培養(yǎng)基質(zhì)量控制作業(yè)指導(dǎo)書

1、培養(yǎng)基質(zhì)量控制作業(yè)指導(dǎo)書文件編號：WLCDC/ZD7651、目的：為加強(qiáng)我屮心檢驗(yàn)科實(shí)驗(yàn)室的工作管理，保證實(shí) 驗(yàn)室的檢測質(zhì)量，特制定此作業(yè)指導(dǎo)書；2、范圍：適用于實(shí)驗(yàn)室微生物培養(yǎng)基使用前的質(zhì)量驗(yàn)收、 使用過程屮的質(zhì)量控制。3、職責(zé)：3、1檢驗(yàn)人員：按照本規(guī)程規(guī)對培養(yǎng)基使用前及使用過程屮 進(jìn)行質(zhì)量控制，確保培養(yǎng)基符合相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)的要求。3、2科室負(fù)責(zé)人：負(fù)責(zé)指導(dǎo)、監(jiān)督檢驗(yàn)人員對培養(yǎng)基進(jìn)行質(zhì) 量控制。4、生產(chǎn)企業(yè)提供的材料培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家隨產(chǎn)品應(yīng)提供下列 文件：培養(yǎng)基、獨(dú)立成分、添加成分名稱；批號；使用前的pH； 儲藏信息和有效期；性能評價和所用測試菌株；技術(shù)數(shù)據(jù)清單； 質(zhì)控證書/必要的安全、危害數(shù)據(jù)。

2、5、驗(yàn)收實(shí)驗(yàn)室收到培養(yǎng)基后，應(yīng)填寫“培養(yǎng)基驗(yàn)收檢查記 錄單”，檢查包裝及完整性，標(biāo)識是否清晰等，驗(yàn)收合格后按照“培養(yǎng)基編碼系統(tǒng)使用規(guī)程”對培養(yǎng)基進(jìn)行編號。6、貯存及使用前質(zhì)量確認(rèn)6、1商品化培養(yǎng)基應(yīng)嚴(yán)格按供應(yīng)商提供的貯存條件、有效期 進(jìn)行貯存。6、2驗(yàn)收合格的培養(yǎng)基應(yīng)建立“商品化干粉培養(yǎng)基目錄清 單”，使用前對容器密閉性進(jìn)行復(fù)查。6、3開封的脫水培養(yǎng)基，每次使用前應(yīng)對其質(zhì)量進(jìn)行檢查， 通過粉末的流動性、均勻性、結(jié)塊情況和色澤變化等判斷培養(yǎng)基 的質(zhì)量變化。若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基受潮或物理性狀發(fā)生明顯改變則不應(yīng) 再使用。6、4制備好的成品培養(yǎng)基應(yīng)建立“成品培養(yǎng)基目錄清單”， 每次使用前應(yīng)檢查：顏色是否發(fā)生變

3、化?/是否蒸發(fā)/脫水?/是否有 微生物生長？等。如果發(fā)生上述異常情況，則不應(yīng)再使用。7、制備好的成品培養(yǎng)基的質(zhì)量控制新購的不同批次的商品 化培養(yǎng)基在使用前應(yīng)進(jìn)行培養(yǎng)基性能測試，符合要求后使用。成品培養(yǎng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制應(yīng)包括物理指標(biāo)和微生物指標(biāo)的 測試，根據(jù)測試結(jié)果及時填寫“實(shí)驗(yàn)室制備培養(yǎng)基測試結(jié)果記錄 單”。7、1物理指標(biāo)控制1）測試20C25C的PH值2）瓊脂層 厚度；色澤；透明度和（或）是否存在肉眼可見雜質(zhì)；凝膠穩(wěn)定 性、粘稠度和濕度。7、2微生物學(xué)指標(biāo)控制可根據(jù)要求選用定量方法、半定量方 法或定性方法（詳見表1-表）對培養(yǎng)基性能進(jìn)行測試，具體操作 方法詳見作業(yè)指導(dǎo)書“培養(yǎng)基性能測試指南”

4、。7、3微生物污染的控制從每批制備好的培養(yǎng)基屮選取至少一 個（或1%）平板或試管，置于37C或按特定標(biāo)準(zhǔn)屮規(guī)定的溫度培 養(yǎng) 18ho8、生長特性8、1生長率將適量測試菌株的工作培養(yǎng)物接種至固體、半固 體和液體培養(yǎng)基屮，每種培養(yǎng)基上菌株的生長率應(yīng)達(dá)規(guī)定的最低 限值。1）定量方法生長率PR的計算：PR二NS/NO NS：從一個或 多個待測培養(yǎng)基平板上得到的菌落總數(shù)。N 0：從一個或多個規(guī)定 的參考培養(yǎng)基平板上獲得的菌落總數(shù)（該菌落總數(shù)應(yīng)IOOcfu ） o要求：非選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率最低應(yīng)為0、7,該 類培養(yǎng)基應(yīng)易于目標(biāo)菌生長；選擇性培養(yǎng)基上目標(biāo)菌的生長率最 低應(yīng)為0、1；每平板（或每試管

