藥物分析中常用化學(xué)檢驗(yàn)方法與操作規(guī)程

1、藥物分析中常用化學(xué)檢驗(yàn)方法與操作規(guī)程在藥物的純度檢查和含量測定等分析檢驗(yàn)工作中，一些專屬、靈敏、準(zhǔn)確的經(jīng)典的化學(xué)方法一直發(fā)揮著重要作用。分析檢驗(yàn)中均應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法和計(jì)量檢定合格的器具進(jìn)行觀測分析。藥物分析中一些常用的化學(xué)檢驗(yàn)方法的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定（標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程）、方法原理、儀器用具、及注意事項(xiàng)等分別介紹如下。一、氯化物檢查法（中國藥典2000年版二部附錄 A）1標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定除另有規(guī)定外，取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml（溶液如顯堿性，可滴加硝酸使成中性），再加稀硝酸10ml；溶液如不澄清，應(yīng)濾過；置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，搖勻，即得供試溶液。另取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的標(biāo)

2、準(zhǔn)氯化鈉溶液，置50ml納氏比色管中，加稀硝酸10ml，加水使成40ml，即得對(duì)照溶液。于供試溶液與對(duì)照溶液中，分別加入硝酸銀試液1.0ml，用水稀釋使成50ml，搖勻，在暗處放置5分鐘，同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察、比較，即得。供試溶液如帶顏色，除另有規(guī)定外，可取供試溶液兩份，分置50ml比色管中，一份中加硝酸銀試液1.0ml，搖勻，放置10分鐘，如顯渾濁，可反復(fù)濾過，至濾液完全澄清，再加規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液與水適量使成50ml，搖勻，在暗處放置5分鐘，作為對(duì)照溶液；另一份中加硝酸銀試液1.0ml與水適量使成50ml，搖勻，在暗處放置5分鐘，按上述方法與對(duì)照溶液比較，即得。標(biāo)準(zhǔn)氯化

3、鈉溶液的制備 稱取氯化鈉0.165g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于10g的Cl）。【附注】 用濾紙濾過時(shí)，濾紙中如含有氯化物，可預(yù)先用含有硝酸的水溶液洗凈后使用。2方法原理 氯化物在硝酸酸性溶液中與硝酸銀作用生成氯化銀渾濁，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液在同一條件下生成的氯化銀渾濁液比較，以檢查供試品中氯化物的限量。標(biāo)準(zhǔn)氯化鈉溶液的取用量一般為5.08.0ml，通常為6.0ml。本法適用于藥品中微量氯化物的限度檢查。3儀器與用具 納氏比色管50ml，應(yīng)選玻璃質(zhì)量較好、

4、配對(duì)、無色(尤其管底)、管的直徑大小相等、管上的刻度高低一致的納氏比色管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 4注意事項(xiàng) (1) 供試溶液與對(duì)照溶液應(yīng)同時(shí)操作，加入試劑的順序應(yīng)一致。 (2) 應(yīng)注意按操作順序進(jìn)行，先制成40ml水溶液，再加入硝酸銀試液1.0ml，以免在較大濃度的氯化物下局部產(chǎn)生渾濁，影響比濁。 (3) 應(yīng)將供試品管與對(duì)照管同時(shí)置黑色臺(tái)面上，自上而下觀察濁度，較易判斷。必要時(shí)，可變換供試管和對(duì)照管的位置后觀察。 (4) 供試溶液與對(duì)照溶液在加硝酸銀后，應(yīng)在暗處放置5分鐘，避免光線直接照射。 (5) 加入硝酸銀試液后，應(yīng)立即充分搖勻，以防止局部過濃而影響產(chǎn)生的渾濁。 (6) 供試溶液如不澄清，可預(yù)先用含硝

5、酸的水洗凈濾紙中的氯化物，再濾過供試溶液，使其澄清。 (7) 納氏比色管用后應(yīng)立即用水沖洗，不應(yīng)用毛刷刷洗，以免劃出條痕損傷比色管。 二、硫酸鹽檢查法（中國藥典2000年版二部附錄 B） 1標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定 除另有規(guī)定外，取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成約40ml（溶液如顯堿性，可滴加鹽酸使成中性）；溶液如不澄清，應(yīng)濾過；置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸2ml，搖勻，即得供試溶液。另取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液，置50ml納氏比色管中，加水使成約40ml，加稀鹽酸2ml，搖勻，即得對(duì)照溶液。于供試溶液與對(duì)照溶液中，分別加入25氯化鋇溶液5ml，用水稀釋至50ml，充分搖勻，放置10分鐘，

