實驗三 實驗動物基本操作技術(shù)

1、實驗三 實驗動物基本操作技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)l 熟悉大鼠、小鼠及家兔的捉拿與固定；熟悉小鼠腹腔注射、家兔耳緣靜脈注射的方法與技術(shù)；熟悉動物的編號方法。l 了解其他動物實驗技術(shù)。大多數(shù)藥理實驗是以動物為實驗對象的，常用實驗動物有青蛙與蟾蜍，小白鼠，大白鼠，豚鼠，家兔，貓，狗等，實驗前了解其特點，掌握常用的動物實驗基本操作技術(shù)，有利于學(xué)生動手能力的培養(yǎng)。本節(jié)重點介紹青蛙與蟾蜍，小白鼠，大白鼠，豚鼠，家兔的實驗基本操作技術(shù)。一、實驗動物的編號為了分組和辨別的方便，實驗時常需對實驗動物進行編號。常用的編號方法如下： 1染料標(biāo)記法 （1）常用染料：紅色染料：5中性紅或品紅液；黃色染料：35苦味酸溶液；咖啡色染料

2、：2硝酸銀溶液；黑色染料：煤焦油的酒精溶液。 （2）標(biāo)記規(guī)則：根據(jù)實驗動物被毛顏色的不同選擇不同化學(xué)藥品涂染動物。 A.家兔等動物的標(biāo)記方法：一般用毛筆蘸取不同顏色的染料溶液直接在動物背部涂寫號碼。若用硝酸銀溶液涂寫，則需在日光下暴露1min。 B.大鼠、小鼠的標(biāo)記方法：通常在動物不同部位涂上有色斑點來表示不同的號碼。 如需要對數(shù)只實驗動物編號，將小白鼠背部劃分為前肢、腰部、后肢的左、中、右部九個區(qū)域，從右到左標(biāo)記。2穿耳打孔法 用專門的打孔器在動物耳朵的不同部位打孔表示。3掛牌編號法 此法常用于狗、猴、貓等大動物的編號。將號碼牌固定于動物的頸圈或耳上。4人工針刺號碼法 先將動物被毛去除，用針

3、在動物皮膚上刺出號碼，再用酒精墨汁涂染即可。二、實驗動物的捉拿與固定方法1蛙和蟾蜍 用左手握住動物，以食指按壓其頭部前端，拇指按壓背部。2小白鼠 捉拿法有二種，一種是用右手提起尾部，放在鼠籠蓋或其他粗糙面上，向后上方輕拉，此時小鼠前肢緊緊抓住粗糙面，迅速用左手拇指和食指捏住小鼠頸背部皮膚并用小指和手掌尺側(cè)夾持其尾根部固定手中；另一種抓法是只用左手，先用拇指和食指抓住小鼠尾部，再用手掌尺側(cè)及小指夾住尾根，然后用拇指及食指捏住其頸部皮膚。3大白鼠 捉拿時，右手抓住鼠尾基部（因抓尾尖動物會扭動易使其尾部的皮膚脫落，影響實驗的進行）將大鼠放在粗糙面上，左手戴上防護手套或用厚布蓋住大鼠，抓住其整個身體并

4、固定其頭部以防咬傷。捉拿時勿用力過猛，勿捏其頸部，以免引起窒息。4豚鼠 捉拿時以拇指和中指從豚鼠背部繞到腋下抓住豚鼠，另一只手托住其臀部。體重小者可用一只手捉拿，體重大者捉拿時宜用雙手。5家兔 捉拿時一手抓住其頸背部皮膚。輕輕將兔提起，另一手托住其臀部，根據(jù)實驗需要進行固定。如作兔耳血管注射時，可用兔盒固定；如要做腹部注射、手術(shù)及測血壓等實驗時需將家兔固定在兔手術(shù)臺上。其方法為：（1）頭部的固定：用特制的家兔頭夾。兔頭夾為附有鐵柄的半圓形鐵圈和一可調(diào)鐵圈。一般動物取仰臥位固定時，先將麻醉好的兔頸部放在半圓形的鐵圈上，再把其嘴伸入可調(diào)鐵圈內(nèi)，最后將兔頭夾的鐵柄固定在實驗臺上。或用一根粗棉繩，一端

