快速學(xué)會做藥敏試驗(yàn)(優(yōu).選)

1、快速學(xué)會做藥敏試驗(yàn)一、藥敏實(shí)驗(yàn)在臨床診斷中應(yīng)用意義：1、在畜牧產(chǎn)業(yè)中，各種細(xì)菌性疾病很容易給養(yǎng)殖業(yè)造成經(jīng)濟(jì)損失，使用抗生素防治細(xì)菌性疾病成為經(jīng)常性工作。但在養(yǎng)殖過程中不科學(xué)的、盲目的濫用抗生素，造成細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性問題正變得越來越突出，使抗菌藥的療效降低，療程延長，還使死亡率升高和治療費(fèi)用增加，給養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大經(jīng)濟(jì)損失。 2 、耐藥菌株還可能將耐藥性基因由動物轉(zhuǎn)移給人類，對人類健康造成潛在威脅。如何避免濫用抗生素，藥敏試驗(yàn)在臨床診斷中的應(yīng)用就顯得重要了。3 、藥敏實(shí)驗(yàn)可以相對快速有效地檢測病原菌對各種抗菌藥的敏感性，指導(dǎo)臨床合理用藥、靈活選藥?？梢栽诒镜貐^(qū)容易買到的藥品中選出最敏感的藥物，既能縮

2、短病程，又能避免盲目用藥，減少費(fèi)用。 4 、因?yàn)樗幟魧?shí)驗(yàn)在動物體外進(jìn)行，操作相對簡單，成本相對較低，既經(jīng)濟(jì)又快速有效，可以對流行病學(xué)調(diào)查進(jìn)行監(jiān)控，控制和預(yù)防耐藥菌株的流行，在生產(chǎn)中具有非常重要現(xiàn)實(shí)意義。二、藥敏試驗(yàn)的步驟： 1 、瓊脂平板制備按照營養(yǎng)瓊脂干粉說明來進(jìn)行稀釋，稀釋后瓊脂放在微波爐里進(jìn)行加熱，加熱后瓊脂移至超凈工作臺中，靜置待溫度降至50（手指能接受的最高溫度）左右時(shí)，開始倒平板，內(nèi)徑225px 平皿每個(gè)平皿倒入約 10ml 瓊脂液，倒入后迅速混勻鋪滿平皿底部。2、藥液制備：按藥品使用說明書上的配料或飲水濃度配置按 1g 需加多少毫升水或配多少毫克飼料，就相當(dāng)于配制藥液所加蒸餾水的

3、毫升數(shù)。如 10g 藥物可配 50kg 飼料，其換算方法為： 1g 本品加 5000ml 蒸餾水。此溶液液即為用于做藥敏試驗(yàn)的藥液。 3 、藥敏紙片制備：要用質(zhì)量較好的定性濾紙，用普通的打孔器打成直徑6mm 的圓形小紙片。取圓紙片 50 片放入清潔干燥的小瓶或小平皿中，以單層牛皮紙?jiān)诨虬＝?jīng)15 磅 15-20 分鐘高壓滅菌后，置于37 溫箱或烘箱中一天，使完全干燥。按每張紙片飽和吸水量為0.01ml 計(jì)，在上述含有50 片紙片的小瓶內(nèi)加入藥液0.5ml ，不時(shí)翻動，使濾紙片將藥液均勻吸凈，一般浸泡 30 分鐘即可。同時(shí)在記錄藥物名稱，于 37 溫箱過夜。在溫箱或烘箱中的時(shí)間不宜過長，以免

4、某些抗生素失效。青霉素、金霉素宜在低溫下真空干燥。干燥后即密封。切勿受潮，置陰暗干燥處或家用冰箱中保存，有效期 4-6 個(gè)月。4、病料接種取新鮮病料組織于超凈工作臺中或酒精燈旁，剪取新鮮組織斷面無菌涂抹到營養(yǎng)瓊脂板上，涂布整個(gè)瓊脂平板表面，反復(fù)涂布幾次，保證涂布均勻。5 、貼藥敏紙片用無菌鑷子將紙片放于固體培養(yǎng)基表面并輕壓，使紙片與培養(yǎng)基表面完全接觸。為了能準(zhǔn)確觀察結(jié)果，要求藥敏紙片均勻分布于培養(yǎng)基上，位置安排適中，防止出現(xiàn)抑制圈重疊。一般各紙片中心相距應(yīng)大于 24mm ，可在平皿中央貼一片，外周等距離貼7 9 片。記住每種藥敏紙片的名稱。6、溫箱培養(yǎng)貼完藥敏紙片的平皿倒放在37 恒溫箱中培養(yǎng)

5、24 小時(shí)以上。三、藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察四、藥敏實(shí)驗(yàn)選藥原則 1 、在選擇高敏藥物時(shí)還應(yīng)考慮藥物的吸收途徑。因?yàn)樗幟粼囼?yàn)是藥液直接和細(xì)菌接觸，而在給畜禽用藥時(shí)，必須通過機(jī)體的吸收才能使藥物發(fā)揮療效，所以在給畜禽用藥時(shí)，高敏藥物一定要配合適宜的給藥方法，并予以足夠劑量、足夠療程，才會取得好的治療效果。 2 、藥敏試驗(yàn)結(jié)果僅為臨床選擇高敏藥物的參考。因動物機(jī)體及環(huán)境等因素影響，藥物的藥敏試驗(yàn)與臨床治療效果的符合率一般為 70 80%，所以也不能過分地依賴藥敏試驗(yàn)。如發(fā)現(xiàn)療效不顯著應(yīng)及時(shí)換藥。 3 、藥敏試驗(yàn)確定的首選藥物不是一成不變。隨著藥物使用頻率的增加及新特藥的不斷出現(xiàn)，細(xì)菌對原先的高敏感藥物可能