5、）的接種水平為IoCFU IOOCFUO2）半定量方法半定量方法采用生態(tài)測量技術(shù)在平板上劃 線，平板板連續(xù)劃線區(qū)域得分的總和即為生長指數(shù)G, G值不應(yīng)超 過標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的允許范圍。3）定性方法定性方法采用劃線法觀察。選擇性 將濃度為104CFUmL106CFUmL的非目標(biāo)菌工作 菌株懸浮液接種至選擇培養(yǎng)基和參考培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基的選擇性 應(yīng)達(dá)到規(guī)定值。定量方法選擇因子SF： SF二DO Parker S生長率 370C24-48h 金黃色葡萄球菌 ATCC653825923 TSA 定量 PR20、5 黑色/灰色菌落，周圍為一混濁帶，其外有透明帶 選擇性370C48h 大腸桿菌ATCC25922/8

6、739定性全部抑制特異性 370C24-48h表皮葡萄球菌ATCCI2228 定性 黑色/灰色 菌落，周圍為一混濁帶，其外無透明帶MYP S生長率300C24- 48h臘樣芽胞桿菌ATCClI778 TSA定量PR20、7具沉淀帶的粉 色菌落選擇性37C48h大腸桿菌ATCC25922 定性全部抑 制特異性37C48h枯草芽胞桿菌ATCC6633 定性一 不具沉淀帶的粉色菌落培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株參 考培養(yǎng)基控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)VRBG （結(jié)晶紫中性紅膽 鹽葡萄糖瓊脂）S生長率37C24h大腸桿菌ATCC25922/8739 TSA定量PR20、5帶有或不帶沉淀帶的粉紅色或紅色菌落鼠傷

7、 寒沙門菌ATCCl4028選擇性37C20h糞鏈球菌ATCC29212/19433 一定性全部抑制一一 VRBL （紫紅膽汁乳糖）S生長率 30oC20h大腸桿菌ATCC259228739 TSA定量PR20、5帶有或不 帶沉淀帶的淡紫色菌落選擇性30oC20h糞鏈球菌 ATCC29212/19433 定性全部抑制特異性30C20h銅 綠假單胞菌ATCC27853 定性無色至淺棕色菌落CT-SMAC （改良山梨醇麥康凱瓊脂）S生長率370C24h大腸桿菌0157： H7 ATCC4389443895 TSA 定量 PR20、5 透明菌落，表面 淡黃棕色，菌落直徑約Imm選擇性370C24h金

8、黃色葡萄球菌ATCC6538/25923定性全部抑制特異性37C24h大腸桿菌 ATCCll775/25922 定性粉色菌落BGBLB （煌綠乳糖膽 鹽肉湯）L生長率 30oC24-48h 大腸桿菌 ATCC259228739 TSA 半定量濁度2+,導(dǎo)管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并渾濁弗氏檸檬酸桿菌 ATCC25922/8739選擇性糞鏈球菌ATCC29212/19433定性不生長 EC L生長率440C2448h大腸桿菌ATCC25922 半 定量 濁度2+,導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣 產(chǎn)氣并渾濁 選擇性440C2448h 銅綠假單胞菌ATCC27853b 定性不生長 ECMUG LS- MUG L生長率440

9、C2448h大腸桿菌ATCC25922 半定量 濁度2+,導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并渾濁，產(chǎn)生熒光選擇性 440C2448h銅綠假單胞菌ATCC27853b 定性不生長 乳糖膽鹽發(fā)酵培養(yǎng)L生長率37C24h大腸桿菌ATCC25922 半定量導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣產(chǎn)氣并變黃色選擇性370C24h鼠傷 寒沙門菌ATCCi4028 定性不產(chǎn)氣、仍為紫色LST （月 桂酸肉湯）L生長率370C24h大腸桿菌ATCC25922 半定 量導(dǎo)氣管1/3產(chǎn)氣一一選擇性370C24h福氏志賀氏菌 CMCC51572 定性表2計數(shù)用非選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株參考培養(yǎng)基控制方法判定標(biāo)準(zhǔn) 特征反應(yīng)PCA （平板計

10、數(shù)瓊脂）S生長率30oC72h大腸桿菌 ATCC259228739 TSA定量PR20、7 金黃色葡萄球菌 ATCC6538枯草芽抱桿菌ATCC6633表3選擇性增菌培養(yǎng)基培養(yǎng) 基用途培養(yǎng)條件測試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)EEL生長率370C24h大腸桿菌ATCC25922/8739半定量VRBG IOCFU粉紅至紅色菌落，有或沒有沉淀帶鼠傷寒沙門菌 ATCCl4028選擇性糞腸球菌ATCC29212全部抑制RVS L生長 率41、5C24h鼠傷寒沙門菌ATCCI4028半定量XLD或其他選擇 性培養(yǎng)基上10CFU 腸炎沙門氏菌ATCCI3076銅綠假單胞菌 ATCC27853 選擇性 41

