抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物抑制雞胚尿囊膜血管生成作用的研究

1、抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物抑制雞胚尿囊膜血管生成作用的研究                  作者：陳芳 閆靜 郭冷秋 賈桂芝 張基慶【摘要】  目的研究抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物對(duì)雞胚尿囊膜(CAM)血管生成的抑制作用。方法在七日齡CAM上植入含不同劑量試藥的甲基纖維素膜片，并孵化48 h。解剖顯微鏡下計(jì)數(shù)加藥組和對(duì)照組局部血管數(shù)，以此來(lái)反映試藥對(duì)CAM新生血管形成的影響。結(jié)果抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物2.5，1.5，0.5 mg

2、/egg劑量相關(guān)性減少CAM局部的血管數(shù)。結(jié)論 抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物對(duì)CAM新生血管有顯著的抑制作用。 【關(guān)鍵詞】  抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物 雞胚尿囊膜(CAM) 抗血管生成   Abstract：ObjectiveTo investigate the antiangiogenesis effect of the ascorbic Acid SesquioxyGe()  on chicken embryo chorioallantoic membrane (CAM). MethodsThe ascorbic acid SesquioxyGe() l

3、oaded with methylcellulose membranes was applied on chicken CAM surface of 7-day-old eggs and incubated for 48 hours .Local vessel density was measured under dissection microscope . The inhibitory effect on CAM angiogenesis was evaluated.ResultsThe Ge() complex with ascorbic acid at 2.5，1.5 mg/egg a

4、nd 0.5 mg/egg dose-dependently decreased the density of local blood vessels. ConclusionAscorbic acid SesquioxyGe() significantly inhibits chicken CAM angiogenesis .   Key words：Ascorbic Acid  SesquioxyGe();  Chicken embryo chorioallantoic membrane (CAM);   Antiangiogene

5、sis   腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移與新生血管的形成密切相關(guān)。臨床與動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，當(dāng)腫瘤組織生長(zhǎng)超過(guò)2 mm3時(shí)，如果沒(méi)有新生血管供應(yīng)充足的氧氣和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，腫瘤組織將保持靜止或發(fā)生退化。近年來(lái),有研究發(fā)現(xiàn)某些化療藥物,在小劑量、高頻率的給藥方式下可以選擇性地顯著抑制腫瘤組織內(nèi)新生血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長(zhǎng),使腫瘤細(xì)胞因?yàn)檠┎蛔愣L(zhǎng)受阻。這種特殊的給藥模式,化療藥物的作用靶位已經(jīng)不是腫瘤細(xì)胞,而是新生的血管內(nèi)皮細(xì)胞,這就稱為小劑量化療(metronomic chemotherapy)或抗血管生成化療( antiangiogenic chemotherapy)1，2。  

6、 因此新生血管生成是腫瘤生長(zhǎng)和擴(kuò)散的必要條件，抑制腫瘤血管的生成可以使腫瘤因缺氧、缺血而部分死亡，從而延緩腫瘤生長(zhǎng)和抑制腫瘤轉(zhuǎn)移3。開(kāi)展抑制腫瘤血管的藥物篩選研究目前已成為抗腫瘤研究的熱點(diǎn)。有機(jī)鍺化合物是人們熟知的具有廣譜生物活性的有機(jī)化合物，特別是它的抗癌活性研究已引起人們的極大興趣4，5。抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物是本實(shí)驗(yàn)室研制合成的一種新型有機(jī)鍺化合物，經(jīng)動(dòng)物腫瘤抑制實(shí)驗(yàn)證明，該化合物具有顯著的抗腫瘤活性。雞胚尿囊膜(CAM)是研究體內(nèi)血管發(fā)生的常用模型之一6，7。本研究應(yīng)用CAM技術(shù)，觀察了抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物對(duì)CAM血管生成的影響，從抗血管生成途徑對(duì)抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物的抗癌作

7、用機(jī)制進(jìn)行了初步探討。   1  材料與儀器   1.1  動(dòng)物與材料昆明種小鼠,體重(20 ±2) g,由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。小鼠S180腹水型瘤株由哈爾濱腫瘤醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。受精種蛋購(gòu)于東北農(nóng)業(yè)大學(xué)孵化場(chǎng)。   1.2  試劑 甲基纖維素（M450，英國(guó)進(jìn)口分裝，北京索萊寶科技有限公司哈爾濱分公司），丙酮（天津市化學(xué)試劑六廠三分廠），甲醇（北京化工廠），雙蒸水（哈爾濱蒸餾水廠），新潔爾滅（齊齊哈爾市鶴城化學(xué)藥物有限責(zé)任公司）。   1.3 

