高效液相色譜儀在農(nóng)藥分析中的應用畢業(yè)論文

1、石家莊科技信息職業(yè)學院畢 業(yè) 論 文題目： 液相色譜儀在農(nóng)藥分析中的應用 學 號： 姓 名： 韓敬宇 專業(yè)班級： 生物化工工藝 指導教師： 王紅影 完成日期： 2013年3月31日 液相色譜儀在農(nóng)藥分析中的應用摘要：論文分析了高效液相色譜法在農(nóng)藥分析中的應用。實驗使用LC20AT液相色譜儀按照GB HGT31765-2004、GB 28132-2011 分別分析了10%吡蟲啉和啶蟲脒原藥的含量。實驗充分論證了，農(nóng)藥產(chǎn)中使用液相色譜儀分析農(nóng)藥含量具有以下特點：分析效率快、分析結(jié)果準和分析技術(shù)成熟。并且在農(nóng)藥分析中高效液相色譜法得到了較為廣泛的應用。關(guān)鍵詞：農(nóng)藥分析；高效液相色譜儀；分析速率；應用

2、Abstract:This paper analyses the high performance liquid chromatography (HPLC) method in the application of pesticide analysis.Experiments using LC - 20 HGT31765 at liquid chromatograph according to GB - 2004 and GB 28132-2011 were analyzed10% imidacloprid and organism amidine technical content.Expe

3、riments fully proved,Pesticide during liquid chromatograph analysis pesticide content has the following features: the analysis eficiency, the results of the analysis must and analysis of mature technology. And high performance liquid chromatography in pesticide analysis has been widely used.Keyword：

4、Pesticide analysis；High performance liquid chromatography；Analysis eficiency；Used目 錄一、引言1二、液相色譜儀2三、農(nóng)藥分析1(一)農(nóng)藥分析的分類1（二）分析方法的進展1四、高效液相色譜儀分析農(nóng)藥實例3（一）農(nóng)藥分析一：吡蟲啉3（二）農(nóng)藥分析二：啶蟲脒7五、結(jié)論11六、參 考 文 獻11一、引言50年代初，氣一液分配色譜的出現(xiàn)，導致了化學實驗室分析技術(shù)的飛躍。到了60年代中，人們在以前色譜實踐的基礎上，把氣象色譜獲得的成就引入液相色譜中，開始了液相色譜現(xiàn)代化進程。60年代末70年代初高效液相色譜技術(shù)（HPLC）技

5、術(shù)的發(fā)展，迅速的趕上了氣相色譜技術(shù)。由于高效液相色譜技術(shù)的飛躍發(fā)展取得的巨大成就，70年代被稱為“高效液相色譜的年代”。HPLC技術(shù)用于農(nóng)藥分析始于70年代初，如Henry等人先后發(fā)表了有關(guān)農(nóng)藥高效液相色譜分析的文章。HPLC方法成為當今最受重視的色譜技術(shù)。氣象色譜分析，限于分子量在400以下的熱穩(wěn)定性較好，并且具有一定蒸汽壓的化合物。HPLC則不受限制，幾乎可以分析各種各樣的化合物1：大分子的、小分子的、離子型的、非離子型的、水溶性的、油水溶性的、有機的和無機的。因此本文就HPLC分析的一般技術(shù)知識，HPLC在農(nóng)藥分析中的應用范例以及我國農(nóng)藥HPLC分析現(xiàn)狀和前景估計，加以簡要論述。二、液相

6、色譜儀高效液相色譜儀器的最基本部件包括三個部分，即高壓輸液泵、高效色譜柱、和高靈敏度檢測器。高效液相色譜儀的系統(tǒng)由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成3。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統(tǒng)，樣品溶液經(jīng)進樣器進入流動相，被流動相載入色譜柱(固定相) 內(nèi)， 由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數(shù)， 在兩相中作相對運動時， 經(jīng)過反復多次的吸附解吸的分配過程， 各組分在移動速度上產(chǎn)生較大的差別， 被分離成單個組分依次從柱內(nèi)流出， 通過檢測器時， 樣品濃度被轉(zhuǎn)換成電信號傳送到記錄儀，數(shù)據(jù)以圖譜形式打印出來4。三、農(nóng)藥分析(一)農(nóng)藥分析的分類農(nóng)藥分析可分為原藥和制劑分析、殘留量分

