第十三章血清學(xué)反應(yīng)

1、第十三章第十三章 血清學(xué)反應(yīng)血清學(xué)反應(yīng)n血清學(xué)反應(yīng)：血清學(xué)反應(yīng)：抗原抗體在體外結(jié)合的反應(yīng)，因抗原抗體在體外結(jié)合的反應(yīng)，因?qū)嵤┓磻?yīng)的某些重要因素是含抗體的動(dòng)物血清，實(shí)施反應(yīng)的某些重要因素是含抗體的動(dòng)物血清，故名血清學(xué)反應(yīng)。故名血清學(xué)反應(yīng)。n血清學(xué)反應(yīng)具有嚴(yán)格的特異性和較高的敏感性，血清學(xué)反應(yīng)具有嚴(yán)格的特異性和較高的敏感性，因此可用抗原或抗體的已知一方檢測(cè)未知的另因此可用抗原或抗體的已知一方檢測(cè)未知的另一方，作為傳染病的輔助診斷和微生物的鑒定。一方，作為傳染病的輔助診斷和微生物的鑒定。一、凝集反應(yīng)一、凝集反應(yīng) 1 1、直接凝集反應(yīng)：、直接凝集反應(yīng)： 細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性細(xì)菌、紅細(xì)胞等顆粒性AgAg

2、與相應(yīng)與相應(yīng)IgIg混合以后，混合以后，在電解質(zhì)參與下，經(jīng)過一定時(shí)間在電解質(zhì)參與下，經(jīng)過一定時(shí)間AgAg顆粒相顆粒相互凝集形成肉眼可見凝集塊?；ツ纬扇庋劭梢娔瘔K。 參與凝集反應(yīng)的參與凝集反應(yīng)的AgAg稱凝集原，稱凝集原，IgIg稱凝集素。稱凝集素。 平板法和試管法平板法和試管法2、間接凝集反應(yīng)、間接凝集反應(yīng) 先將可溶性先將可溶性Ag或或Ig吸附于一種與免疫無關(guān)吸附于一種與免疫無關(guān)的有一定大小的顆粒載體表面制成固相的有一定大小的顆粒載體表面制成固相Ag或或Ig，再與相應(yīng)的待檢，再與相應(yīng)的待檢Ig或或Ag結(jié)合產(chǎn)生的結(jié)合產(chǎn)生的反應(yīng)。反應(yīng)。分為兩類：分為兩類：間接血球凝集反應(yīng)（間接血球凝集反應(yīng)（

3、HA）間接血球凝集抑制反（間接血球凝集抑制反（HI） 間接血球凝集反應(yīng)（HA） 陽性 間接血球凝集抑制反（HI） 陽性 陰性 二、沉淀反應(yīng)二、沉淀反應(yīng)p膠體狀態(tài)的可溶性膠體狀態(tài)的可溶性Ag（如細(xì)菌和寄生蟲的浸出液、（如細(xì)菌和寄生蟲的浸出液、組織浸出液、培養(yǎng)濾液、動(dòng)物血清等）與相應(yīng)組織浸出液、培養(yǎng)濾液、動(dòng)物血清等）與相應(yīng)Ig混合后，經(jīng)一定時(shí)間，形成肉眼可見的沉淀物?；旌虾?，經(jīng)一定時(shí)間，形成肉眼可見的沉淀物。p臨床上常用于診斷炭疽、梅素、鼠疫、豬丹毒、臨床上常用于診斷炭疽、梅素、鼠疫、豬丹毒、氣腫疽等傳染病。氣腫疽等傳染病。p沉淀反應(yīng)分為以下三種：沉淀反應(yīng)分為以下三種：實(shí)驗(yàn)管：實(shí)驗(yàn)管： 4mm小管