6、同置黑色背景上，從比色管上方向下觀察、比較，即得。 供試溶液如帶顏色，除另有規(guī)定外，可取供試溶液兩份，分置50ml納氏比色管中， 一份中加25氯化鋇溶液5ml，搖勻，放置10分鐘，如顯渾濁，可反復(fù)濾過，至濾液完全澄清，再加規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液與水適量使成50ml，搖勻，放置10分鐘，作為對(duì)照溶液；另一份中加25氯化鋇溶液5ml與水適量使成50ml，搖勻，放置10分鐘，按上述方法與對(duì)照溶液比較，即得。 標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液的制備 稱取硫酸鉀0.181g，置1000ml量瓶中，加水適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于100g的H2S04)。 2方法原理 硫酸鹽在鹽酸酸性溶液中與氯化鋇作用

7、生成硫酸鋇渾濁液，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液在同一操作條件下生成的渾濁液比較，以檢查供試品中硫酸鹽的限量。 標(biāo)準(zhǔn)硫酸鉀溶液的取用量通常為2.0ml。 本法適用于藥品中微量硫酸鹽的限量檢查。 3儀器與用具 納氏比色管 50ml，應(yīng)選玻璃質(zhì)量較好、配對(duì)、無色（尤其管底）、管的直徑大小相等、管上的刻度高低一致的納氏比色管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 4注意事項(xiàng) (1) 供試溶液如需過濾，應(yīng)先用鹽酸使成酸性的水洗凈濾紙中可能帶來的硫酸鹽，再濾過供試溶液，使其澄清。 (2) 加入25氯化鋇溶液后，應(yīng)充分振搖，以免影響濁度。 (3) 25氯化鋇溶液存放時(shí)間過久，如有沉淀析出，應(yīng)取上清液使用。 (4) 應(yīng)將供試品管與對(duì)照管同置

8、黑色臺(tái)面上，自上而下觀察濁度，較易判斷。必要時(shí)，可變換供試品管和對(duì)照管的位置后觀察。 (5) 納氏比色管用后應(yīng)立即用水沖洗，不應(yīng)用毛刷刷洗，以免劃出條痕損傷比色管。三、鐵鹽檢查法（中國藥典2000年版二部附錄 G） 1標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定 除另有規(guī)定外，取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的供試品，加水溶解使成25ml，移置50ml納氏比色管中，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，用水稀釋使成35ml后，加30硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量稀釋成50ml，搖勻；如顯色，立即與標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液一定量制成的對(duì)照溶液（取各藥品項(xiàng)下規(guī)定量的標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液，置50ml納氏比色管中，加水使成25ml，加稀鹽酸4ml與過硫酸銨50mg，用水稀釋使成

9、35ml，加30硫氰酸銨溶液3ml，再加水適量稀釋成50ml，搖勻）比較，即得。 如供試管與對(duì)照管色調(diào)不一致時(shí)，可分別移至分液漏斗中，各加正丁醇20ml提取，俟分層后，將正丁醇層移置50ml納氏比色管中，再用正丁醇稀釋至25ml，比較，即得。 標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液的制備 稱取硫酸鐵銨FeNH4(S04)212H200.863g，置1000ml量瓶中，加水溶解后，加硫酸2.5ml，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。 臨用前,精密量取貯備液10ml，置100ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于10g的Fe）。 2方法原理 藥品中鐵鹽的檢查，中國藥典采用硫氰酸鹽法。 利用硫氰酸鹽在酸性溶液中

10、與三價(jià)鐵鹽生產(chǎn)紅色的可溶性硫氰酸鐵的配合物，與一定量標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液用同法處理后進(jìn)行比色，以檢查供試品中硫酸鹽的限量。 標(biāo)準(zhǔn)鐵溶液的取用量通常為2.0ml。 本法適用于藥品中微量鐵鹽的限量檢查。 3儀器與用具 納氏比色管50ml，應(yīng)選玻璃質(zhì)量較好、配對(duì)、無色（尤其管底）、管的直徑大小相等、管上的刻度高低一致的納氏比色管進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 4注意事項(xiàng) (1) 標(biāo)準(zhǔn)鐵貯備液應(yīng)存放在陰涼處，存放期如出現(xiàn)渾濁或其他異常情況時(shí)，不得再使用。 (2) 比色時(shí)，以白色背景，觀測比較所產(chǎn)生的顏色。四、重金屬檢查法（中國藥典2000年版二部附錄 H）1標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定重金屬系指在實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì)。標(biāo)

11、準(zhǔn)鉛溶液的制備 稱取硝酸鉛0.160g，置1000ml量瓶中，加硝酸5ml與水50ml溶解后，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。臨用前，精密量取貯備液10ml，置l00ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得（每lml相當(dāng)于10g的Pb）。配制與貯存用的玻璃容器均不得含鉛。 第一法除另有規(guī)定外，取25ml納氏比色管兩支，甲管中加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量與醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml后，加水或各藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml，乙管中加入按各藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法制成的供試液25m1；若供試液帶顏色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他無干擾的有色溶液，使之與乙管一致；再在甲乙兩管中分別加硫代乙酰胺試液各