7、析兩大類，前者屬常量分析，后者屬微量分析。在農(nóng)藥常量分析中，對測定的準確度和精密度要求較高，而對靈敏度要求不高；而在農(nóng)藥分析殘留量中，由于殘留量極少，試樣的前處理復雜，測定時對準確度和精密度要求不高，而對靈敏度要求很高2。農(nóng)藥常量分析對農(nóng)藥生產(chǎn)和應用都有重要作用，生產(chǎn)企業(yè)對農(nóng)藥中間體和產(chǎn)品的分析，是控制和改進生產(chǎn)工藝的主要依據(jù)，是保證產(chǎn)品質(zhì)量的主要指標，也是質(zhì)監(jiān)部門和農(nóng)業(yè)生產(chǎn)資料部門進行管理質(zhì)量的重要措施8。（二）分析方法的進展早期用銅、砷、鉛無機農(nóng)藥時，主要用重量法和滴定法；上世紀五十年代，主要用銀量法、電位滴定法或重量法測定有機氯農(nóng)藥(總氯量)，用光度法測定有機磷農(nóng)藥；六十年代開始使用紫外

8、和紅外分光光度法，目前仍是分析中常用的方法。但以上這些方法不具備分離雜質(zhì)的能力，且只能測定單一組分。六十年代后期氣相色譜法在農(nóng)藥分析中得到廣泛應用，不僅能有效分離雜質(zhì)，同時測定多個組分，且選擇性好，靈敏度高；而后高效液相色譜法在農(nóng)藥分析中的使用，用于測定熱穩(wěn)定性較差的農(nóng)藥，更使農(nóng)藥分析技術(shù)得到進一步的發(fā)展9。四、高效液相色譜儀分析農(nóng)藥實例（一）農(nóng)藥分析一：吡蟲啉吡蟲琳（1（6一氯司一毗陡甲基）-N一硝基咪啪一2一亞膠）是一種新型的低毒殺蟲劑，具有高效、廣譜的特點.它的強內(nèi)吸性對水稻、蔬菜、果樹的蚜蟲類、飛虱類等刺吸式口器害蟲有很好的防治效果，且藥效持續(xù)長.國內(nèi)生產(chǎn)毗蟲批原粉的企業(yè)有10家左右，

9、生產(chǎn)的原粉中毗蟲批的含量一般為8590.其余的廠家都是外購原粉，稀釋配制成10的可濕性粉劑和25的乳劑，再在市場上銷售.毗蟲批原粉的價格高達50萬元，精確測定敗蟲琳原粉中毗蟲琳的含量，對原粉生產(chǎn)企業(yè)和制劑分裝企業(yè)，都具有很重要的現(xiàn)實意義.毗蟲批是近幾年出現(xiàn)的一種新型農(nóng)藥，國內(nèi)尚未規(guī)定標準的分析方法.總體來說毗蟲時的分析有氣相色譜法和液相色譜法兩大類.采用氣相色譜法一般是先對唯蟲咐進行三氟乙酸化，再進行測定，此方法由于樣品處理比較復雜，分析的重視性和準確度不太理想.本文采用反相高效液相色譜法，確定了最佳的色譜分離條件，分析時間短，方法簡便，準確度高，適用于企業(yè)對毗蟲批原粉和制劑的常規(guī)、快速定量分

10、析。1. 10%吡蟲啉粉劑質(zhì)量分數(shù)的測定試驗方法6（1） 抽樣按照GB/T 16051979（1989）中“原粉采樣”方法進行。用隨機數(shù)表法確定抽樣的包裝件，最終抽樣量應不小于100g。（2）鑒別試驗液相色譜法本鑒別試驗可與吡蟲啉質(zhì)量分數(shù)的測定同時進行。在相同的色譜條件操作下，試樣溶液某個色譜峰的保留時間與標樣溶液中吡蟲啉的色譜峰的保留時間，其相對差值在1.5%以內(nèi)。（3）吡蟲啉質(zhì)量分數(shù)的測定（4）方法提要試樣用甲醇溶解，以甲醇+水為流動相，使用NovapakC18、5m為填料的色譜柱和可變波長紫外檢測器，對試樣中的吡蟲啉進行分離和測定。（5）儀器高效液相色譜儀：具有可變波長紫外檢測器；色譜數(shù)