4、小管 已知已知Ig 層疊未知層疊未知Ag 交界面白色沉淀交界面白色沉淀環(huán)環(huán)對(duì)照管：對(duì)照管： 4mm小管小管 已知已知Ig 層疊生理鹽水層疊生理鹽水 交界面無沉淀環(huán)交界面無沉淀環(huán)1、環(huán)狀沉淀反應(yīng)（環(huán)狀沉淀反應(yīng)（Ascoli反應(yīng)）反應(yīng)）2、絮狀沉淀反應(yīng)： 將將Ag和相應(yīng)在試管內(nèi)或凹玻片上混勻，經(jīng)和相應(yīng)在試管內(nèi)或凹玻片上混勻，經(jīng)過一定時(shí)間性，出現(xiàn)肉可見絮狀或顆粒狀過一定時(shí)間性，出現(xiàn)肉可見絮狀或顆粒狀不溶性沉淀物為陽性。不溶性沉淀物為陽性。 如診斷梅毒的康氏反應(yīng)，及用標(biāo)準(zhǔn)類毒素如診斷梅毒的康氏反應(yīng)，及用標(biāo)準(zhǔn)類毒素測(cè)定抗毒素血清效價(jià)的絮狀試驗(yàn)等。測(cè)定抗毒素血清效價(jià)的絮狀試驗(yàn)等。3、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、瓊脂擴(kuò)散

5、試驗(yàn)p單相瓊擴(kuò)：將已知（單相瓊擴(kuò)：將已知（1：10稀釋），加入等量稀釋），加入等量的的1%瓊脂（瓊脂（56）管（或平板）中，凝固）管（或平板）中，凝固后，于其上（打孔）加待檢后，于其上（打孔）加待檢Ag（孔中），置（孔中），置37濕合感作，濕合感作，2-3h后可見白色沉淀帶。后可見白色沉淀帶。p雙相瓊擴(kuò)：雙相瓊擴(kuò)：1%瓊脂凝膠制成平板后，在上面瓊脂凝膠制成平板后，在上面按設(shè)計(jì)圖形打孔，在孔內(nèi)分別加按設(shè)計(jì)圖形打孔，在孔內(nèi)分別加Ag和和Ig，放，放密閉濕盒中，將使之雙相擴(kuò)散而形成沉淀帶。密閉濕盒中，將使之雙相擴(kuò)散而形成沉淀帶。 單相瓊擴(kuò)單相瓊擴(kuò) 雙相瓊擴(kuò)雙相瓊擴(kuò)含已知含已知Ig瓊脂瓊脂 被檢血清（

6、被檢血清（Ig）待檢待檢Ag 已知已知Ag三、補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng) 溶菌反應(yīng)： 某些細(xì)菌（霍亂弧菌）與相應(yīng)的抗體混合以后，如有補(bǔ)體參加，則細(xì)菌發(fā)生溶解的反應(yīng)，稱溶菌反應(yīng)。 溶血反應(yīng)： 紅細(xì)胞與相應(yīng)的抗體（溶血素）混合以后，如有補(bǔ)體以參加，則紅細(xì)胞發(fā)生溶解的反應(yīng)，稱溶血反應(yīng)。補(bǔ)體的特點(diǎn)補(bǔ)體的特點(diǎn)1、補(bǔ)體是酶類物質(zhì)，但均以無活性的前體形、補(bǔ)體是酶類物質(zhì)，但均以無活性的前體形 式存在于血清中式存在于血清中2、動(dòng)物血清中尤其以豚鼠血清含量最高，故、動(dòng)物血清中尤其以豚鼠血清含量最高，故 多用豚鼠的新鮮血清作為補(bǔ)體的來源多用豚鼠的新鮮血清作為補(bǔ)體的來源3、補(bǔ)體性質(zhì)不穩(wěn)定，易失活，經(jīng)、補(bǔ)體性質(zhì)不穩(wěn)定，易失活，經(jīng)56

7、度度30分分 處理即滅活處理即滅活補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)的原理補(bǔ)反包括兩個(gè)系統(tǒng)五種成分：補(bǔ)反包括兩個(gè)系統(tǒng)五種成分： 一是被檢系統(tǒng)（溶菌系）中的一是被檢系統(tǒng)（溶菌系）中的已知已知Ag、待檢、待檢Ig及僅供一組及僅供一組Ag-Ig系統(tǒng)反應(yīng)的定量補(bǔ)體。系統(tǒng)反應(yīng)的定量補(bǔ)體。 二是指示系統(tǒng)（溶血系）中的二是指示系統(tǒng)（溶血系）中的紅細(xì)胞和溶血素。紅細(xì)胞和溶血素。 首先是溶菌系統(tǒng)的抗原與抗體復(fù)合物與首先是溶菌系統(tǒng)的抗原與抗體復(fù)合物與補(bǔ)體相互混合后產(chǎn)生的反應(yīng)。補(bǔ)體相互混合后產(chǎn)生的反應(yīng)。 其次為了測(cè)知溶菌系統(tǒng)中補(bǔ)體是否被利其次為了測(cè)知溶菌系統(tǒng)中補(bǔ)體是否被利用，再加入溶血系（綿紅細(xì)胞和抗綿溶用，再加入溶血系（綿紅細(xì)胞和抗綿

