ml 后，可見離體腸管活動增強(qiáng)，描記 曲線岀現(xiàn)收縮頻率變快，幅度增加。岀現(xiàn)上述現(xiàn)象的機(jī)理，目前認(rèn)為與消化道平滑肌細(xì)胞產(chǎn)生動 作電位的離子根底是 Ca2+的內(nèi)流有關(guān)。乙酰膽堿可與肌膜上的 M受體結(jié)合，使得兩類通道開放： 一類為電位敏感性 Ca2+專用通道，另一類為特異性受體活化Ca2+專用通道。前一類通道對 Ach敏感，小劑量 Ach 即引起開放；后一類通道對 Ach 相對不敏感，只有大劑量 Ach 才會引起開放。

30、這兩類通道開放都使得肌漿中Ca2+增高，進(jìn)而激活肌纖蛋白 一肌凝蛋白ATP系統(tǒng)，使平滑肌收縮，肌張力增加。3、在浴槽中參加 0.01% 腎上腺素 2 滴約 0.2ml 后，可見離體腸管活動減弱，描記曲線出現(xiàn)收縮頻率變慢，幅度減少以及基線下移。岀現(xiàn)上述現(xiàn)象的機(jī)理，目前認(rèn)為與腸肌細(xì)胞膜上存在a和B兩中受體，a受體又分為 a抑制型受體和 a興奮型受體有關(guān)。腎上腺素作用于 a抑制型受體， 引起腸肌膜上一種特異性受體活化，使 K+ 外流增多，細(xì)胞膜發(fā)生超極化，腸肌興奮性降低，肌張力下降。同時，腎上腺素還作用于B受體，它的激活引起腸肌細(xì)胞膜中的CAMP合成增多，CAMP激活腸肌膜及肌漿網(wǎng)上 Ca2+泵活動

31、，使肌漿中Ca2+濃度降低，亦使肌張力降低； B受 體激活后還促使 K+ 及 Ca2+ 外流增加，加速膜的超極化，促進(jìn)了腸肌肌張力的減低。4、在浴槽中參加 2%氯化鈣溶液 2滴后，離體腸管活動增強(qiáng)，描記曲線岀現(xiàn)收縮幅度增加。這是因?yàn)閰⒓勇然}后，細(xì)胞外液Ca2+濃度升高，那么Ca2+內(nèi)流增加，使得細(xì)胞內(nèi)液中 Ca2+濃度升高， Ca2+ 與鈣調(diào)蛋白結(jié)合增加，促進(jìn)了橫橋的激活。因而收縮力增加。5、在浴槽中參加 1mol/L 鹽酸溶液 2 滴后，離體腸管活動減弱，描記曲線岀現(xiàn)收縮幅度降低，頻率變慢。岀現(xiàn)這一現(xiàn)象，目前認(rèn)為其原因在于：細(xì)胞外H+升高時，Ca2+通道的活性受到抑制，使得Ca2+內(nèi)流減少

32、。H+升高能干擾肌肉的代謝和肌絲滑行的生化過程：H+能與Ca2+競爭鈣調(diào)蛋白的結(jié)合位點(diǎn)而使肌球蛋白 ATP 酶活性降低近期有理論認(rèn)為是直接抑制作用而非 競爭作用；使肌原纖維對 Ca2+ 的敏感性和 Ca2+ 從肌質(zhì)網(wǎng)的釋放量減少。6、 在加鹽酸使平滑肌收縮減弱的根底上，再加2 滴 NaOH 于浴槽中，那么腸管活動岀現(xiàn)相反的情況，即腸管活動增強(qiáng)。 原因在于NaOH可以中和H+，改變了細(xì)胞外液的 PH值，PH過高、過低， 收縮幅度及張力都會降低，最適PH時收縮效果最好。7、 浸浴小腸腸管的臺氏液溫度以38 C40 C為宜，低于或高于這個溫度，都會影響結(jié)果。因?yàn)槟c管平滑肌對溫度改變極為敏感，當(dāng)溫度降

