枸杞多糖檢測方法科研申報

1、2010年研究生科研項目申報技巧與途徑選修課考試題學(xué)號： 姓名： 王暢 所屬班級： 英語六班 所屬專業(yè)： 藥物分析 入學(xué)年份： 2009 導(dǎo)師姓名：於洪建 一、課題名稱： 枸杞多糖質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究 二、關(guān)鍵詞： 枸杞多糖;指紋圖譜;高效液相色譜法;柱前衍生化 3、 中文摘要： 枸杞多糖的單糖組成測定是控制枸杞多糖質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和提供多糖基本信息的最重要環(huán)節(jié)。本實驗因單糖存在互變異構(gòu)體、 差向異構(gòu)體、結(jié)構(gòu)相似等特征 ,而且往往同一待測樣品 ,如多糖、寡糖、糖肽、糖蛋白等 ,可能含有許多類型的單糖。所以采用 PMP柱前衍生化反相高效液相色譜 (HPLC)法,通過梯度洗脫建立了9種常見單糖的分離模式做對照 ,

2、并將95%純度的枸杞多糖水解用同樣的衍生化成功地分離枸杞多糖的單糖組成分,分離效果好，具有良好的重復(fù)性。結(jié)果表明枸杞多糖由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖及阿拉伯糖7種單糖組成,摩爾比為2.051.2010.900.850.38 。該 HPLC方法是簡單，快速，靈敏，方便的分析技術(shù) ,可用于枸杞多糖的質(zhì)量控制。 4、 課題立項依據(jù)： 1.枸杞多糖單糖組分復(fù)雜枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharide）簡稱LBP，是茄科植物枸杞的活性成份之一，由雜多糖的糖鏈與蛋白質(zhì)的肽鏈以共價鍵的形式結(jié)合的含肽糖類，是天然存在的大分子物質(zhì)1-3。因為組成多糖的單

3、糖品種繁多，而且即使只有一種單糖組成的多糖，因其連接方式的不同并可能有分支，也有可能得到結(jié)構(gòu)很復(fù)雜的多糖，所以多糖結(jié)構(gòu)分析比蛋白質(zhì)或核酸要復(fù)雜得多。此外，由于多糖結(jié)構(gòu)的微觀不均一性，或分子量發(fā)散，使多糖結(jié)構(gòu)分析很難得出完全準(zhǔn)確的結(jié)構(gòu)式。多糖結(jié)構(gòu)的分析包括單糖組成4-5，單糖間的連接方式、糖苷鍵構(gòu)型、分支位點及分支數(shù)目，最終確定其重復(fù)結(jié)構(gòu)單元。多糖結(jié)構(gòu)分析的手段分為物理手段、化學(xué)降解法、酶降解和免疫化學(xué)法等。其中物理手段有IR、NMR和MS等；化學(xué)降解法有完全酸水解、部分酸水解和氧化性裂解等。但由于多糖結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，目前還沒有一種方法可以單獨完成其結(jié)構(gòu)分析，必須將多種方法結(jié)合使用6-8。儀器分析

4、法是在化學(xué)分析法的基礎(chǔ)上更進(jìn)一步地了解和研究多糖的結(jié)構(gòu)特性。與化學(xué)分析法相比，儀器分析法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏和操作方便等優(yōu)點，是糖鏈分析不可缺少的手段。目前，在此方面應(yīng)用較多的有UV、HPLC、IR、GC、MS、NMR及電泳等。這些現(xiàn)代分析技術(shù)的出現(xiàn)和發(fā)展以及儀器的聯(lián)用，大大促進(jìn)了糖鏈結(jié)構(gòu)研究工作的發(fā)展。制定統(tǒng)一的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)需要結(jié)合枸杞多糖本身的實際特點才能得以實施，從而保護(hù)消費者的權(quán)益。2.多糖的生物活性近年來，在對免疫物質(zhì)以及新藥物資源的研究過程中，人們發(fā)現(xiàn)糖類參與了生命科學(xué)中細(xì)胞的各種活動，具有多種多樣的生物學(xué)功能。枸杞多糖及其綴合物對多種危害人類健康的疾病，如免疫紊亂、肝炎、高血壓、癌癥

5、、糖尿病、血栓等，都具有顯著的療效9-10,其中最引人注目的是它們的免疫修飾和抗腫瘤活性。多糖還具有抗輻射、抗衰老、抗凝血等功效。因此，枸杞多糖的研究與開發(fā)已日益引人注目。3.枸杞多糖的研究意義目前糖生物學(xué)及糖工程己成為繼基因工程和蛋白質(zhì)工程之后的第三大生工程，是當(dāng)今最前沿的生物學(xué)科之一11-13。由于多糖多種多樣的生物活性以及在保健和疾病治療領(lǐng)域的廣泛使用，使多糖生物資源的開發(fā)利用和研究日益活躍，成為天然藥物、生物化學(xué)和生命科學(xué)等的研究熱點。到目前為止，已有300多種多糖類化合物從天然產(chǎn)物中被分離出來14。4.國內(nèi)外枸杞多糖的研究現(xiàn)狀我國近年來對枸杞多糖藥物活性已有廣泛報道，例如：報道枸杞多

