耐藥相關(guān)蛋白在大腸癌的表達及臨床意義

1、耐藥相關(guān)蛋白在大腸癌的表達及臨床意義                作者：牟江洪，肖華亮，王東，李增鵬，向德兵，張沁宏摘 要 目的  探討耐藥相關(guān)蛋白在大腸癌的表達規(guī)律，并評價其指導(dǎo)臨床化療用藥的意義。 方法  采用免疫組化S-P法檢測73例大腸癌中5種耐藥相關(guān)蛋白（P-gp、MRP、ToPo、GST-和TS）的表達。 結(jié)果  P-gp、MRP、ToPo、GST-和TS陽性率分別為82.19%（60.73）、10.96%（8.

2、73）、45.21%（33.73）、72.60%（53.73）和26.03（19.73）;73例大腸癌中，多藥耐藥產(chǎn)生涉及至少2種耐藥相關(guān)蛋白者達69例（94.52%）;5種耐藥相關(guān)蛋白表達率在患者性別、年齡、腫瘤部位、大小、分化程度、浸潤深度、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間均沒有顯著差異（P0.05）。 結(jié)論  大腸癌細胞表達多種耐藥相關(guān)蛋白，其聯(lián)合作用可能是多藥耐藥產(chǎn)生的基礎(chǔ);耐藥相關(guān)蛋白在大腸癌的表達存在明顯異質(zhì)性，多種耐藥相關(guān)蛋白聯(lián)合檢測有助于臨床合理選擇化療方案。   關(guān)鍵詞 大腸癌;耐藥相關(guān)蛋白;多藥耐藥;化療   Abstract:Object

3、ive To investigate the expression characteristic of several drug-resistant related proteins in colorectal cancer，and evaluate its guiding role in selection of chemotherapy.Methods Five drug-resistant related proteins，including P-gp，MRP，GST-，ToPoand TS，were detected by immunohistochemical SP method i

4、n73specimens of colorectal cancer.Results The positive rate of P-gp，MRP，ToPo，GST-and TS were82.19%（60.73），10.96%（8.73），45.21%（33.73），72.60%（53.73）and26.03（19.73）respectively.There were69specimens of colorectal cancer in which multidrug resistance was mediated by at least two drug-resistant related p

5、roteins.No significant correlation was found be-tween expression rate of either drug-resistant related proteins and clinicopathological features.Conclusion Multiple drug-resistant related proteins were detected in the tissues of colorectal cancer，which suggested that multidrug resistance of colorect

6、al cancer could be a multifactorial process.Be-cause of heterogeneity of five drug-resistant related proteins expression in colorectal cancer，their combined measurement might be useful to guide se-lection of clinical chemotherapeutic schedule.   Keywords:colorectal cancer;drug-resistant re

7、lated protein;multi-drug resistance;chemotherapy   大腸癌是常見的惡性腫瘤之一，并且發(fā)病率呈逐年上升的趨勢。術(shù)后輔助化療是大腸癌的重要治療手段。然而大腸癌細胞容易產(chǎn)生對化療藥物的多藥耐藥（multi-drug resistance，MDR），是化療失敗并導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)和患者死亡的主要原因之一。目前認為多藥耐藥是一種多基因參與的復(fù)雜過程，已有多種耐藥相關(guān)蛋白被證明與其有關(guān)。本研究通過檢測大腸癌中P-糖蛋白（P-gp）、多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRP）、拓撲異構(gòu)酶（ToPo）、胎盤型-谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（GST-）和胸苷酸合成酶（TS）等