33、到30 C以下時，由于代謝水平的降低，興奮性減弱，可岀現(xiàn)收縮曲線基線下移， 頻率變慢，收縮幅度變小。有時可能會見到基線先上移后下降的現(xiàn)象。 這是因?yàn)榻禍乇旧韺δc管是一種刺激， 也可短暫地加強(qiáng)代謝活動， 所以肌張力升高。當(dāng)溫度高于 40 C時，由于酶活性提高，各離子通道活性增加，使得基線上移，收縮頻率增高。當(dāng)然，如果臺氏液溫度過高50 C以上，可因蛋白變性，使腸管收縮功能消失。結(jié)論：1、消化道平滑肌具有自律性，但其收縮緩慢，節(jié)律性不規(guī)那么。2、消化道平滑肌具有一定的緊張性。3、 消化道平滑肌的活動易受溫度、PH 值及其它化學(xué)因素、藥物因素的影響。第十三次實(shí)驗(yàn)集體備課教案日期： 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容：遞質(zhì)及化

34、學(xué)因素對心臟活動的影響蛙心灌流備課內(nèi)容：1、教師講課2、討論3 、 預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn) 一、講解要求：1、學(xué)生預(yù)講2、板書下列圖講解手術(shù)操作要點(diǎn)3、操作考前須知(1) 、將心臟離體時，為了確保實(shí)驗(yàn)的成功率，手術(shù)中勿傷及靜脈竇。(2) 、在左主動脈剪口前，應(yīng)根據(jù)蛙心插管尖端長短及蟾蜍心臟的大小來決定剪口的位置，不可 過高或過低。(3) 、蛙心插管插入心室看見心室血液射出后，應(yīng)立即用任氏液將血液及血凝塊置換，直到蛙心 插管內(nèi)溶液顏色呈無色透明后再結(jié)扎固定蛙心插管。(4) 、滴管專管專用，參加試劑后應(yīng)立即用滴管輕輕攪勻。(5) 、每次換液時，蛙心插管內(nèi)液面高度應(yīng)保持一致。、換液時滴管勿碰撞蛙心插管，以免松動張

35、力換能器連接絲線。(7) 、每個處理工程出現(xiàn)效應(yīng)后應(yīng)立即更換任氏液數(shù)次，須待心跳恢復(fù)正常后，再進(jìn)行下一項(xiàng)實(shí) 驗(yàn)。、經(jīng)常向心臟外表滴加少量任氏液，以防標(biāo)本枯燥。4、儀器的連接與使用(參數(shù)設(shè)置) 二、實(shí)驗(yàn)總結(jié)：1、扼要總結(jié)本次實(shí)驗(yàn)課情況。2、課堂提問記分3、實(shí)驗(yàn)報告書寫要求(以下內(nèi)容僅供參考)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩W(xué)習(xí)蛙心的灌流方法， 觀察灌流液中幾種離子濃度的改變、酸堿、腎上腺素、 Ach 對心臟活動的影響。實(shí)驗(yàn)對象：蟾蜍實(shí)驗(yàn)方法：用 MS302 或 BL410 生物信號處理系統(tǒng)，記錄蟾蜍離體心臟在幾種離子濃度改變、酸 堿、腎上腺素、 Ach 作用時心臟活動曲線的幅度及頻率變化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：討論與結(jié)論：由實(shí)驗(yàn)

36、所記錄的曲線結(jié)果可以看出， 改變蟾蜍離體心臟的灌流液成份， 可影響其心臟的舒縮節(jié)律 和幅度。1 用任氏液灌流心臟， 可以保持較長時間的節(jié)律性舒縮活動。這是因?yàn)槿问弦旱闹饕x子成 份、滲透壓、 PH 值和蟾蜍細(xì)胞外液相近，為蛙心提供了一個適宜的理化環(huán)境。2 用 0.65%NaCl 溶液灌流心臟， 其心跳減弱。 心肌的收縮活動是由 Ca2+ 觸發(fā)的， 由于心 肌細(xì)胞的肌漿網(wǎng)不興旺， 故心肌收縮的強(qiáng)弱與細(xì)胞外 Ca2+ 濃度呈正比。 用 0.65%NaCl 溶液 灌流蛙心，灌注液中缺乏 Ca2+ ，以致心肌動作電位 2 期內(nèi)流 Ca2+ 減少， 心肌收縮活動也隨之 減弱。3 用高鉀任氏液灌注心臟時，