11、據(jù)處理機或色譜工作站；色譜柱：1503.9（i.d）不銹鋼柱，內(nèi)裝NovapakC18、5m填充物：過濾器：濾膜孔徑約為0.45m；微量進樣器：50L。 （6）試劑和溶液甲醇：色譜級；水:新蒸二次蒸餾水；吡蟲啉試樣：已知質(zhì)量分數(shù)w98.0%。（7）高效液相色譜操作條件流動相：y（甲醇：水）=40:60； 流速：0.4ml/min；柱溫：室溫（溫差變化不大于2） 檢測波長：260nm； 進樣體積：5L；保留時間：吡蟲啉約5.0min。（8）測定步驟（9）標樣溶液的制備稱取0.1g（精確至0.002g）的標樣于100ml的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度超聲波震蕩5min使試樣溶解，冷卻至室溫，搖

12、勻。用移液管移取上述溶液5ml于50ml容量瓶中用甲醇定容，搖勻。（10）試樣溶劑的制備稱取0.1g（精確至0.002g）的試樣于100ml的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度超聲波震蕩5min使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取上述溶液5ml于50ml容量瓶中用甲醇定容，搖勻。（11）測定 在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直至相鄰兩針吡蟲啉峰面積相對變化小于1.5%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。（12）計算 試樣中吡蟲啉質(zhì)量分數(shù)按式（1）計算：x1=（A2m1p）/（A1m2） 式中： A1標樣溶液中，吡蟲啉峰面積的平均值A2試樣溶液

13、中，吡蟲啉峰面積的平均值； m1標樣的質(zhì)量，單位為克（g）； m2試樣的質(zhì)量，單位為克（g） p 標樣中吡蟲啉的質(zhì)量分數(shù)，單位為百分數(shù)（%）（13）允許差 兩次平行測定結(jié)果之差，應不大于1.5%，取其算數(shù)平均值為測定結(jié)果。（14）試驗第一次稱 試樣0.1016gW1=（0.111298.9%）/ 8325569（7892551/0.1016）100%=10.26%第二次稱 試樣0.1085gW2=（0.111298.9%）/ 8325569（8482981/0.1085）100%=10.32%綜上：平均值 w=（10.26+10.32）/2=10.3%故：測得的吡蟲啉含量為10.3%（15）結(jié)

14、果討論上述實驗簡要分析了農(nóng)藥試樣的含量，以及操作方法，流動相等。并計算其結(jié)果，此實驗充分體現(xiàn)了HPLC技術(shù)在農(nóng)藥檢測分析中的應用，并以一種高效果的方式去檢測節(jié)省了很多實際操作中的麻煩，充分體現(xiàn)了HPLC技術(shù)在生產(chǎn)中的重要作用。色譜法是一種高效的分離技術(shù)。其原理是利用欲分離的諸分在兩相間的分配有差異(即有不同的分配系數(shù))，當兩相作相對運動時.這些組分在此兩相中的分配反復進行，從幾千次到百萬一次。即使組分的分配系數(shù)只有微小差異。隨著流動相移動卻可以有明顯的差距，最后使這些組分都得到分離，色譜站上產(chǎn)生譜圖，并能測出吡蟲啉峰高在套用公式計算結(jié)果。（二）農(nóng)藥分析二：啶蟲脒化學名稱：N-(N-氰基-乙亞胺