5、拴住動物的兩個上門齒，另一端拴在實驗臺的鐵柱上。做頸部手術(shù)時，可將一粗注射器筒墊于動物的項下，以抬高頸部，便于操作。若動物取俯臥位固定，特別是在頭顱部實驗中，常用馬蹄形頭固定器固定。（2）四肢的固定：一般在頭部固定后，再固定四肢。先用粗棉繩的一端縛扎于踝關(guān)節(jié)的上方。若動物取仰臥位，可將兩后肢左右分開，將棉繩的另一端分別縛在手術(shù)臺兩側(cè)的木鉤上，而前肢須平直放在軀干兩側(cè)。再將綁縛左右前肢的兩根棉繩從其背后交叉穿過，壓住對側(cè)前肢小腿，分別縛在手術(shù)臺兩側(cè)的木鉤上。固定的姿勢依手術(shù)或?qū)嶒灧N類而定。如進行頸、胸、腹、股等部的實驗，多采取仰臥位，腦和脊髓實驗則常選用俯臥位。三、實驗動物的給藥方法1. 經(jīng)消化

6、道給藥（灌胃法） （1）小白鼠灌胃法：將小白鼠放在粗糙面上，左手拇指和食指捏住小鼠頸背部皮膚，無名指或小指將尾部緊壓在手掌上，使小鼠腹部朝上，注意使口腔和食管成一直線。右手持灌胃針管（12ml注射器上連接1216號注射針頭，尖端部磨鈍，針頭長45cm，直徑約為1mm）從小鼠口角插入口腔內(nèi)，然后用灌胃管輕壓小鼠頭部，經(jīng)舌面緊貼上腭進入食管，進針23cm后，此時動物安靜并無呼吸異常，即可將藥注入。如遇阻力或動物憋氣時則應(yīng)抽出重插，不能強插以免刺破食管或誤入氣管使動物死亡。藥液注完后輕輕退出灌胃管。操作時應(yīng)動作輕柔，細(xì)致以防損傷食道及膈肌。灌藥量一般為0.10.3ml/10g體重。（2）家兔灌胃法：

7、用兔固定箱，可一人操作。右手將開口器固定于家兔口中，舌壓在開口器下面，左手將導(dǎo)尿管經(jīng)開口器中央小孔插入。如無兔固定箱，則需兩人協(xié)作進行，一人就坐，腿上墊好圍裙，將兔的軀體夾于兩腿間，左手緊握雙耳，固定其前身，右手抓住其兩前肢。另一人將開口器橫放于兔上下頜之間，固定在舌面上,將導(dǎo)尿管自開口器中央的小孔插入，慢慢沿家兔口腔上腭壁插入食道約1518cm。插管完畢將胃管的外口端放入水杯中，切忌伸入水過深。如有氣泡從胃管逸出，說明不在食道內(nèi)而是在氣管內(nèi)，應(yīng)拔出來重插。如無氣泡逸出，則可將藥推入，并以少量清水沖洗導(dǎo)尿管保證管內(nèi)藥液全部進入胃內(nèi)。最后緩慢拔出導(dǎo)尿管。2.注射給藥法（1）皮下注射：小白鼠:通常

8、在背部皮下注射。注射時以左手拇指和中指將小白鼠頸背部皮膚輕輕提起，食指輕按其皮膚，使其形成一個三角形小窩，右手持注射器從三角窩下部刺入皮下，輕輕擺動針頭，如易擺動時則表明針尖在皮下，此時可將藥液注入，針頭拔出后，以左手在針刺部位輕輕捏住皮膚片刻，以防藥液流出。藥量一般為0.1ml0.3ml/10g體重。 大白鼠:注射部位可在背部或后肢外側(cè)皮下，操作時輕輕提起注射部位皮膚，將注射針頭刺入皮下后推注藥液。一次注射量不超過1ml/100g體重。 家兔:可在背部或頸部注射，方法參照小鼠皮下注射法。針頭應(yīng)選用稍大（67號），給藥量一般為0.51.0ml/kg體重。（2）腹腔注射法：小白鼠: 左手固定動物