8、耐藥蛋白的表達，旨在初步了解大腸癌的耐藥機制，為臨床化療方案的選擇提供實驗依據(jù)。   1 材料與方法   1.1 標(biāo)本及試劑來源   收集本醫(yī)院2004年1月至2005年7月大腸癌根治術(shù)標(biāo)本73例。所有患者術(shù)前均未接受放療和化療。鼠抗人P-gp、ToPo、TS和MRP單克隆抗體及兔抗人GST-多克隆抗體購自北京中山生物技術(shù)公司（由美國Zymed公司生產(chǎn)），均為即用型工作液。   1.2 免疫組化   標(biāo)本經(jīng)10%中性福爾馬林液固定，常規(guī)石蠟包埋，4m連續(xù)切片，按試劑說明書行SP法免疫組化染色。以

9、中山公司推薦的腫瘤組織作為陽性對照，以PBS替代一抗作為陰性對照。瘤細胞陽性比例10%判定為陽性。   1.4 統(tǒng)計學(xué)分析   統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS10.0軟件進行。各臨床病理因素間5種耐藥相關(guān)蛋白陽性率比較采用2 檢驗。以P0.05表示差異具有顯著性統(tǒng)計學(xué)意義。   2 結(jié)果   2.1 臨床病理資料   73例大腸癌中，男性44例，女性29例，男女比例為1.521;年齡2677歲，平均年齡49歲，中位年齡46歲。腫瘤部位:左半結(jié)腸48例（包括降結(jié)腸、乙狀結(jié)腸、直腸、肛管）;右半結(jié)腸25例（

10、包括盲腸、升結(jié)腸、橫結(jié)腸）。腫瘤大小:直徑最小0.7cm，最大10.4cm，4cm者41例，4cm者32例。參照2002年“全國大腸癌病理研究統(tǒng)一規(guī)范”進行大腸癌分型和分級:高分化腺癌（高分化管狀腺癌和乳頭狀腺癌）38例，中等分化腺癌（中等分化管狀腺癌和粘液腺癌）29例，低分化腺癌（低分化管狀腺癌和印戒細胞癌）6例。腫瘤侵及漿膜及漿膜外者39例;伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者31例?；颊叩男g(shù)后治療、復(fù)發(fā)與否及預(yù)后等隨訪資料正在調(diào)查中。            2.2 5種耐藥相關(guān)蛋白的表達特點以及與臨床病理參數(shù)

11、的關(guān)系   5種耐藥相關(guān)蛋白均有不同程度的表達，P-gp、MRP、ToPo、GST-和TS陽性率分別為82.19%（60.73）、10.96%（8.73）、45.21%（33.73）、72.60%（53.73）和26.03（19.73）。在73例大腸癌中，P-gp（+）、MRP（+）、ToPo（-）、GST-（+）或TS（+）符合至少2項者達69例（94.52%），最多的符合4項有13例，而只符合1項者僅4例。MRP和TS均表達于腫瘤細胞胞漿;除了在腫瘤細胞胞漿表達外，GST-在正常組織及間質(zhì)細胞胞漿可見表達，P-gp也可表達于血管內(nèi)皮細胞胞漿;ToPo陽性產(chǎn)物主要定位于腫

12、瘤細胞胞核，有時可見胞漿弱陽性表達。5種耐藥相關(guān)蛋白在不同病例、同一腫瘤的不同區(qū)域呈現(xiàn)不同的陽性率及不同的陽性強度，表現(xiàn)出明顯的表達異質(zhì)性。經(jīng)2 檢驗，5種耐藥相關(guān)蛋白陽性率在患者性別、年齡、腫瘤部位、大小、分化程度、浸潤深度和有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間均沒有顯著差異（P0.05）。   3 討論   腫瘤的多藥耐藥（multi-drug resistance，MDR）是包括大腸癌在內(nèi)的多種惡性腫瘤化療失敗的主要原因之一，其是一個多基因參與的過程，涉及多種耐藥相關(guān)蛋白。不同腫瘤具有不同的耐藥表型，可以是某種耐藥基因表達，也可能是多種耐藥基因同時表達的結(jié)果。本文結(jié)果