6、不再敏感。因此，定期進(jìn)行藥敏試驗(yàn)了解本場細(xì)菌對抗菌藥的敏感性情況是很有必要的。4、窄譜抗生素能解決的問題不選廣譜抗生素，一種抗生素可達(dá)到治療作用時(shí)，不要用兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用。必須應(yīng)用兩種抗生素時(shí)，應(yīng)選擇聯(lián)合應(yīng)用具有協(xié)同作用的藥物。 5 、避開已經(jīng)使用過的藥物或其同類藥物，發(fā)病期間已用過的藥物或同類藥物一般不用。五、藥敏片的制作藥敏片一般可以由廠家提供，也可以自己制作，制作藥敏片直接選用各藥廠的成品藥來做。 制作藥敏片設(shè)備和器皿： 需要恒溫箱、 平皿 （直徑 90mm 或更大一點(diǎn)的都行） 、燒杯、蒸餾水、濾紙、打孔器。具體的操作步驟： 1 、將濾紙用打孔器打好適量直徑為6mm 的小圓紙片。2、將所

7、需培養(yǎng)皿或玻璃小瓶、玻璃棒、微量吸管、 鑷子、 濾紙、 濾紙片等進(jìn)行高壓滅菌， 一般 121，0.15帕斯卡，1520min。3、在烘干箱或恒溫箱內(nèi)3760C,放置1224小時(shí)直至烘干。4、將要選的藥用蒸儲水按藥品使用治療量的比例配制成藥液， 按 5ml 藥液 3040 個(gè)小圓紙片浸泡。5 、將浸泡好的藥敏片用鑷子夾出，放到另一干燥平皿中，注意藥敏做的多時(shí)，放濕藥敏片不要完全重疊地放。這樣會使有的藥敏片在干燥過程中所沾的藥量不一，影響您對藥的評價(jià)。因?yàn)橛械乃幉蝗?，藥廠會加一些助溶劑，干燥過程中有的藥會析出。這時(shí)藥敏片疊放位置會影響所沾的藥量的。 6 、將盛濕藥敏片的平皿放到恒溫箱中，溫度37，

8、放置1224小時(shí)，不同的藥干的時(shí)間也可能不一樣，所以自己需要視情況而定。在這個(gè)過程中要注意勤翻一下藥敏片，盡量不要讓它們沾在一起。 7 、藥敏片的儲藏：將烘干的藥敏片分裝，標(biāo)上藥名和日期，儲存要注意防潮。短期可4c冷藏保存36個(gè)月，長期要-20C冷凍保存。六、培養(yǎng)基的制備：獸醫(yī)臨床上一般用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基。將成品營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基粉按說明取適量，加蒸餾水溶解，放入高壓滅菌鍋，121c滅菌1520min,冷卻到50 c左右，傾注到已滅過菌的培養(yǎng)皿中，厚度約 56mm,冷卻凝固后使用或放入4冰箱中備用。七、接種細(xì)菌：在對病死畜禽解剖時(shí)，切取一小塊肝、脾等器官，使用新鮮創(chuàng)面在培養(yǎng)基上涂滿，操作時(shí)就避免感染

9、其他雜菌。八、粘貼藥敏紙片：將鑷子于酒精燈火焰上滅菌后略停，取藥敏片貼到培養(yǎng)基表面。為了使藥敏片與培養(yǎng)基緊密相貼，可用鑷子輕輕按壓幾下藥敏紙片。每個(gè)培養(yǎng)皿所用藥敏紙片的數(shù)量和分布可根據(jù)培養(yǎng)皿的大小確定，一般采用中央貼一片，周圍等距離貼5 至 6 片。九、 培養(yǎng)細(xì)菌： 將貼上藥敏紙片的培養(yǎng)基置于37 恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)1218h,觀察抑菌圈大小，判定結(jié)果。在涂有細(xì)菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內(nèi)向四周擴(kuò)散，其濃度呈梯度遞減，因此在紙片周圍一定距離內(nèi)的細(xì)菌生長受到抑制，形成抑菌圈。按抑菌圈直徑大小判定敏感度高低，一般抑菌圈直徑在 20mm以上為極敏，1520mm為高敏,1015mm 為中敏， 10mm 以下為低敏，無抑菌圈為不敏。十、指導(dǎo)用藥：做藥敏試驗(yàn)之后，應(yīng)選擇高敏藥物進(jìn)行治療，也可選用兩種藥物協(xié)助使用，以減少耐藥菌株。因?yàn)樗幰罕仨毻ㄟ^機(jī)體吸收才能達(dá)到一定效果，所以選用高敏藥物同時(shí)，還應(yīng)考慮藥物的吸收途徑，配合適宜的給藥方法，才能達(dá)到更好的治療效果。十一、注意事項(xiàng)：為了使試驗(yàn)結(jié)果安全可靠，要注意以下幾個(gè)影響藥敏結(jié)果的因素：同一平板上細(xì)菌接種量應(yīng)恒定，如太多，抑菌圈變小；藥物的濃度和總量直接影響抑菌圈的大小