37、 心跳明顯減弱， 甚至出現(xiàn)心臟停到舒張狀態(tài)。因?yàn)椋寒?dāng)細(xì)胞外 K+ 濃度顯著增高時， 膜內(nèi)外的鉀離子濃度梯度減小， 靜息電位的絕對值過度減小 (膜 內(nèi)達(dá)-55mv左右時，Na+通道失活),心肌的興奮性完全喪失，心肌不能興奮和收縮，停止于舒張狀態(tài)。長時間用， 心臟最終會停止收縮。4 用高 Ca2+ 任氏液灌流蛙心時， 心收縮力增強(qiáng)， 舒張不完全， 以致收縮基線上移。 在 Ca2+ 濃度高的情況下， 會停止在收縮狀態(tài)， 這種現(xiàn)象稱之為 “鈣僵 。 心肌的舒縮與心肌肌漿 網(wǎng)中 Ca2+ 濃度上下有關(guān)。 當(dāng)鈣離子濃度升高到一定水平 (10-5M) 時， 作為鈣受體的肌鈣蛋白 結(jié)合了足夠的 Ca2+ ，就

38、引起了肌鈣蛋白分子構(gòu)型的改變， 從而觸發(fā)了肌絲滑行，肌纖維收縮。當(dāng)鈣離子濃度降低至 10-5M 時， 鈣離子與肌鈣蛋白解離， 心肌隨之舒張， 如果鈣離子濃度持 續(xù)升高， 鈣離子與肌鈣蛋白結(jié)合數(shù)量不斷增加，甚至到達(dá)只結(jié)合不解離的程度，致使心肌持 續(xù)收縮 (鈣僵 )。5. 向蛙心插管中加腎上腺素后， 可見蟾蜍心肌收縮增強(qiáng)、心肌舒張完全，描記的心搏曲線幅Ca2+ 增多。 同時靜脈度明顯增大、心跳加快、曲線密度明顯變大。其原因是去甲腎上腺素與心肌細(xì)胞膜上的B1受體相結(jié)合， 激活 AC， cAMP 生成增多，通過 PKA 途徑激活肌漿網(wǎng)釋放的 竇 4 期 If 去極化速度加快， 故心肌舒縮增強(qiáng)， 心跳加

39、快。6. 在任氏液內(nèi)滴加乳酸，心跳減弱，其原因是H+進(jìn)入心肌內(nèi)膜后，可降低Ca2+與肌鈣蛋白的親和力， 促使 Ca2+ 的解離。7. 在上述灌流液中參加與乳酸同當(dāng)量的 NaHCO3 ， 心肌的舒縮逐漸恢復(fù)。 其原因是 NaHCO3 中和了乳酸， 解除了 Ca2+ 與肌鈣蛋白親和力的抑制。心率減慢， 最后心跳停止于舒Adr 、 Ach 均敏感8. 任氏液內(nèi)滴加 Ach， 蛙心收縮減弱， 收縮曲線基線下移，一方面提高心肌細(xì)胞膜 K+ 的通透性， 促 最大復(fù)極電位絕對值增大； Ik 衰減過程減 心律減慢。 (2) 復(fù)極過程中 K+ 外流增加，使心肌收縮減弱 ; 另一方面 Ach 可通過抑進(jìn)而使心肌收縮減弱張狀態(tài)。 原因是Ach與心肌細(xì)胞膜 M受體相結(jié)合, 使 K+ 外流， 導(dǎo)致 (1) 靜脈竇復(fù)極時 K+ 外流增多， 弱， 自動除極速度減慢。 導(dǎo)致靜脈竇自律性降低， 動作電位 2、 3 期縮短， Ca2+ 進(jìn)入心肌細(xì)胞內(nèi)減少，