凍干皮內(nèi)注射用卡介苗制造及檢定規(guī)程

1、凍干皮內(nèi)注射用卡介苗制造及檢定規(guī)程本品系卡介菌經(jīng)培育后凍干制成。用于預防結核病。1菌種1.1制造卡介苗的菌種，應由中國藥品生物制品檢定所分 發(fā)或經(jīng)同意。嚴禁使用通過動物的菌種制造卡介苗。1.2 如果采用次代種子批，單批收獲培養(yǎng)物的總代數(shù)不得 超過12代（包括在馬鈴薯培養(yǎng)基上培育的代數(shù)與在液體蘇通培 養(yǎng)基上的代數(shù)）。1.3 菌種檢定新收到的菌種或新制備種子批應進行下列檢定。1.3.1 培養(yǎng)特性卡介菌在蘇通培養(yǎng)基上發(fā)育良好。培育溫度在3739 C之間。抗酸染色應為抗酸桿菌。 在蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基上發(fā)育的卡介 菌應是干皺成團略呈淺黃色。 在牛膽汁馬鈴薯培養(yǎng)基上為淺灰色 粘膏狀菌苔。在雞蛋培養(yǎng)基上有突起

2、的皺型和擴散型兩類菌落， 且?guī)\黃色。在蘇通培養(yǎng)基上卡介菌應浮于表面，為多皺微帶黃 色的菌膜。毒力試驗用結素試驗(PPD 100IU)陰性，體重300400g的同性健 康豚鼠4只，各腹腔注射1ml菌液(5mg/ml),每周稱體重，4 5周后解剖檢查，大網(wǎng)膜上可出現(xiàn)膿皰，腸系膜淋巴結及脾可能 腫大，肝及其他臟器應無肉眼可見的病變。1.3.3 毒力試驗用結素試驗(PPD 100IU)陰性，體重300400g的同性健 康豚鼠6只，于肌內(nèi)側皮下各注射 1ml菌液(10mg/ml)，注射 前稱體重，注射后每周觀察 1次注射部位及局部淋巴結的變化。每2周稱體重1次。6周時解剖3只，滿3個月將另3只豚鼠解

3、劑，檢查各臟器應無肉眼可見的結核病變。若有可疑病灶時，應 作涂片和組織切片檢查，并采取部分病灶磨碎，加少量生理鹽水 混勻，皮下注射2只豚鼠。若證明系結核病變，該菌種即應廢棄。 試驗經(jīng)過詳細記錄備查。若未滿3個月試驗豚鼠因其他病患死亡 應解剖檢查，依上法處理。若死亡 2只以上應重試。免疫力試驗用原代種子批以1/100人份的劑量免疫豚鼠，以103104 強毒人型結核分枝桿菌感染，免疫組與對照組動物的病變指數(shù)及 脾臟毒菌分離數(shù)的對數(shù)值經(jīng)統(tǒng)計學處理，應有顯著差異。如無條件，可送中國藥品生物制品檢定所進行。1.4菌種保存凍干菌種保存于28 °C。2菌苗制造2.1 卡介苗制造室必須與其他生物制品

4、部門及實驗室分 開。所需用具如高壓鍋、冰箱及玻璃器皿等，均須單獨設置并專 用?？ń槊缰圃臁b及保存過程均須避光?？ń槊缰圃斓墓ぷ魅藛T及經(jīng)常進入卡介苗制造室的人員，必須身體健康，經(jīng)X線檢查無結核病，且以后每年經(jīng) X線檢查1 2次，可疑者暫不在卡介苗制造室工作，其檢查記錄必須保存?zhèn)?查。2.2制造用培養(yǎng)基生產(chǎn)用培養(yǎng)基不得含有能使人產(chǎn)生毒性或變態(tài)反應的物質。 培養(yǎng)基所用的原料應符合中國生物制品主要原材料試行標準 規(guī)定。2.3 菌種傳代與培養(yǎng)凍干菌種在蘇通馬鈴薯培養(yǎng)基、膽汁馬鈴薯培養(yǎng)基以及液體 蘇通培養(yǎng)基上每傳一次為一代。 馬鈴薯培養(yǎng)基上培育的菌種放冰 箱保存不超過2個月。用于生產(chǎn)菌苗的培養(yǎng)物的總代

5、數(shù)不超過 12代。2.4 原液制造241收集培養(yǎng)瓶應逐瓶檢查，若有污染、濕膜、混濁等情況應廢棄。收集菌膜壓干，移入盛有不銹鋼珠瓶內(nèi)，鋼珠與菌體的比例應根 據(jù)研磨機轉速控制在一適宜的范圍，并盡可能在低溫下研磨。 加入適量無致敏原保護液稀釋成一定濃度的原液。2.4.2 稀釋用中國藥品生物制品檢定所發(fā)給的凍干卡介苗參考比濁標準，以分光光度法或其他適宜方法測定原液濃度，用保護液將原液稀釋成1.0mg/ml。243 純菌試驗用于制造卡介苗的培養(yǎng)物、原液、以及稀釋后的菌苗均應按生物制品無菌試驗規(guī)程抽樣做純菌試驗。2.5 菌苗分批用同一代菌種同時制造的菌苗為1批，稀釋為數(shù)瓶者，按瓶分亞批。2.6 分裝分裝過

6、程中勿使苗混合均勻。每 10人份卡介苗應為0.5 士 O.lmg。3凍干菌苗原液分裝后應立即進行凍干。干燥完畢后立即進行真空 封口。亦可充氮封口。4成品檢定4.1 物理化學檢查凍干卡介苗應為白色疏松體或粉末狀。 加入稀釋液后，應于 3分鐘內(nèi)完全溶解成均勻懸液。 殘余水分不應超過3%包裝前應 每支安瓿檢查真空，不合格的安瓿應廢棄。4.2 鑒別試驗每批菌苗須做涂片檢查，抗酸染色應是抗酸桿菌。4.3 純菌試驗每亞批菌苗抽樣按生物制品無菌試驗規(guī)程進行。4.4 活菌計數(shù)同一代菌種制造的各批凍干卡介苗應抽1批做干前活菌計數(shù)。同一批菌種制造的各亞批菌苗均應做干后活菌計數(shù)，抽安瓿5支稀釋混合。凍干菌苗活菌數(shù)應在100萬/mg以上?？膳c熱穩(wěn)定性試驗同時進行。4.5 熱穩(wěn)定性試驗取凍干后菌苗放置37 C 28天進行加速失活試驗，測定活菌 數(shù)，與4C保存的同一批菌苗同時進行比較，計算降低的百分離。加溫放置制品的活菌數(shù)應不少于冷藏菌苗的2%但不得低于20萬/mg。此試驗可與參考菌苗同時進行（參考菌苗加入試驗的目 的為檢查培養(yǎng)基的質量）。每一機柜凍干菌勒應抽樣進行此項試 驗。4.6 安全試驗同一代菌種生產(chǎn)的各批凍干卡介苗應抽1個亞批做安全試驗。用結素試驗（PPd 10IU）陰性，體重300400g的同性健 康豚鼠6只。每只皮下注射相當于 50人份的凍