9、，使腹部向上，頭呈低位。右手持注射器，在小白鼠下腹部腹白線稍向左或右的位置，從下腹部朝頭方向刺入皮膚，針頭到達皮下后， 沿皮下向前推進35mm，然后使注射器針頭與皮膚呈45度角刺入腹腔。 針頭刺入腹腔后感抵抗力消失，此時在保持針頭不動的狀態(tài)下回抽針?biāo)?，如無回血或尿液，則可推入藥液。一次可注射量為0.10.2ml/10g體重。切勿使針頭向上注射，以防針頭刺傷內(nèi)臟。 大白鼠、家兔等: 可參照小白鼠腹腔注射法。但應(yīng)注意家兔在腹白線兩側(cè)注射（應(yīng)在離腹白線約1cm處進針）。較少用，但當(dāng)給動物注射不溶于水而混懸于油或其他溶劑中的藥物時可用。（3）肌肉注射法：小白鼠、大白鼠:一般因肌肉少，不作肌肉注射，如需

10、要時，可將動物固定后，一手拉直動物左或右側(cè)后肢，選用針頭57號，將針頭刺入后肢大腿外側(cè)肌肉內(nèi)，小鼠一側(cè)藥液注射少于0.4ml。 家兔:選擇兩臂或股部。固定動物，右手持注射器，使其與肌肉成45度角一次刺入肌肉中，先抽回針?biāo)ǎ瑹o回血時將藥液注入，注射后輕輕按摩注射部位，幫助藥液吸收。 （4）靜脈注射法：小白鼠：一般采用尾靜脈注射。注射前先將動物固定于固定器內(nèi)，使其整個尾部外露，以右手食指輕彈尾尖部，必要時可用4550的溫水浸泡尾部12min或用75乙醇擦拭尾部，使其全部血管擴張充血。以拇指與食指捏住尾根部兩側(cè)，無名指和小指夾持尾尖部，中指從下托起尾巴固定。選擇一根最為充盈的血管（一般選擇尾兩側(cè)靜脈

11、，針刺宜從尾尖端開始，漸向尾根部移動，以備反復(fù)應(yīng)用），右手持4號針頭使其與尾部呈30度角刺入靜脈，針頭在靜脈內(nèi)平行推進少許，左手三指連針頭和鼠尾一起捏住固定，以防動物活動時針頭脫出。推動藥液無阻力、并可見沿靜脈血管出現(xiàn)一條白線說明針頭在血管內(nèi)，即可注藥。如遇到阻力較大，局部發(fā)白變硬時，說明針頭不在靜脈內(nèi)，需拔出針頭重新穿刺。注射完畢后拔出針頭，輕按注射部位止血。一般一次注射量為0.050.2ml/10g體重。大鼠亦可舌下靜脈注射或待其麻醉后，切開其大腿內(nèi)側(cè)皮膚進行股靜脈注射，也可頸外靜脈注射。家兔：家兔靜脈注射一般采用耳緣靜脈。注射前先剪除其表面皮膚上的毛并用水濕潤局部，血管即顯現(xiàn)出來。可先輕彈或用酒精棉球揉擦耳尖部并用左手食指和中指輕壓耳根部，拇指小指夾住耳邊緣部分，以左手無名指放在其下作墊，待靜脈顯著充盈后，右手持帶有68號針頭的注射器刺入靜脈（第一次進針點盡可能靠遠心端，以備反復(fù)應(yīng)用），順著血管平行方向深入1cm后，放松對耳根處血管的壓迫，左