首烏益智膠囊對血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶及性激素水平的影響

1、首烏益智膠囊對血管性癡呆大鼠學(xué)習(xí)記憶及性激素水平的影響    作者：李長生 楊曉妮 賀仆 劉世青 林梅青    作者單位：山東省千佛山醫(yī)院，山東 濟(jì)南 250014 【摘要】  目的 觀察中藥首烏益智膠囊對血管性癡呆(VD)大鼠學(xué)習(xí)記憶及性激素水平的影響，探討其療效及作用機(jī)制。方法 用改良Pulsinelli四血管阻斷（4?VO）法制造VD大鼠模型，隨機(jī)分為首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組、鹽水組，每組16只（雌雄各8只），并設(shè)假手術(shù)組10只（雌雄各5只）。給藥20 d后進(jìn)行模型大鼠水迷宮測試和性激素水平的測定。

2、結(jié)果 首烏益智膠囊組大鼠的定位航行和空間探索試驗(yàn)測試成績明顯好于腦復(fù)康組和鹽水組（P0.05）。首烏益智膠囊組VD雌鼠治療后E2、孕酮（P），水平明顯高于腦復(fù)康組和鹽水組；首烏益智膠囊組VD雄鼠治療后E2水平明顯低于腦復(fù)康組和鹽水組，而睪酮（T）水平明顯高于腦復(fù)康組和鹽水組（均P0.05）。結(jié)論 首烏益智膠囊對VD大鼠有明顯的治療作用，其作用機(jī)制之一是調(diào)整體內(nèi)性激素水平。 【關(guān)鍵詞】  首烏益智膠囊；血管性癡呆；性激素；實(shí)驗(yàn)研究血管性癡呆（VD）是因腦血管疾病所致的智能及認(rèn)知功能障礙的臨床綜合征1，是老年人多發(fā)病和疑難病，給社會和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)，因此探討其發(fā)病原因和機(jī)制，研究開發(fā)

3、治療該病的新藥具有十分重要的意義。隨著對VD研究的不斷深入，人們認(rèn)識到性激素與VD關(guān)系密切，性激素水平與VD的發(fā)生發(fā)展存在著密切聯(lián)系。本研究采用改良Pulsinelli四血管阻斷（4?VO）法制造VD大鼠模型，觀察首烏益智膠囊對VD大鼠的療效，并通過性激素水平的變化，進(jìn)一步探討首烏益智膠囊對VD的作用機(jī)制。1  材料與方法1.1  材料Wistar健康老齡大鼠120只（月齡>15個月），雌雄各半，體重300400 g。山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物質(zhì)量合格證號：010281。首烏益智膠囊（藥物組成：制何首烏、黃芪、丹參、川芎、益智仁、天麻、水蛭等）由濟(jì)南鋼鐵職工醫(yī)

4、院制劑室生產(chǎn)。腦復(fù)康片由濟(jì)南東風(fēng)制藥有限公司生產(chǎn)（批號0307043）。碘125I?人血清睪酮（T）放射免疫藥盒、碘125I?雌二醇（E2）放射免疫藥盒、碘125I?孕酮（P）放射免疫藥盒，均購于北京北免東雅生物技術(shù)研究所。1.2  方法大鼠購進(jìn)，室溫2024，相對濕度4555%，飼養(yǎng)1 w后，Morris水迷宮法進(jìn)行大鼠行為學(xué)訓(xùn)練。方法：定位航行試驗(yàn),每天下午4次，將受試大鼠按順時鐘方向順序面向池壁放入水中。記錄2 min內(nèi)找到平臺的時間（逃避潛伏期）。共學(xué)習(xí)6 d。用改良Pulsinelli4?VO法制造VD大鼠模型2,3。大鼠于術(shù)前禁食12 h，不禁水。0.4%戊巴比妥鈉，0.