12、2ml，搖勻，放置2分鐘，同置白紙上，自上向下透視，乙管中顯出的顏色與甲管比較，不得更深。 如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使顏色一致時(shí)，可取該藥品項(xiàng)下規(guī)定的二倍量的供試品和試液，加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成30ml，將溶液分成甲乙二等份，乙管中加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成25ml；甲管中加入硫代乙酰胺試液2ml，搖勻，放置2分鐘，經(jīng)濾膜(孔徑3m)濾過，然后甲管中加入標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，加水或該藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑使成25m1；再分別在乙管中加硫代乙酰胺試液2ml，甲管中加水2ml，照上述方法比較，即得。供試品如含高鐵鹽影響重金屬檢查時(shí)，可取該藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試溶液，加抗壞血酸0.5

13、1.0g，并在對(duì)照液中加入相同量的抗壞血酸，再照上述方法檢查。配制供試品溶液時(shí)，如使用的鹽酸超過1.0ml（或與鹽酸1.0ml相當(dāng)?shù)南←}酸），氨試液超過2m1，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對(duì)照液中應(yīng)取同樣同量的試劑置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與水15ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，再用水稀釋成25 ml。 第二法 除另有規(guī)定外，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，加硝?.5 ml，蒸干，至氧化氮蒸氣除盡后(或取供試品一定量，緩緩熾灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.51.0 ml，使恰濕潤，用低溫加熱至硫酸除盡后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸氣

14、除盡后，放冷，在500600熾灼使完全灰化)，放冷，加鹽酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨試液至對(duì)酚酞指示液顯中性，再加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加水稀釋成25ml；另取配制供試品溶液的試劑，置瓷皿中蒸干后，加醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與水15ml，微熱溶解后，移置納氏比色管中，加標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，再用水稀釋成25ml；照上述第一法檢查，即得。第三法 除另有規(guī)定外，取供試品適量，加氫氧化鈉試液5ml與水20ml溶解后，置納氏比色管中，加硫化鈉試液5滴，搖勻，與一定量的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液同樣處理后的顏色比較，不得更深。 第四法儀器裝置濾器由具有螺紋絲

15、扣并能密封的上下二部，以及墊圈、濾膜和尼龍墊網(wǎng)所組成。如下頁圖。 濾器示意圖A為濾器上蓋部分。入口處應(yīng)能與50ml注射器緊密連接；B為連接頭；c為墊圈(外徑10mm，內(nèi)徑6mm)；D為濾膜。直徑10mm，孔徑3.O加1用前經(jīng)在水中浸泡24小時(shí)以上；E為尼龍墊網(wǎng)(孔徑不限)，直徑10mm；F為濾器 下部，出口處套上一合適橡皮管。標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液一定量，置小燒杯中，用水或各藥品項(xiàng)下規(guī)定的溶劑稀釋成10ml，加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml與硫代乙酰胺試液1.0ml，搖勻，放置10分鐘，用50ml注射器轉(zhuǎn)移至上述濾器中進(jìn)行壓濾（濾速約為每分鐘1ml），濾畢，取下濾膜，放在濾紙上

16、干燥，即得。 檢查法 取按各藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試溶10ml，照標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備，自“加入醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml”起，依法操作，將生成的斑點(diǎn)與標(biāo)準(zhǔn)鉛斑比較，不得更深。 若供試溶液有顏色或渾濁，應(yīng)用濾膜進(jìn)行預(yù)濾，如濾膜上有污染，應(yīng)換濾膜再濾，直至濾膜不再染色；然后取濾液10ml，照標(biāo)準(zhǔn)鉛斑的制備，自“加入醋酸鹽緩沖液(pH3.5)2ml”起，依法操作，并照上述檢查法中所述比較，即得。2方法原理 重金屬是指在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下能與顯色劑作用的金屬鹽類雜質(zhì)。中國藥典采用硫代乙酰胺試液或硫化鈉試液作顯色劑，以鉛的限量表示。由于實(shí)驗(yàn)條件不同，分為四種檢查方法。第一法：適用于供試品不經(jīng)有機(jī)破壞，在