6、糖有降血糖，抗衰老、抗病毒、抗遺傳損傷、抗腫瘤、抗放射、抗突變、等藥物活性，但弄清結(jié)構(gòu)說明構(gòu)效關(guān)系尚少見，由于產(chǎn)地的不同全國范圍內(nèi)還沒有報道過枸杞多糖質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究，特別是枸杞多糖的HPLC指紋圖譜。中草藥作為藥物開發(fā)及理論研究，我國已落后于日本和韓國。國際上對糖類的研究日新月異，內(nèi)容包括糖生物學(xué)和糖工程等，并且相繼多次召開了有關(guān)“糖生物學(xué)和糖工程”的專題會議。1995年3月，亞洲分子生物學(xué)組織(AMBO)還在日本舉辦了“糖生物學(xué)和糖工程”培訓(xùn)班15。歐盟在19941998年的研究計劃中啟動了“歐洲糖研究與開發(fā)平臺”，旨在協(xié)調(diào)歐洲的糖研究與開發(fā)，強化在糖的研究成果轉(zhuǎn)化成商品與美國和日本競爭的能力

7、。目前，日本、美國及歐盟十分重視糖類的研究16，且在糖的研究與開發(fā)處于領(lǐng)先地位，并且提出各自的重大科研計劃。5.多糖的應(yīng)用前景植物源多糖類化合物由于其獨特功能和低毒性，在臨床中顯示出越來越廣闊的前景，值得指出的是我國對于糖的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制研究尚無重大計劃?？v觀近十年，有關(guān)多糖的研究日益增多。到目前為止，雖然只有云芝多糖、香菇糖、豬苓多糖、裂褶多糖和茯苓多糖等少數(shù)應(yīng)用于臨床，但它們在抗凝血、抗腫瘤、降血脂、抗突變、抗衰老和抗病毒等疑難病癥的治療方面已顯示了誘人的前景。有關(guān)專家預(yù)言“21世紀(jì)將是多糖的時代”預(yù)示著多糖研究的廣闊前景17。作為重要的植物化學(xué)成分，多糖已成為現(xiàn)在科學(xué)家研究的重要領(lǐng)域，不斷

8、受到人們的關(guān)注。多糖正逐漸成為當(dāng)今新藥開發(fā)的重要方向之一，但是質(zhì)量是保證安全使用的根本。6.指紋圖譜的應(yīng)用前景通過建立相應(yīng)指紋圖譜來制定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，不僅是時代發(fā)展的必然，也是我國中藥走向世界的關(guān)鍵。目前中藥指紋圖譜還處于方法學(xué)研究及數(shù)據(jù)積累階段，中藥指紋圖譜的應(yīng)用也僅限于生產(chǎn)中的質(zhì)量控制，因此建立中藥指紋圖譜，應(yīng)考慮其可操作性。隨著分析技術(shù)的快速發(fā)展，為中藥指紋圖譜的研究、應(yīng)用及完善提供了技術(shù)保證。今后應(yīng)該利用計算機(jī)容量大和速度快的特點，開發(fā)與分析儀器相配套的解讀指紋圖譜的分析軟件，使結(jié)果分析更科學(xué)合理，在中藥指紋圖譜數(shù)據(jù)積累的基礎(chǔ)上建立信息數(shù)據(jù)庫，使中藥質(zhì)量管理更加科學(xué)化。在此基礎(chǔ)上進(jìn)行化學(xué)成

9、分與藥效相關(guān)性的研究，使中藥的應(yīng)用更加安全、有效。中藥指紋圖譜全面地反映了中藥所含化學(xué)成分的復(fù)雜性和相關(guān)性。隨著標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)范的中藥指紋圖譜的實施和應(yīng)用，將會有力地推動中藥產(chǎn)業(yè)現(xiàn)代化和國際化的進(jìn)程18。 參考文獻(xiàn)：1王金童,王秀娟.枸杞子的化學(xué)成分和藥理研究概況J.天津藥學(xué),1999,(11):14-15 2 田庚元.枸杞子糖綴合物的結(jié)構(gòu)與生物活性研究J.世界科學(xué)技術(shù)中醫(yī)藥現(xiàn)代化, 2003,5(4): 22-30. 3 朱彩平，張聲華.枸杞子水提物中多糖含量的J 食品與發(fā)酵工業(yè)， 2005,31(2):111-113 4 張吉,鄒巧根,宋吉等.云芝糖肽的單糖組成分析J.中國藥科大學(xué)學(xué)報,2001

10、,32(2):137-140.5 姚新生.天然藥物化學(xué) M .北京:人民衛(wèi)生出版社, 2006: 6; 71 - 77.6 鄔應(yīng)龍漂白魔芋微粉的結(jié)構(gòu)于特性研究D浙江大學(xué)，20067 Colquhoun I J，Jay A J，Eagles J，et alStructure and conformation of a novel genetica engineered polysaccharide P2JCarbohydrate Research，2001，330(4)：3253338 Landersjo C，Weintraub A，Widmalm GStructural analysis of

11、 the O-antigen polysacchafrom the shiga toxin-producing Escherichia coli O172JEuropean Journal of Biochemis2001268：223922459 朱彩平,張聲華.枸杞多糖對高脂血癥小鼠血脂及脂質(zhì)過氧化的影響J.營養(yǎng)學(xué)報, 2005,(01):101-105 10 張華華,梁朋.枸杞子對 D-半乳糖致免疫衰老小鼠胸腺功能的作用J.中國醫(yī)藥導(dǎo)報, 2008,(21):99-107 11 肖春生，田華雨陳學(xué)思，等智能性生物醫(yī)用高分子研究進(jìn)展J中國科學(xué)B輯學(xué)，2008，38(10)：86788012 王萍，楊愛蘭，李彩霞海洋生物多糖在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用與研究J甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué),2004，3(21)：535513 馬林，古練權(quán)化學(xué)生物學(xué)導(dǎo)論M北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2006(1)：8911314 馬寶瑕，陳新，鄧軍娥中藥多糖研究進(jìn)展J中國醫(yī)院藥