不溶性微粒檢查法 中國(guó)藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范

1、不溶性微粒檢查法不溶性微粒檢查法（中國(guó)藥典2010年版二部附錄 C）系在可見異物檢查符合規(guī)定后，用以檢查靜脈注射劑（溶液型注射液、注射用無菌粉末、注射用濃溶液）及供靜脈注射用無菌原料藥中不溶性微粒的大小及數(shù)量。中國(guó)藥典規(guī)定了兩種檢查方法即光阻法和顯微計(jì)數(shù)法。當(dāng)光阻法測(cè)定結(jié)果不符合規(guī)定或供試品不適于用光阻法測(cè)定時(shí)，應(yīng)采用顯微計(jì)數(shù)法進(jìn)行測(cè)定，并以顯微計(jì)數(shù)法的測(cè)定結(jié)果作為判定依據(jù)。第一法 光阻法1 簡(jiǎn)述 光阻法是當(dāng)一定體積的供試液通過一窄小的檢測(cè)區(qū)時(shí)，與液體流向垂直的入射光，由于被供試液中的微粒阻擋而減弱，因此由傳感器輸出的信號(hào)降低，這種信號(hào)變化與微粒的截面積大小相關(guān)，再根據(jù)通過檢測(cè)區(qū)供試液的體積，

2、計(jì)算出每1ml供試液中含10µm以上（10µm）及含25µm以上（25µm）的不溶性微粒數(shù)。2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境、儀器與用具2.1 實(shí)驗(yàn)環(huán)境 實(shí)驗(yàn)操作環(huán)境應(yīng)不得引入外來微粒，測(cè)定前的操作在層流凈化臺(tái)中進(jìn)行。玻璃儀器和其他所需的用品均應(yīng)潔凈、無微粒。本法所用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑），使用前須經(jīng)不大于1.0m的微孔濾膜濾過。2.2 儀器裝置 光阻法不溶性微粒測(cè)定儀通常包括定量取樣器、傳感器和數(shù)據(jù)處理器三部分。測(cè)量粒徑范圍為2100m，檢測(cè)微粒濃度為010000個(gè)/ml。不溶性微粒測(cè)定儀器應(yīng)定期校正與檢定（至少每6個(gè)月校正一次），并符合規(guī)定。3 操作法（應(yīng)在符合

3、2.1項(xiàng)條件下進(jìn)行）3.1 供試品檢查前的準(zhǔn)備 取50ml微粒檢查用水（或其他溶劑），經(jīng)微孔濾膜（一般孔徑為0.45m）濾過，置于潔凈的適宜容器中，旋轉(zhuǎn)使可能存在的微粒均勻，靜置待氣泡消失。按光阻法項(xiàng)下的檢查法檢查，每10ml中含10m以上（10m）的不溶性微粒應(yīng)在10粒以下，含 25m以上（25m）的不溶性微粒應(yīng)在2粒以下。否則表明微粒檢查用水（或其他溶劑）、玻璃儀器或?qū)嶒?yàn)環(huán)境不適于進(jìn)行微粒檢查，應(yīng)重新進(jìn)行處理，檢測(cè)符合規(guī)定后方可進(jìn)行供試品檢查。 供試品應(yīng)事先除去外包裝，并用凈化水將容器外壁沖洗干凈，置適宜實(shí)驗(yàn)環(huán)境中備用。3.2 檢查法 標(biāo)示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用

4、濃溶液 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，立即小心開啟容器，先倒出部分供試品溶液沖洗開啟口及取樣杯，再將供試品溶液倒入取樣杯中，靜置2min或適當(dāng)時(shí)間脫氣，置于取樣器上（或?qū)⒐┰嚻分苯又糜谌悠魃希?。開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定至少3次，每次取樣應(yīng)不少于5ml，記錄數(shù)據(jù)；另取至少2個(gè)供試品，同法測(cè)定。每個(gè)供試品第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值計(jì)算。 標(biāo)示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，靜置2min或適當(dāng)時(shí)間脫氣，小心開啟容器，直接將供試品