15、基)-N-甲基-2-氯吡啶-5-甲胺分子式：C10H11ClN4 分子量：222.68農(nóng)藥有效成份類別：殺蟲劑啶蟲脒屬硝基亞甲基雜環(huán)類化合物，是一種新型殺蟲劑，作用于昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)突觸部位的煙堿乙酰膽堿受體，干擾昆蟲神經(jīng)系統(tǒng)的刺激傳導，引起神經(jīng)系統(tǒng)通路阻塞，造成神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿在突觸部位的積累，從而導致昆蟲麻痹，最終死亡。2. 啶蟲脒原藥質(zhì)量分數(shù)的測定試驗方法5（1）抽樣按照GB/T 16052001中“商品原藥采樣”進行。用隨機數(shù)表法確定抽樣的包裝件，最終抽樣量應不小于100g。（2）鑒別試驗液相色譜法本鑒別試驗可與啶蟲脒質(zhì)量分數(shù)的測定同時進行。在相同的色譜條件操作下，試樣溶液某個色譜峰的保留

16、時間與標樣溶液中啶蟲脒的色譜峰的保留時間，其相對差值在1.5%以內(nèi)。（3）啶蟲脒質(zhì)量分數(shù)的測定（4）方法提要試樣用甲醇溶解，以甲醇+水為流動相，使用NovapakC18、5m為填料的色譜柱和可變波長紫外檢測器，對試樣中的啶蟲脒進行反相高效液相色譜分離和測定。（5）儀器高效液相色譜儀：具有可變波長紫外檢測器；色譜數(shù)據(jù)處理機或色譜工作站；色譜柱：1504.6（i.d）不銹鋼柱，內(nèi)裝NovapakC18、5m填充物：過濾器：濾膜孔徑約為0.45m；微量進樣器：100L，定量進樣管：5L，超聲波清洗器。 （6）試劑和溶液甲醇：色譜級；水:新蒸二次蒸餾水；吡蟲啉試樣：已知質(zhì)量分數(shù)w99.0%。（7）高效

17、液相色譜操作條件流動相：y（甲醇：水）=35:65； 流速：0.6ml/min；柱溫：室溫（溫差變化不大于2） 檢測波長：254nm； 進樣體積：5L；保留時間：吡蟲啉約6.0min。（8）測定步驟（9）標樣溶液的制備稱取0.1g（精確至0.002g）的啶蟲脒標樣于50ml的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度超聲波震蕩10min使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取上述溶液5ml于50ml容量瓶中用甲醇定容，搖勻。（10）試樣溶劑的制備稱取0.1g（精確至0.002g）的啶蟲脒標樣于50ml的容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度超聲波震蕩10min使試樣溶解，冷卻至室溫，搖勻。用移液管移取上述溶

18、液5ml于50ml容量瓶中用甲醇定容，搖勻。（11）測定 在上述操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標樣溶液，直至相鄰兩針啶蟲脒峰面積相對變化小于1.2%后，按照標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。（12）計算 試樣中啶蟲脒質(zhì)量分數(shù)按式（1）計算：x1=（A2m1p）/（A1m2） 式中： A1標樣溶液中，啶蟲脒峰面積的平均值A2試樣溶液中，啶蟲脒峰面積的平均值； m1標樣的質(zhì)量，單位為克（g）； m2試樣的質(zhì)量，單位為克（g） p 標樣中啶蟲脒的質(zhì)量分數(shù)，單位為百分數(shù)（%）（13）允許差 兩次平行測定結(jié)果之差，應不大于1.2%，取其算數(shù)平均值為測定結(jié)果。（14）實際試驗第

19、一次稱 試樣0.1034gW1=（0.104199.01%4990385）/（5116484/0.1034）100%=97.21%第二次稱 試樣0.1045gW2=（0.104199.01%5044862）/（5116484/0.1045）100%=97.23%綜上： 平均值 w=（97.21+97.23）/2=97.2%故： 測得的啶蟲脒含量為97.2%（15）結(jié)果討論 上述實驗實驗簡要分析了啶蟲脒原藥試樣的含量，以及檢測方法，流動相配比等。并計算其結(jié)果，此實驗充分體現(xiàn)了HPLC技術(shù)在農(nóng)藥檢測分析中的應用，并以一種高效果的方式去檢測節(jié)省了很多實際操作中的麻煩，充分體現(xiàn)了HPLC技術(shù)在生產(chǎn)中的重