17、酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查；第二法：適用于供試品需灼燒破壞，取熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)?，?jīng)處理后在酸性溶液中顯色的重金屬限量檢查； 、 第三法：用來檢查能溶于堿而不溶于稀酸(或在稀酸中即生成沉淀)的藥品中的重金屬； 第四法：用微孔濾膜過濾，使重金屬硫化物沉淀富集成色斑，用于有色溶液或重金屬限量低的品種。四種方法顯示的結(jié)果均為重金屬硫化物微粒均勻混懸在溶液中所呈現(xiàn)的顏色，采用濾膜法可獲得“色斑”；如果重金屬離子濃度大，加入顯色劑后放置時(shí)間長，就會(huì)有硫化物聚集下沉。重金屬硫化物生成的最佳pH值是3.03.5，選用醋酸鹽緩沖液（pH3.5）2ml調(diào)節(jié)pH較好，顯色劑硫代乙酰胺試液用量經(jīng)實(shí)驗(yàn)也以2m

18、l為佳，顯色時(shí)間一般為2分鐘。以1020g Pb與顯色劑所產(chǎn)生的顏色為最佳目視比色范圍。在規(guī)定實(shí)驗(yàn)條件下，與硫代乙酰胺試液在弱酸條件下產(chǎn)生的硫化氫呈色的金屬離子有：銀、鉛、汞、銅、鎘、鉍、銻、錫、砷、鋅、鈷與鎳等。 由于在藥品生產(chǎn)過程中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多，且鉛易積蓄中毒，故以鉛作為重金屬的代表，用硝酸鉛配制標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液。3儀器與用具納氏比色管 應(yīng)注意選擇各管之間的平行性，玻璃色澤一致，內(nèi)徑、刻度標(biāo)線高度一致。比色管洗滌時(shí)避免劃傷內(nèi)壁。過濾器 見中國藥典2000年版二部附錄重金屬檢查法第四法附圖，由具有螺紋絲扣并能密封的上、下二部分以及墊圈、濾膜和輔助濾板組成。4試藥和試液 硫代乙酰胺試液、硫化鈉試

19、液、醋酸鹽緩沖液(pH3.5)與抗壞血酸等均按藥典規(guī)定。稀焦糖溶液 取蔗糖或葡萄糖約5g，置磁坩堝中，在玻璃棒不斷攪拌下，加熱至呈棕色糊狀，放冷，用水溶解成約25ml，濾過，貯于滴瓶中備用。臨用時(shí)，根據(jù)供試液色澤深淺，取適當(dāng)量調(diào)節(jié)使用。 5注意事項(xiàng)(1) 標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液應(yīng)在臨用前精密量取標(biāo)準(zhǔn)鉛貯備液新鮮稀釋配制，以防止硝酸鉛水解而造成誤差，配制標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液使用的玻璃儀器，均不得含有鉛。 (2) 硫代乙酰胺試液與重金屬反應(yīng)的最佳pH值是3.5，故配制醋酸鹽緩沖液（pH3.5）時(shí)，要用pH計(jì)調(diào)節(jié)，硫代乙酰胺試液加入量以2ml時(shí)呈色最深；第四法中檢測限度為25g的Pb，且體積小，所以用量為1.0ml。硫代

20、乙酰胺試液顯色劑的最佳顯色時(shí)間為2分鐘，除第四法由于檢測限量低，且為了方便過濾，顯色時(shí)間為10分鐘外，第一、二法均為放置2分鐘。 (3) 為了便于目視比較，第一、二和三法中的標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液用量以2ml（相當(dāng)于20g的Pb）為宜；小于1ml或大于3ml，呈色太淺或太深均不利于目視比較。 (4) 如需將熾灼殘?jiān)?xiàng)下遺留的殘?jiān)髦亟饘贆z查時(shí)，則熾灼溫度必須控制在500600。實(shí)驗(yàn)證明，熾灼溫度在700以上時(shí)，多數(shù)重金屬鹽都有不同程度的損失；以鉛為例，在700經(jīng)6小時(shí)熾灼，損失達(dá)68。某些供試品(如安乃近，諾氟沙星等)在熾灼時(shí)能腐蝕瓷坩堝而帶入較多的重金屬，應(yīng)改用石英坩堝或鉑坩堝操作。(5) 熾灼殘?jiān)酉?/p>

21、酸處理，必須蒸干，將亞硝酸除盡，否則亞硝酸會(huì)使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫，因氧化析出乳硫，影響檢查。蒸干后殘?jiān)欲}酸處理，使重金屬轉(zhuǎn)化為氯化物，在水浴上蒸干，除去多余鹽酸，加水溶解，加入酚酞指示液1滴，再逐滴加入氨試液，邊加邊攪拌，直到溶液剛顯淺紅色為止，再加醋酸鹽緩沖液(pH3.5)，使供試液的pH調(diào)節(jié)至3.5。(6) 供試品中如含有高鐵鹽，在弱酸性溶液中會(huì)使硫代乙酰胺水解生成的硫化氫進(jìn)一步氧化析出乳硫，影響檢查?？杉尤肟箟难釋⒏哞F離子還原為亞鐵離子而消除干擾。 (7) 如供試品自身為重金屬的鹽，在檢查這些藥品中的其他重金屬時(shí)，必須先將供試品本身的金屬離子除去，再進(jìn)行檢查。如枸櫞酸鐵銨中檢