8、溶血素）作為指示系統(tǒng)，以觀察因補(bǔ)體游血素）作為指示系統(tǒng)，以觀察因補(bǔ)體游離所產(chǎn)生的溶血情況。離所產(chǎn)生的溶血情況。 如果反應(yīng)的結(jié)果是不溶血為診斷陽性，如果反應(yīng)的結(jié)果是不溶血為診斷陽性，發(fā)生了溶血為診斷陰性。發(fā)生了溶血為診斷陰性。操作與結(jié)果n操練時(shí)，分兩步進(jìn)行：操練時(shí)，分兩步進(jìn)行： 將待檢系統(tǒng)的將待檢系統(tǒng)的Ag、Ig與補(bǔ)體三種成加入試管與補(bǔ)體三種成加入試管內(nèi)，于內(nèi)，于37度水浴作用度水浴作用30分鐘，然后加入指示分鐘，然后加入指示系統(tǒng)，于系統(tǒng)，于37水浴作用水浴作用30分鐘，觀察結(jié)果。分鐘，觀察結(jié)果。n結(jié)果觀察：結(jié)果觀察： 不溶血為診斷陽性，發(fā)生溶血為陰性不溶血為診斷陽性，發(fā)生溶血為陰性四、中和實(shí)驗(yàn)

9、四、中和實(shí)驗(yàn)l病毒或毒素與相應(yīng)病毒或毒素與相應(yīng)Ig以一定比例混合后，以一定比例混合后，經(jīng)過一定時(shí)間，病毒喪失對(duì)易感動(dòng)物的致經(jīng)過一定時(shí)間，病毒喪失對(duì)易感動(dòng)物的致病性，或消除毒素在試管內(nèi)的溶血現(xiàn)象，病性，或消除毒素在試管內(nèi)的溶血現(xiàn)象，謂之中和反應(yīng)。謂之中和反應(yīng)。l該試驗(yàn)既可在體外進(jìn)行，也可在體內(nèi)進(jìn)行，該試驗(yàn)既可在體外進(jìn)行，也可在體內(nèi)進(jìn)行，可利用小動(dòng)物、雞胚、活細(xì)胞等作試驗(yàn)?？衫眯?dòng)物、雞胚、活細(xì)胞等作試驗(yàn)。操作如下：操作如下：五、免疫熒光法 o 熒光素：熒光素：如異硫氰酸熒光素（如異硫氰酸熒光素（FITC）、麗）、麗絲胺羅丹明絲胺羅丹明B（RB200）等受紫外線照射）等受紫外線照射后可發(fā)熒光（后

10、可發(fā)熒光（FITC 為綠色，為綠色，RB200為玫為玫瑰紅色）。瑰紅色）。o 熒光熒光Ig：將熒光素（染料）連接在提純的將熒光素（染料）連接在提純的Ig分子上，這種用熒光素標(biāo)記的分子上，這種用熒光素標(biāo)記的Ig。免疫熒光法反應(yīng)原理免疫熒光法反應(yīng)原理n熒光素與熒光素與IgIg分子結(jié)合后，并不改變分子結(jié)合后，并不改變其與相應(yīng)其與相應(yīng)AgAg結(jié)合的特性，當(dāng)用這種結(jié)合的特性，當(dāng)用這種熒光熒光IgIg對(duì)受檢標(biāo)本染色后，在熒光對(duì)受檢標(biāo)本染色后，在熒光顯微鏡下觀察，可見暗視野中閃爍顯微鏡下觀察，可見暗視野中閃爍熒光的細(xì)菌等，根據(jù)這種現(xiàn)象便能熒光的細(xì)菌等，根據(jù)這種現(xiàn)象便能對(duì)標(biāo)本中相應(yīng)對(duì)標(biāo)本中相應(yīng)AgAg進(jìn)行鑒定和定位進(jìn)行鑒定和定位。免疫熒光技術(shù)示意圖 被檢被檢Ag Ag + + 熒光熒光Ig Ig 熒光復(fù)合物熒光復(fù)合物 被檢被檢AgAg + + 標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)Ig Ig + + 熒光抗熒光抗Ig Ig 熒光復(fù)合物熒