11、、5C24h大腸桿菌ATCC25922半定量TSA 全抑制 糞鏈球菌ATCC29212 TSA 10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見標(biāo) 準(zhǔn)）+大腸桿菌ATCC25922 +銅綠假單胞菌ATCC27853b選擇性 370C24h大腸桿菌ATCC25922半定量TSA 10CFU不同培養(yǎng)基上菌落特征不同（見標(biāo) 準(zhǔn)）傷寒沙門菌CMCC50071選擇性37C24h大腸桿菌ATCC25922 TSA 10CFU不同 培養(yǎng)基上菌落特征不同（見標(biāo)準(zhǔn)）副溶血性弧菌CMCC20001選擇 性 370C24h 大腸桿菌 ATCC259228739 TSA IOCFU 福氏 志賀氏菌CMCC515727、5%氯化

12、鈉肉湯L生長率370C24h金黃色葡萄球菌 ATCC6538半定量B-P平板或其他培養(yǎng)基上10CFU不同培養(yǎng)基上 菌落特征不同（見標(biāo)準(zhǔn)）表4非選擇性增菌培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途 培養(yǎng)條件測試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)BHI生長率 370C24h金黃色葡萄球菌ATCC6538定性濁度12 蛋白月東 鹽L稀釋20250C45min大腸桿菌ATCC25922定量+/-50%菌 落數(shù)/至（+/-50%原始菌落數(shù)一一金黃色葡萄球菌ATCC25923表 4非選擇性增菌培養(yǎng)基（續(xù)）培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株 控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)乳糖蛋白月東肉湯L生長率 370C24h大腸桿菌ATCC25922 定性導(dǎo)氣管1/

13、3產(chǎn)氣選擇性 370C24h鼠傷寒沙門菌ATCCI4028 定性 SCDLP液體培 養(yǎng)基L生長率370C24h銅綠假單胞菌ATCC27853定性濁度 12大腸桿菌ATCC25922金黃色葡萄球菌ATCC6538液體沙氏培養(yǎng)基L生長率26C5天白色念珠菌CMCC98001定性 濁 度12 真菌培養(yǎng)基L生長率260C5天白色念珠菌 CMCC98001定性濁度12 表5選擇性分離培養(yǎng)基培養(yǎng)基 用途培養(yǎng)條件測試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)亞硫酸 酸鉗瓊脂（BS） S生長率370C48h鼠傷寒沙門菌ATCCI4028 定性良好生長（2）菌落呈黑色，有金屬光澤 福氏志賀氏菌CMCC51572菌落呈棕 色選

14、擇性大腸桿菌ATCC25922/8739全部或部分抑制（01） 無典型菌落 糞鏈球菌ATCC29212/19433全部抑制（O） XLD S 生長率37C24h鼠傷寒沙門菌ATCCI4028定性 良好生長（2）菌落呈黑色福氏志賀氏菌CMCC51573菌落呈無色選擇性大 腸桿菌ATCC25922/8739全部或部分抑制（01）無典型菌落糞 鏈球菌ATCC29212/19433全部抑制（0）血瓊脂平板S生長率 370C2448h金黃色葡萄球菌ATCC6538/25923定性良好生長（3 溶血,透明溶血環(huán) 糞鏈球菌ATCC29212定性 良好生長溶血， 草綠色溶血環(huán)TCBS S生長率370C2448

15、h霍亂弧菌 CMCCI6109定性良好生長菌落較大，呈黃色副溶血性弧菌 CMCC20001定性良好生長菌落較大，呈綠色4號瓊脂S生長 率370C2448h霍亂弧菌CMCCI6109定性 良好生長 菌落較大、 扁平透明、濕潤、中心帶有黑色 非01群霍亂弧菌CMCCI7045定 性良好生長菌落較大、扁平透明、濕潤、中心帶有黑色選擇性 370C24h大腸桿菌ATCC25922/8739定性全部或部分抑制（0 1）一一表5選擇性分離培養(yǎng)基（續(xù)）培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件 測試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特征反應(yīng)伊紅美蘭瓊脂S生長 率37C24h大腸桿菌ATCC25922/8739定性良好生長菌落紫黑 色帶金屬光澤鼠傷

16、寒沙門菌ATCCI4028定性良好生長菌落灰白 色半透明福氏志賀氏菌CMCC51573定性 良好生長 菌落灰白色半 透明TSI （三糖鐵瓊脂）S生長率370C24-48h大腸桿菌ATCC25922/8739定性 良 好生長斜面及底層均變黃，產(chǎn)氣，硫化氫陽性 普通變形桿菌CMCC49001定性良好生長斜面及底層均變黃，產(chǎn)氣，硫化氫陽 性福氏志賀氏菌CMCC51573定性良好生長底層變黃，斜面變 紅，不產(chǎn)氣，硫化氫陰性 鼠傷寒沙門菌ATCCl4028定性 良好生 長底層變黃，斜面變紅，產(chǎn)氣，硫化氫陽性表6非選擇性分離 培養(yǎng)基培養(yǎng)基用途培養(yǎng)條件測試菌株控制方法判定標(biāo)準(zhǔn)特 征反應(yīng) 營養(yǎng)瓊脂S生長率370C24h大腸桿菌ATCC25922定性 良好生長(2)鼠傷寒沙門菌ATCCI4028c小腸耶爾森氏菌ATCC237159、記錄