22、查鉛鹽時(shí)，利用Fe3+在一定濃度的鹽酸中形成HFeCl62-，用乙醚提取除去，再調(diào)節(jié)供試液至堿性，用氰化鉀試液掩蔽微量的鐵后進(jìn)行檢查；右旋醣酐鐵注射液中重金屬檢查，也是在一定濃度的鹽酸中，用醋酸異丁酯提取除去鐵鹽后進(jìn)行檢查。 (8) 藥品本身生成的不溶性硫化物，影響重金屬檢查，可加入掩蔽劑以避免干擾。如硫酸鋅和葡萄糖酸銻鈉中鉛鹽檢查，是在堿性溶液中加入氰化鉀試液，或在中性溶液中加入酒石酸，使鋅離子或銻離子生成穩(wěn)定的絡(luò)合物，再依法檢查。(9) 為了消除鹽酸或其他試劑可能夾雜重金屬，故在配制供試品溶液時(shí)，如使用鹽酸超過1.0ml（或與鹽酸1.0ml相當(dāng)?shù)南←}酸），或使用氨試液超過2ml，以及用硫酸

23、或硝酸進(jìn)行有機(jī)破壞，或加入其他試劑進(jìn)行處理者，除另有規(guī)定外，對(duì)照溶液應(yīng)取同樣量試液蒸干后，依法檢查。 (10) 當(dāng)采用第四法時(shí)，將注射器套于濾器上后，讓注射器內(nèi)管自然下降，產(chǎn)生的壓力比較均勻。而且對(duì)于大多數(shù)樣品溶液過濾速度達(dá)到每分鐘1ml左右、對(duì)于較粘稠的樣品溶液，可施加一均勻壓力使達(dá)到該速度，以保證色斑上色調(diào)的均勻性。濾過時(shí)如濾器中存在氣泡則會(huì)影響色斑質(zhì)量，故在裝置輔助濾板、濾膜和墊圈時(shí)應(yīng)以水排除氣泡。濾器上端與注射器聯(lián)接處的尺寸大小應(yīng)以兩者能嚴(yán)密嵌合為宜，以免濾過時(shí)溶液溢漏；必要時(shí)可改用乳膠管聯(lián)接。五、砷鹽檢查法（中國藥典2000年版二部附錄 J） 1標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)砷溶液的制備 稱取三氧化二

24、砷0.132g，置1000ml量瓶中，加20氫氧化鈉溶液5ml溶解后，用適量的稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，作為貯備液。 臨用前，精密量取貯備液10ml，置1000ml量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml相當(dāng)于1g的As）。第一法（古蔡氏法） 儀器裝置 如圖1。A為100ml標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶；B為中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞，上連導(dǎo)氣管C（外徑8.0mm，內(nèi)徑6.0mm)，全長約180mm；D為具孔的有機(jī)玻璃旋塞，其上部為圓形平面，中央有一圓孔，孔徑與導(dǎo)氣管C的內(nèi)徑一致，其下部孔徑與導(dǎo)氣管C的外徑相適應(yīng)，將導(dǎo)氣管C的頂端套入旋塞下部孔內(nèi)，并使管壁與旋塞的圓孔

25、適相吻合，粘合固定；E為中央具有圓孔（孔徑6.0mm）的有機(jī)玻璃旋塞蓋，與D緊密吻合。測試時(shí)，于導(dǎo)氣管c中裝入醋酸鉛棉花60mg（裝管高度為6080mm），再于旋塞D的頂端平面上放一片溴化汞試紙(試紙大小以能覆蓋孔徑而不露出平面外為宜)，蓋上旋塞蓋E并旋緊，即得。 標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液2ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將照上法裝妥的導(dǎo)氣管C密塞于A瓶上，并將A瓶置2540C水浴中，反應(yīng)45分鐘，取出溴化汞試紙，即得。若供試品需經(jīng)有機(jī)破壞后再行檢砷，則應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液代替供試品，照各藥品項(xiàng)下規(guī)

