轉(zhuǎn)鐵蛋白說明書

1、牛轉(zhuǎn)鐵蛋白（飽和鐵形態(tài)，凍干粉末，細(xì)胞培養(yǎng)級別）Transferrin, Bovine Holo Form, PowderIron Rich, Cell Culture Grade產(chǎn)品介紹：轉(zhuǎn)鐵蛋白是血漿中主要的鐵傳遞蛋白，為細(xì)胞內(nèi)化和細(xì)胞代謝提供所需的鐵。研究發(fā)現(xiàn)所有的細(xì)胞生長都離不開轉(zhuǎn)鐵蛋白。不但維持正常的細(xì)胞代謝依賴于以生物活性形態(tài)存在的鐵，鐵還是一些酶的輔助因子，比如RNA聚合酶，DNA合成酶。同時也是血紅蛋白的重要組成部分。轉(zhuǎn)鐵蛋白是血漿糖蛋白，從血漿中分離而來，牛轉(zhuǎn)鐵蛋白以兩種分子形態(tài)存在，分子量分別為74KD和78KD。每個轉(zhuǎn)鐵蛋白分子通過C端和N端結(jié)構(gòu)位點(diǎn)可以結(jié)合兩分子鐵離子，

2、所以轉(zhuǎn)鐵蛋白以三種形態(tài)存在：脫鐵（不結(jié)合鐵離子），飽和鐵（結(jié)合兩分子鐵離子）和部分飽和，在生理情況下，轉(zhuǎn)鐵蛋白分子僅有 1/3 被鐵飽和。使用說明：轉(zhuǎn)鐵蛋白對于絕大部分細(xì)胞系在無血清培養(yǎng)基中生長是必需的，研究表明飽和鐵形態(tài)的轉(zhuǎn)鐵蛋白對于促進(jìn)細(xì)胞生長是最有效的形態(tài)。對于雜交瘤，黏連細(xì)胞和懸浮細(xì)胞系，在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，應(yīng)保持培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)鐵蛋白濃度在0.5-100g/ml。針對不同的細(xì)胞系，需要選擇最合適的濃度。J.H.Brock在小鼠淋巴細(xì)胞的無血清培養(yǎng)試驗中【1】，以碳14標(biāo)記的胸苷利用度為指標(biāo)，比較了鼠源、人源和牛源Tf的效果。結(jié)果顯示，無論在刀豆蛋白A或者脂多糖的刺激條件下，三種來源的Tf均能

3、顯著增加小鼠淋巴細(xì)胞對胸苷的利用度，三種Tf之間的差異不顯著。Larisa Tsavaler等在人紅白血病體外細(xì)胞系K562的無血清培養(yǎng)試驗中【2】，比較了人源轉(zhuǎn)鐵蛋白和牛源轉(zhuǎn)鐵蛋白的效果，結(jié)果顯示兩者在300ug/ml的濃度條件下，均能良好支持細(xì)胞生長，無顯著差異。Robert C Penhallow等研究了Hela細(xì)胞無血清培養(yǎng)基中Tf的效果【3】，結(jié)果顯示牛源Tf與人類細(xì)胞表面的Tf受體親和力較弱，在無血清Hela細(xì)胞培養(yǎng)生長試驗中，牛源Tf與人源Tf一樣能夠支持細(xì)胞生長，但需要的濃度要較高。轉(zhuǎn)鐵蛋白凍干粉需要保存在冷藏狀態(tài)下，使用之前再溶解。一般用PBS或者其它合適的溶劑在室溫下將轉(zhuǎn)鐵

4、蛋白凍干粉溶解成儲液，濃度在0.5-2.0mg/ml,然后用無菌濾膜進(jìn)行過濾，濾液可在無菌條件下2-8保存30天。質(zhì)量控制：產(chǎn)品質(zhì)量從源頭開始控制，牛血漿從正規(guī)農(nóng)場定制，進(jìn)行正規(guī)的檢驗檢疫。經(jīng)過多步色譜純化得到的轉(zhuǎn)鐵蛋白，需進(jìn)行60，10h的病毒滅活，然后用0.1m濾膜過濾。產(chǎn)品最后要進(jìn)行包括純度，內(nèi)毒素，酸堿度，鐵含量，水分，微生物限度等檢查，以確保產(chǎn)品符合細(xì)胞培養(yǎng)要求。附圖1、轉(zhuǎn)鐵蛋白的掃描圖譜附圖2、轉(zhuǎn)鐵蛋白SDS-PAGE圖譜1為marker，2為轉(zhuǎn)鐵蛋白參考文獻(xiàn)1、J. H. Brock。The effect of iron and transferrin on the respon

5、se of serum-free cultures of mouse lymphocytes to Concanavalin A and lipopolysaccharide。Immunology 1981，43：387392。2、Larisa Tsavaler, Barry S. Stein, and Howard H. Sussman。Demonstration of the Specific Binding of Bovine Transferrin to the Human Transferrin Receptor in K562 Cells: Evidence for Interspecies Transferrin Internalization。J Cell Physiol 1986，128：l8。3、Robert C. Penhallow, Anne Brown-Mason, And Robert C. Woodworth。Comparative Studies of the Binding and Growth-Sup