13、顯示P-gp、MRP、ToPo、GST-和TS在大腸癌中均有不同程度的表達，其共同作用可能是造成大腸癌多藥耐藥的重要因素，其中以P-gp、ToPo和GST-的影響最為廣泛。P-gp是研究最為深入的一種耐藥相關(guān)蛋白。在正常組織中，P-gp主要定位于一些具有分泌排泄功能的細胞，故被認為起著對毒性化合物的清除作用 。在乳腺癌、肺癌、腦膠質(zhì)細胞瘤、神經(jīng)母細胞瘤等多種惡性腫瘤中P-gp均有高表達，并證實P-gp能與親脂性抗腫瘤藥物結(jié)合，在ATP參與下將藥物轉(zhuǎn)運到細胞外，從而產(chǎn)生P-gp介導(dǎo)的MDR（即經(jīng)典多藥耐藥性）?，F(xiàn)有的研究表明P-gp表達水平與耐藥程度呈正比。本研究73例大腸癌中P-gp表達者高達

14、60例（82.19%），提示P-gp表達是大腸癌MDR產(chǎn)生的重要因素 之一。GST是一種多功能藥物代謝酶，參與機體的解毒功能，并與MRP介導(dǎo)的耐藥機制有關(guān)。GST有20多種同工酶，其中以GST-與腫瘤耐藥的關(guān)系尤為密切 。本研究顯示大腸癌GST-表達率達72.60%，提示其在大腸癌耐藥中起著相當(dāng)普遍的作用。ToPo是DNA復(fù)制和轉(zhuǎn)錄過程中的一種關(guān)鍵性核酶，化療藥物通過該酶與DNA形成共價復(fù)合物，引起DNA的永久性損傷，致使腫瘤細胞凋亡，因此是化療藥物的重要作用靶點。ToPo含量降低、活性下降是ToPo介導(dǎo)的MDR的基礎(chǔ)，這與P-gp等引起的MDR有明顯區(qū)別，稱為非典型多藥耐藥性。本研究結(jié)果顯示

15、ToPo在大腸癌中的陽性率僅45.21%，提示其失表達可能與大腸癌的多藥耐藥有關(guān)。另外，MRP和TS在大腸癌中也有一定的表達，表明它們也參與MDR的形成。更有意義的是，在73例大腸癌中，多藥耐藥的產(chǎn)生涉及至少2種耐藥相關(guān)蛋白的有69例（94.52%），最多的涉及4種蛋白，而只涉及1種蛋白的僅4例，這些結(jié)果提示大腸癌中P-gp、MRP、ToPo、GST-和TS的廣泛表達是其對化療不敏感的重要原因，并且多因素聯(lián)合作用可能是大腸癌MDR的主要作用機制。而且，5種耐藥相關(guān)蛋白的表達規(guī)律與所有臨床病理參數(shù)間均沒有顯著性關(guān)系，不同病例存在明顯的表達異質(zhì)性，因此對每個大腸癌病例常規(guī)進行多種耐藥相關(guān)蛋白的聯(lián)合

16、檢測是非常必要的，有助于了解其耐藥基礎(chǔ)，指導(dǎo)臨床采用有效的個體化療方案。    參考文獻   1Biedler JL.Genetic aspects of multidrug resistanceJ.Cancer，1992，70（6Suppl）:1799-1809.   2 Gottesman MM，Pastan I.Biochemistry of multidrug resistance mediated by the multidrug transporterJ.Annu Rev Biochem，1993，62:385-427.3

17、李羲，郭先健，王東，等.P2糖蛋白在正常胎兒組織中的表達J.第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報，1995，17（6）:473.   4Anda T，Shabani HK，Tsunoda K，et al.Relationship between expression of O6-methylguanine-DNA methyltransferase，glutathione-S-transferase pi in glioblastoma and the survival of the patients treated with nimustine hydro-chloride:an immunohistochemical analysisJ.Neurol Res，2003，25（3）:241-248.   5Matsumoto Y，Tamiya T，Nagao S.Resistanc