26、定的方法同法處理后，依法制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑。檢查法 取按各藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液，置A瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)砷斑的制備，自“再加碘化鉀試液5ml”起，依法操作。將生成的砷斑與標(biāo)準(zhǔn)砷斑比較，不得更深。第二法（二乙基二硫代氨基甲酸銀法）儀器裝置 如圖2。A為100ml標(biāo)準(zhǔn)磨口錐形瓶；B為中空的標(biāo)準(zhǔn)磨口塞，上連導(dǎo)氣管C（一端的外徑為8mm，內(nèi)徑為6mm；另一端長180mm，外徑4mm，內(nèi)徑1.6mm，尖端內(nèi)徑為1mm）。D為平底玻璃管（長180mm，內(nèi)徑10mm，于5.0ml處有一刻度）。測試時(shí)，于導(dǎo)氣管C中裝入醋酸鉛棉花60mg(裝管高度約80mm)，并于D管中精密加入二乙基二硫代氨基甲酸銀試液5ml。標(biāo)準(zhǔn)

27、砷對(duì)照液的制備 精密量取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液5ml，置A瓶中，加鹽酸5ml與水21ml，再加碘化鉀試液5ml與酸性氯化亞錫試液5滴，在室溫放置10分鐘后，加鋅粒2g，立即將導(dǎo)氣管C與A瓶密塞，使生成的砷化氫氣體導(dǎo)入D管中，并將A瓶置2540水浴中反應(yīng)45分鐘，取出D管，添加氯仿至刻度，混勻，即得。 若供試品需經(jīng)有機(jī)破壞后再行檢砷，則應(yīng)取標(biāo)準(zhǔn)砷溶液代替供試品，照各藥品項(xiàng)下規(guī)定的方法同法處理后，依法制備標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液。檢查法 取照各藥品項(xiàng)下規(guī)定方法制成的供試液，置A瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液的制備，自“再加碘化鉀試液5ml”法操作。將所得溶液與標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液同置白色背景上，從D管上方向下觀察、比較，所得溶液的顏色不得

28、比標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液更深。必要時(shí)，可將所得溶液轉(zhuǎn)移至1cm吸收池中，用適宜的分光光度計(jì)或比色計(jì)在510nm波長處以二乙基二硫代氨基甲酸銀試液作空白，測定吸收度，與標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液按同法測得的吸收度比較，即得。 2方法原理 砷鹽檢查法適用于藥品中微量砷鹽(以AS計(jì)算)的限量檢查。砷鹽檢查法中的第一法(古蔡氏法)用作藥品中砷鹽的限量檢查；第二法(二乙基二硫代氨基甲酸銀法)既可檢查藥品中砷鹽限量，又可測定含量；兩法并列，可根據(jù)需要選用。古蔡氏法是利用金屬鋅與酸作用產(chǎn)生新生態(tài)的氫與藥品中微量亞砷酸鹽反應(yīng)生成具有揮發(fā)性的砷化氫，遇溴化汞試紙產(chǎn)生黃色至棕色的砷斑，與同一條件下定量標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所產(chǎn)生的砷斑比較，以判定砷

29、鹽的限量。 二乙基二硫代氨基甲酸銀法是將生成的砷化氫氣體導(dǎo)入盛有二乙基二硫代氨基甲酸銀試液的管中，使之還原為紅色膠態(tài)銀，與同一條件下定量的標(biāo)準(zhǔn)砷溶液所制成的對(duì)照液比較，或在510nm波長處測定吸收度，以判定含砷鹽的限度或測定含量。 3試藥與試液 碘化鉀試液 按藥典規(guī)定，應(yīng)臨用新配。 酸性氯化亞錫試液 按藥典規(guī)定，配成后3個(gè)月即不適用。 乙醇制溴化汞試液 按藥典規(guī)定，應(yīng)置棕色磨口塞坡璃瓶內(nèi)，在暗處保存。 溴化汞試紙 取質(zhì)地較疏松的中速定量濾紙條浸入乙醇制溴化汞試波中，1小時(shí)后取出，在暗處干燥，即得。本試紙宜置棕色磨口塞玻璃瓶內(nèi)保存。 鋅粒 以能通過1號(hào)篩的細(xì)粒無砷鋅為宜，如使用鋅粒較大時(shí)，用量酌

30、情增加，反應(yīng)時(shí)間亦應(yīng)延長為1小時(shí)。 醋酸鉛棉花 取脫脂棉，浸入醋酸鉛試液與水的等容混合液中，濕透后，瀝去過多的溶液，并使之疏松，在100以下干燥后，貯于磨口塞玻璃瓶中備用。 二乙基二硫代氨基甲酸銀試液 按藥典規(guī)定。本液應(yīng)置棕色玻璃瓶中，密塞，置陰涼處保存。 4注意事項(xiàng) (1) 所用儀器和試液等照本法檢查，均不應(yīng)生成砷斑，或經(jīng)空白試驗(yàn)至多生成僅可辨認(rèn)的斑痕。 (2) 本法所用鋅粒應(yīng)無砷，以能通過一號(hào)篩的細(xì)粒為宜，如使用的鋅粒較大時(shí)，用量應(yīng)酌情增加，反應(yīng)時(shí)間亦應(yīng)延長為1小時(shí)。 (3) 醋酸鉛棉花系取脫脂棉1.0g，浸入醋酸鉛試液與水的等容混合液12ml中，濕透后，擠壓除去過多的溶液，并使之疏松，在