5、16 g/kg腹腔麻醉，將大鼠俯臥固定，行背側(cè)頸正中切口，逐層鈍性分離，暴露雙側(cè)第1頸椎橫突翼小孔，用直徑約0.5 mm的電凝針灼燒雙側(cè)翼小孔內(nèi)的椎動脈，造成永久性閉塞，再將大鼠仰臥固定，行腹側(cè)頸正中切口，鈍性分離雙側(cè)頸總動脈，以“4”號絲線穿線備用。24 h后，用微動脈夾夾閉雙側(cè)頸總動脈5 min，間隔1 h后再夾閉5 min，共夾閉3次，局部傷口縫合前，以慶大霉素局部噴灑處理防止感染，術(shù)后3 d給予青霉素2 U/kg肌肉注射抗感染。假手術(shù)組步驟同上，不做缺血處理。造模術(shù)后7 d，對大鼠進(jìn)行水迷宮測試。定位航行試驗(yàn)：歷時6 d，每天下午4次，將受試大鼠按順時鐘方向順序面向池壁放入水中。記錄2

6、 min內(nèi)找到平臺的時間。前5 d學(xué)習(xí)，第6天測試，記錄測試成績?？臻g探索試驗(yàn)：第6天下午定位航行試驗(yàn)后撤除平臺，將大鼠從任意一點(diǎn)放入水中，拍攝游泳過程1 min，分析循行路徑，統(tǒng)計(jì)其在原平臺所在象限內(nèi)外循行路徑之比，和在該象限內(nèi)外停留的時間之比，統(tǒng)計(jì)跨越原平臺位置的次數(shù)。按術(shù)后水迷宮定位航行測試成績，隨機(jī)分組。將VD模型大鼠分為首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組、鹽水組，每組16只（雌雄各8只）。并設(shè)假手術(shù)組10只（雌雄各5只）。術(shù)后7 d，給大鼠用灌胃器灌胃，每天下午灌一次，共灌胃20 d。灌胃液體溫度為20。首烏益智膠囊組，首烏益智靈溶液灌胃，每次5 ml，含藥量0.24 g。鹽水組，生理鹽水灌胃

7、，每次5 ml。腦復(fù)康組，腦復(fù)康溶液灌胃，每次5 ml，含藥量0.06 g。假手術(shù)組，生理鹽水灌胃，每次5 ml。用藥20 d后，對大鼠進(jìn)行水迷宮測試。方法同造模后水迷宮測試。迷宮后3 d，頸靜脈取血測性激素。1.3  性激素的測定 E2、P、T三個試驗(yàn)項(xiàng)目均采用放射免疫分析方法。1.4  統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 數(shù)據(jù)以x±s表示, 應(yīng)用SPSS11.5軟件,組內(nèi)數(shù)據(jù)比較用t檢驗(yàn)，組間數(shù)據(jù)比較用單因素方差分析。2  結(jié)  果2.1  各組大鼠造模后定位航行試驗(yàn)結(jié)果 造模后假手術(shù)組大鼠的逃避潛伏期為（2.26±

8、;0.55）s，明顯小于鹽水組（6.45±0.39）s、腦復(fù)康組（6.42±0.44）s、首烏益智膠囊組（6.55±0.48）s,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01), 鹽水組、首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組間大鼠的逃避潛伏期無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)，表明VD模型成功。2.2  各組大鼠用藥前后定位航行試驗(yàn)及空間探索試驗(yàn)測試結(jié)果 用藥后組內(nèi)比較，首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組治療后逃避潛伏期明顯小于治療前（P0.01）；首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組治療后在原平臺象限內(nèi)的游泳距離和時間及跨越原平臺位置的次數(shù)均較治療前明顯改善（P0.05， P0.01）；用藥后組間比較

9、，首烏益智膠囊組大鼠的逃避潛伏期明顯小于腦復(fù)康組和鹽水組（P0.01，P0.05），低于假手術(shù)組（P0.01）；首烏益智膠囊組大鼠在原平臺所在象限內(nèi)的循行路徑和停留時間及跨越原平臺位置的次數(shù)均好于腦復(fù)康組、鹽水組，低于假手術(shù)組（P0.01）(見表1)。表1  用藥前后定位航行成績及空間探索成績分析(略)2.3  各組VD模型大鼠用藥前后性激素水平變化VD模型雌鼠用藥后首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組治療后E2、P水平明顯高于治療前（P0.05）,VD模型雄鼠用藥后首烏益智膠囊組、腦復(fù)康組治療后E2水平明顯低于治療前（P0.05），T水平明顯高于治療前（P0.05）。首烏益智膠囊組雌

