實(shí)驗(yàn)十環(huán)糊精增敏4-羥基香豆素衍生熒光法測(cè)定肉制品中痕量

1、實(shí)驗(yàn)十 環(huán)糊精增敏4-羥基香豆素衍生熒光法測(cè)定肉制品中痕量亞硝酸鹽1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膎（1）學(xué)習(xí)衍生熒光法。n（2）學(xué)習(xí)環(huán)糊精增敏熒光法的原理2 實(shí)驗(yàn)原理n 亞硝酸鹽是食品、環(huán)保、紡織及電鍍等工業(yè)中重要的分析項(xiàng)目之一。亞硝酸鹽可能與蛋白質(zhì)分解產(chǎn)物仲胺類(lèi)物資結(jié)合，生成致癌物質(zhì)亞硝胺，食品中亞硝酸鹽含量必須控制在一個(gè)很低的水平。亞硝酸鹽本省無(wú)熒光，不能用熒光法直接測(cè)定。衍生熒光法借助一定的化學(xué)反應(yīng)，可以測(cè)定那些本身不發(fā)熒光的物質(zhì)，亦可通過(guò)衍生反應(yīng)，改變被測(cè)組分的化學(xué)組成和結(jié)構(gòu)，借助于發(fā)光特性（波長(zhǎng)、強(qiáng)度等）的改變，提高測(cè)量的選擇性和靈敏度。n酸性介質(zhì)中，亞硝酸根能與過(guò)量4-羥基香豆素迅速反應(yīng)形成低熒光性

2、的亞硝基衍生物一3-亞硝基4-羥基香豆素，該產(chǎn)物經(jīng) Na2S2O3還原為 3-氨基4-羥基香豆素后，在堿性介質(zhì)中能發(fā)射較強(qiáng)的熒光，若有適量-環(huán)糊精(-CD）存在，由于-CD對(duì)發(fā)光體的包絡(luò)作用，熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，可顯著提高測(cè)量的靈敏度。體系的/ =332urn457urn，亞硝酸鹽（以 NaNO2計(jì)）在 11200ng25mL濃度范圍內(nèi)與熒光強(qiáng)度呈良好線性關(guān)系，檢出限40pgmL。本法靈敏度高，選擇性好，可用于水樣、肉制品中痕量亞硝酸鹽的測(cè)定。 3 儀器與試劑 n 儀器：日立 M850熒光分光光度計(jì)（或 PE LS-50B型發(fā)光光度計(jì)）：基本操作參見(jiàn)附錄 n參數(shù)設(shè)置如下： n帶通（Bandpas

3、）：EXEM30nm n增益（PM gain）：Normal； n 2 5mL定量試管（容量瓶）n分度吸量管。 試劑n4-羥基香豆素溶液：用1：1（體積比）的乙腈-2mol/L鹽酸混合液配制成0.04溶液；n NaNO2標(biāo)準(zhǔn)溶液：NaNO2（A R級(jí)）于110紅外燈下干燥4h后，用水配制1mg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液，在冰箱中保存（每周新配一次），用時(shí)用水準(zhǔn)確稀釋到1g/mL；n -CD溶液：用市售品經(jīng)水重結(jié)晶的-CD配制成0.01 mol/L水溶液；n Na2S2O3（A R級(jí)）8水溶液；n 1.5mol/LNaOH水溶液；n pH 9.6NH4Cl-NH3H2O緩沖溶液；n KAl（SO4）2飽和水

4、溶液。5 注意事項(xiàng)n（1）NaNO2水溶液不穩(wěn)定，其標(biāo)準(zhǔn)溶液要新配制，并注意保存。n（2）4-羥基香豆素的亞硝基化反應(yīng)要在冰水浴中進(jìn)行n（3）檢出限測(cè)定中的空白實(shí)驗(yàn)，按規(guī)定應(yīng)做更多的次數(shù)。實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)特別注意容器的清洗。6 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果表達(dá)n（1）選擇 NaNO2含量相同的試樣（如含0.05mL 1gmL NaNO2標(biāo)準(zhǔn)液）實(shí)驗(yàn)比較有、無(wú)CD時(shí)的熒光激發(fā)和發(fā)射光譜圖，說(shuō)明CD的增敏作用。n（2）由實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)擬合工作曲線方程，并按照國(guó)際純粹及應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(huì)（IUPAC）規(guī)n定，以試劑空白熒光值的3倍標(biāo)準(zhǔn)偏差除以工作曲線斜率，計(jì)算本法測(cè)定 NaNO2的檢出限。 （3）計(jì)算加標(biāo)回收率（）和肉制品中NaNO2含量，并與國(guó)家食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)GB2760一81進(jìn)行比較，判定是否合格。7 思考題n（1）為什么4 -羥基香豆素的亞硝基化反應(yīng)要在冰水浴中進(jìn)行？n（2）從發(fā)光物質(zhì)激發(fā)態(tài)的輻射和