31、100以下干燥后，貯于玻璃塞瓶中備用。 (4) 導(dǎo)氣管C中裝入醋酸鉛棉花時(shí)，取醋酸鉛棉花適量(60l00mg)，拉成疏松狀，每次少量，用細(xì)玻璃棒均勻地裝入導(dǎo)氣管c中，松緊要適度，裝管高度為6080mm。 (5) 新購置的儀器裝置，在使用前應(yīng)檢查是否符合要求?？蓪⑺褂玫膬x器裝置依法制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑，所得砷斑應(yīng)呈色一致。同一套儀器應(yīng)能辨別出標(biāo)準(zhǔn)砷溶液1.5ml與2.0ml所呈砷斑的深淺。 (6) 制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑或標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液，應(yīng)與供試品檢查同時(shí)進(jìn)行。因砷斑不穩(wěn)定，反應(yīng)中應(yīng)保持干燥及避光，并立即比較。標(biāo)準(zhǔn)砷溶液應(yīng)于實(shí)驗(yàn)當(dāng)天配制，標(biāo)準(zhǔn)砷貯備液存放時(shí)間一般不宜超過一年。 (7) 第一法（古蔡氏法）反應(yīng)靈敏度

32、約為0.75g（以As計(jì)），砷斑色澤的深度隨砷化氫的量而定，藥典規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)砷斑為2ml標(biāo)準(zhǔn)砷溶液（相當(dāng)于2g As）所形成的色斑，此濃度得到的砷斑色度適中，清晰，便于分辨，供試品規(guī)定含砷限量不同時(shí)，采用改變供試品取用量的方法來適應(yīng)要求，而不采用改變標(biāo)準(zhǔn)砷溶液取量的辦法。 (8) 藥品中存在的微量砷鹽常以三價(jià)的亞砷酸鹽或五價(jià)的砷酸鹽形式存在，五價(jià)的砷生成砷化氫比三價(jià)砷慢。故先加入碘化鉀和氯化亞錫為還原劑，使五價(jià)砷還原為三價(jià)砷。 (9) 如供試品中存在銻鹽，將干擾砷鹽檢查。所以本法不適用供試品為銻鹽中砷鹽檢查。但在藥典規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下，100g的銻存在不致于干擾測定。實(shí)驗(yàn)中加入氯化亞錫不僅有效地抑制

33、銻的干擾，防止銻化氫與溴化汞試紙作用生成銻斑或與二乙基二硫代氨基甲酸銀試液反應(yīng)，干擾砷鹽檢查；還可與鋅作用，在鋅粒表面形成鋅錫齊，起去極化作用，均勻連續(xù)地使產(chǎn)生新生態(tài)的氫，使砷鹽還原為砷化氫，有利于砷斑的形成。(10) 供試品和鋅粒中可能含有少量硫化物，在酸性溶液中產(chǎn)生H2S氣體，干擾實(shí)驗(yàn)，故用醋酸鉛棉花吸收除去H2S；因此，導(dǎo)氣管中的醋酸鉛棉花，要保持疏松、干燥，不要塞入近下端。 (11) 浸入乙醇制溴化汞試液的濾紙的質(zhì)量，對(duì)生成砷斑的色澤有影響，用定性濾紙，所顯砷斑色調(diào)較暗，深淺梯度無規(guī)律；用定量濾紙質(zhì)地疏松者，所顯砷斑色調(diào)鮮明，梯度規(guī)律，因此必須選用質(zhì)量較好，組織疏松的中速定量濾紙；溴化

34、汞試紙一般宜新鮮制備。(12) 鋅粒大小影響反應(yīng)速度，為使反應(yīng)速度及產(chǎn)生砷化氫氣體適宜，選2mm左右粒徑的鋅粒。反應(yīng)溫度一般控制在30左右，冬季可置溫水浴中。如反應(yīng)太快，宜適當(dāng)降低反應(yīng)溫度，使砷化氫氣體能被均勻吸收。(13) 如供試品為鐵鹽，需先加酸性氯化亞錫試液，將高鐵離子還原為低價(jià)鐵而除去干擾。如枸櫞酸鐵銨的砷鹽檢查。 (14) 有機(jī)藥品中的砷鹽檢查可溶于水的脂肪族有機(jī)酸如枸櫞酸、乳酸及其鹽、氨基己酸與葡萄糖酸鈣等，一般可不經(jīng)有機(jī)破壞而直接依法檢查砷鹽；多數(shù)環(huán)狀結(jié)構(gòu)的有機(jī)藥物，因砷與雜環(huán)分子可能以共價(jià)鍵結(jié)合，需先行有機(jī)破壞，否則檢出結(jié)果偏低或難以檢出。有機(jī)破壞時(shí)，所用試劑的含砷量如超過1弘