8、儀器與設(shè)備恒溫恒濕箱（SPX-250型，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠），解剖鏡（BA400/500型，麥克奧迪實(shí)業(yè)有限公司），凈化工作臺(tái)（SW-CJ-/F型，蘇州型凈化設(shè)備廠）。   2  方法    2.1  動(dòng)物腫瘤抑制實(shí)驗(yàn)   2.2  抑制雞胚尿囊膜（CAM）血管生成的實(shí)驗(yàn)            利用SPSS13.0軟件對(duì)CMA實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析，給藥組與對(duì)照組相比有顯著差異（P0.01。 &

9、#160; 3  結(jié)果    3.1  抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物對(duì)小鼠S180的抑制作用見(jiàn)表1，可見(jiàn)抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物能明顯減輕瘤重，利用SPSS13.0軟件分析，給藥組與生理鹽水對(duì)照組相比有顯著差異（P0.01，且與劑量成正相關(guān)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次，結(jié)果相近，取平均值。表1  不同劑量抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物對(duì)小鼠S180的抑制作用（3 次平均）與對(duì)照組比較，P 0.01；n=10   3.2  抑制雞胚尿囊膜（CAM）血管生成實(shí)驗(yàn)   由圖1和表2可知，高劑量實(shí)驗(yàn)組對(duì)血管生成有明顯的抑制作用

10、，中劑量實(shí)驗(yàn)組血管數(shù)量明顯減少且出現(xiàn)受損情況，低劑量實(shí)驗(yàn)組的血管雖未出現(xiàn)破損現(xiàn)象，但血管變細(xì)。綜合可知不同劑量的實(shí)驗(yàn)組對(duì)CAM血管生成具有不同程度的抑制作用。表2  不同劑量抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物對(duì)CAM血管數(shù)目的影響   4  討論   早在20世紀(jì)70年代，美國(guó)的Folkman博士就證實(shí)了腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移依賴于血管的生長(zhǎng)這一假說(shuō)。因此，抑制腫瘤血管生成，阻斷腫瘤的營(yíng)養(yǎng)供應(yīng)，以達(dá)到控制腫瘤的生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移，對(duì)于實(shí)體腫瘤的治療具有重要的意義。抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物是我們實(shí)驗(yàn)室合成的一種新型有機(jī)鍺化合物，在證明了其對(duì)小鼠S180和H22

11、抗腫瘤作用后（另文報(bào)道），為進(jìn)一步揭示其抗腫瘤的作用機(jī)制，我們應(yīng)用雞胚尿囊膜(CAM)模型首次證明了抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物對(duì)腫瘤血管生成的抑制作用。雞胚尿囊膜(CAM)方法是一種經(jīng)典的研究新生血管的方法，采用7日齡的雞胚，是因?yàn)槟蚰夷ど系奈⒀苋栽谶M(jìn)一步發(fā)展，且雞胚已經(jīng)具有抵抗外界環(huán)境的改變對(duì)它產(chǎn)生的影響的能力，減小了環(huán)境對(duì)雞胚成活率和血管生成方面的影響。在選擇載體方面，雖然是固體藥物，但仍采用甲基纖維素做載體，以減少藥物直接接觸尿囊膜時(shí)對(duì)它產(chǎn)生的刺激。   實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，抗壞血酸有機(jī)鍺倍半氧化物對(duì)于CAM血管形成具有較強(qiáng)的抑制作用，可能是一種具有應(yīng)用前景的抗腫瘤藥物，在

12、抗腫瘤治療中具有很大的潛在應(yīng)用價(jià)值?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 Hanahan D, Bergers G, Bergsland E. Less ismore, regularly: metronomic dosing of cytotoxic drugs can target tumor angiogenesis in miceJ. Clin Investig, 2000, 105 (8)：1045.2 Browder T, Butterfield CE, Kraling BM, et al. Antiangiogenic scheduling of chemotherapy imp rov

13、es efficacy against experimental drug-resistant cancerJ. Cancer Res, 2000, 60(7)：1878.3 LIN H. Progress of tumor angiogenesis inhibitor TNP-470J.Foreign Medical Science Cancer Section，1998，25（4）：1182.4 Yang K L, Li X S, Zhang L, et al. Synthesis of some medicine compounds containing germanium moiety

14、 and their anticancerous activityJ.Chinese Journal of Applied Chemistr y, 2004, 21（1）：101.5 LI X S. Synthesis and antitumor activity of a new organo-germanium compoundJ.Ningxia Petroleum and Chemical Industry，2003, 1: 20.6 Kim J S , Yu HK,Ahn J H , et al. Human apolipoprotein(a) kringle V inhibits a

15、ngiogenesis in vitro and in vivo by interfering with the activation of focal adhesion kinasesJ.Biophys Res commun,2004,313(3):534.7 Crivellato E , Nico B , Vacca A, et al. Recombinant human erythropoietin induces intussusceptive microvascular growth in vivoJ.Leukemia , 2004,18(2):331.8 徐叔云，卞如濂，陳 修. 藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué),第3版M.北京：人民衛(wèi)生出版社，1990：1761.9 蔣 霞，李 勇，范維琥. 部分冠心病常用中藥對(duì)雞胚尿囊膜的促血管生