10、鼠E2、P水平明顯高于腦復(fù)康組、鹽水組（P0.05），首烏益智膠囊組雄鼠E2水平明顯低于腦復(fù)康組、鹽水組，而T水平明顯高于腦復(fù)康組、鹽水組（P0.05），見表2。表2  VAD模型大鼠用藥后性激素水平比較(略)3  討  論    研究表明，VD的病理機(jī)制主要有腦梗死、小血管疾病、白質(zhì)損傷、神經(jīng)元損傷幾方面；其分子機(jī)制主要有級聯(lián)反應(yīng)、興奮性毒性、炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡等4。VD 的發(fā)病機(jī)制目前還不完全清楚,隨著對VD研究的不斷深入，人們認(rèn)識到性激素與VD關(guān)系密切。近年來研究發(fā)現(xiàn)VD時血漿性激素水平發(fā)生變化，出現(xiàn)性激素水平失衡，認(rèn)知功能的減

11、退與性激素水平的下降成正相關(guān)，提示性激素水平與VD的發(fā)生發(fā)展存在著密切聯(lián)系。性激素對VD發(fā)揮作用主要通過擴(kuò)血管增加腦血流、促進(jìn)葡萄糖代謝、促進(jìn)乙酰膽堿合成和釋放、降血脂、改善血液流變學(xué)以及減少興奮性氨基酸毒性、抗氧自由基5,6等幾個方面發(fā)揮作用，改善癥狀。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果表明：首烏益智膠囊能升高VD模型雌鼠體內(nèi)E2、P水平，降低VD模型雄鼠體內(nèi)E2水平，升高T水平，從而調(diào)節(jié)VD模型大鼠體內(nèi)性激素水平的失衡。    VD 屬中醫(yī)“呆病”范疇,本病病位在腦，與肝、腎、心、脾等臟密切相關(guān)，我們以傳統(tǒng)中醫(yī)理論為指導(dǎo)，根據(jù)多年來的臨床經(jīng)驗(yàn)，提出腎精虧虛、淤血阻絡(luò)是VD的基本病

12、機(jī)，確立了補(bǔ)腎健腦、化淤通竅的基本治法，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，組方不斷加減，制成首烏益智膠囊。本方以何首烏為君藥，苦、甘、澀、溫、不寒不燥，專入肝腎，養(yǎng)陰益精，補(bǔ)腎健腦，養(yǎng)血益肝。黃芪氣味俱輕，具有升發(fā)之性，功專補(bǔ)氣升陽，為補(bǔ)氣藥之最，益智仁辛溫氣香，既能溫補(bǔ)腎陽，收斂固精，縮小便，又能溫胃逐寒，暖脾攝涎唾。二藥為輔藥鼓舞腎氣以生精，助陽以化陰。銀杏葉、水蛭、天麻共為佐藥，與主藥、輔藥共達(dá)益氣活血、化瘀通絡(luò)、推陳致新、填精益腦、開竅聰智之功。川芎為使藥，辛溫香竄，走而不守，為血中之氣藥，與黃芪相輔相成、益氣活血、安神醒腦，可帶諸藥到達(dá)病所。全方配伍共達(dá)補(bǔ)腎健腦、益精填髓、益氣活血、化瘀通竅之功跑。本實(shí)

13、驗(yàn)研究結(jié)果驗(yàn)證了首烏益智靈對VD有明顯的治療作用。    首烏益智靈能明顯改善VD大鼠的智能，其治療VD的機(jī)制之一可能是調(diào)節(jié)VAD模型大鼠體內(nèi)性激素水平。這為中詠藥防治腦VD提供了新思路、新方法，有重要的使用價值和理論意義?！緟⒖嘉墨I(xiàn)】  1 王維治，羅祖明.神經(jīng)病學(xué)M.北京：人民衛(wèi)生出版社，2002：253?5.2 Schmidt?Kastner R，Paschen W，Ophoff BG，et al.Q modified four?wessel occlusion model for inducing in complete forebrain ischemia in ratsJ.Stroke，1989；20：936?8.3 Pulsinelli WA，Brierley JB，Plum F.Temporal profile of neuronal damage i