35、g，除另有規(guī)定外，應(yīng)取同量的試劑按供試品同樣處理，最后加入標(biāo)準(zhǔn)砷溶液一定量，制備標(biāo)準(zhǔn)砷斑或標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液，進(jìn)行比較。 (15) 如供試品為硫化物、亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽等，則在酸性溶液中可生成大量硫化氫或二氧化硫氣體，干擾檢查；可加硝酸使氧化成硫酸鹽以除去干擾，如硫代硫酸鈉中砷鹽檢查。 (16) 在二乙基二硫代氨基甲酸銀法中，需要加入一定量的有機(jī)堿以中和反應(yīng)中的二乙基二硫代氨基甲酸；USP配制成0.5二乙基二硫代氨基甲酸銀的吡啶溶液，其缺點(diǎn)是吡啶有惡臭；中國藥典采用含1.8三乙胺和0.25二乙基二硫代氨基甲酸銀的氯仿溶液，呈色穩(wěn)定性及試劑穩(wěn)定性均好，低毒，無臭，與砷化氫產(chǎn)生的顏色在510nm波長處

36、有最大吸收。如遇室溫低，按法操作，標(biāo)準(zhǔn)砷對(duì)照液不顯色，可將D管置2540水浴加溫使顯色。 (17) 二乙基二硫代氨基甲酸銀試液在配制后兩周內(nèi)穩(wěn)定。當(dāng)供試液中含砷（As）0.757.5g時(shí)顯色反應(yīng)的線性關(guān)系良好，2小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。本法操作時(shí)由于砷化氫氣體導(dǎo)入盛有準(zhǔn)確5ml的二乙基二硫代氨基甲酸銀試液中，在2540水浴中反應(yīng)45分鐘后，有部分氯仿?lián)]發(fā)，比色前應(yīng)添加氯仿至5.00ml，搖勻，比色。因二乙基二硫代氨基甲酸銀試液帶淺黃綠色，測吸收度時(shí)要用此試液作空白。六、熾灼殘?jiān)鼨z查法（中國藥典2000年版二部附錄 N）1標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定取供試品1.02.0g或各藥品項(xiàng)下規(guī)定的重量，置已熾灼至恒重的坩堝中

37、，精密稱定，緩緩熾灼至完全炭化，放冷至室溫；除另有規(guī)定外，加硫酸0.51ml使?jié)駶?，低溫加熱至硫酸蒸氣除盡后，在700800熾灼使完全灰化，移置干燥器內(nèi)，放冷至室溫，精密稱定后，再在700800熾灼至恒重，即得。如需將殘?jiān)糇髦亟饘贆z查，則熾灼溫度必須控制在500600。 2方法原理 藥品（多為有機(jī)化合物）經(jīng)高溫加熱分解或揮發(fā)后遺留下不揮發(fā)的無機(jī)物，經(jīng)加硫酸并熾灼（700800）后生成金屬氧化物或其硫酸鹽即為熾灼殘?jiān)?3儀器與用具高溫爐（馬福爐）、坩鍋（瓷坩鍋、鉑坩鍋、石英坩鍋）、坩鍋鉗、通風(fēng)柜。4操作方法(1) 空坩鍋恒重 取坩鍋置于高溫爐內(nèi)，將蓋子斜蓋在坩鍋上，經(jīng)700800熾灼約3060分鐘，取出坩鍋，稍冷片刻，移置干燥器內(nèi)并蓋上蓋子，放冷至室溫（一般約需60分鐘），精密稱定坩鍋重量。再在上述條件下熾灼約30分鐘，取出，置干燥器內(nèi)，放冷，稱量；直至恒重，備用。以上熾灼操作也可使用煤氣燈進(jìn)行。(2) 稱取供試品 取供試品1.02.0g或各藥品項(xiàng)下規(guī)定的重量，置已熾灼至恒重的坩鍋內(nèi)，精密稱定。(3) 炭化 將盛有供試品的坩鍋斜置電爐或煤氣燈上緩緩灼燒（避免供試品驟然膨脹而逸出），熾灼至供試品全部炭化呈黑色，并不冒濃煙，放冷至室溫?！疤炕辈僮鲬?yīng)在通風(fēng)柜內(nèi)進(jìn)行。(4) 灰化 除另有規(guī)定外，滴加硫酸0.51.0ml，使炭化物全部濕潤，