5、容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測(cè)定并記錄數(shù)據(jù)；另取至少3個(gè)供試品，同法測(cè)定。第一個(gè)供試品的數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值計(jì)算。也可采用適宜的方法，在層流凈化臺(tái)上小心合并至少3個(gè)供試品的內(nèi)容物（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2min或適當(dāng)時(shí)間脫氣，置于取樣器上，開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定至少4次，每次取樣應(yīng)不少于5ml。第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值，根據(jù)取樣體積與每個(gè)容器的標(biāo)示裝量體積，計(jì)算每個(gè)容器所含的微粒數(shù)。和項(xiàng)下的注射用濃溶液如黏度太大，不便直接測(cè)定時(shí)，可經(jīng)適當(dāng)

6、稀釋，依法測(cè)定。 靜脈注射用無菌粉末 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），小心蓋上瓶蓋，緩緩振搖使內(nèi)容物溶解，靜置2 min或適當(dāng)時(shí)間脫氣，小心開啟容器，直接將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測(cè)定并記錄數(shù)據(jù)；另取至少3個(gè)供試品，同法測(cè)定。第一個(gè)供試品的數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值計(jì)算。也可采用適宜的方法，取至少3個(gè)供試品，在層流凈化臺(tái)上用水將容器外壁洗凈，小心開啟瓶蓋，分別精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內(nèi)容物溶解，小心

7、合并容器中的溶液（使總體積不少于25ml），置于取樣杯中，靜置2 min或適當(dāng)時(shí)間脫氣，置于取樣器上。開啟攪拌，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），依法測(cè)定至少4 次，每次取樣應(yīng)不少于5ml。第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值，計(jì)算每個(gè)容器所含的微粒數(shù)。 供注射用無菌原料藥 按品種項(xiàng)下規(guī)定，取供試品適量（相當(dāng)于單個(gè)制劑的最大規(guī)格量），置取樣杯或適宜的容器中，精密加入適量微粒檢查用水（或適宜的溶劑），緩緩振搖使內(nèi)容物溶解，靜置2 min或適當(dāng)時(shí)間脫氣，小心開啟容器，將供試品容器置于取樣器上，開啟攪拌或以手緩緩轉(zhuǎn)動(dòng)，使溶液混勻（避免氣泡產(chǎn)生），由儀器直接抽取適量溶液（以不吸入氣泡為限），測(cè)定并記錄數(shù)據(jù)

8、；另取至少3份供試品，同法測(cè)定。第一次數(shù)據(jù)不計(jì)，取后續(xù)測(cè)定結(jié)果的平均值，計(jì)算每份所含的微粒數(shù)。4 記錄與計(jì)算 記錄應(yīng)包括所用儀器型號(hào)、樣品包裝情況、檢測(cè)數(shù)量以及注射用無菌粉末和供注射用無菌原料藥的溶解情況等，根據(jù)微粒測(cè)定儀數(shù)據(jù)處理器打印出相應(yīng)的數(shù)據(jù)，計(jì)算出供試品每1ml（或每個(gè)容器或每份樣品）中所含10µm以上（10µm）及含25µm以上（25µm）的不溶性微粒數(shù)。5 注意事項(xiàng)5.1 光阻法不適于黏度過高和易析出結(jié)晶的制劑，如乳劑、膠體溶液、混懸液、脂肪乳、甘露醇注射液等，也不適用于進(jìn)入傳感器時(shí)容易產(chǎn)生氣泡的制劑（如碳酸鹽緩沖液制成的制劑）。對(duì)于一些溶解

9、性差得樣品，樣品在管道中與水相混時(shí)，可能會(huì)在局部析出沉淀，這不僅會(huì)使檢查結(jié)果偏高，也可能造成管路堵塞，出現(xiàn)該種情況時(shí)應(yīng)考慮采用顯微計(jì)數(shù)法。5.2 供試品的檢查數(shù)量 為確保檢查結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，除另有規(guī)定外，一般應(yīng)取供試品3瓶（支）以上進(jìn)行不溶性微粒檢查。在多支樣品的測(cè)定過程中，應(yīng)盡量保持操作一致性（如容器翻轉(zhuǎn)次數(shù)、取樣方式、除氣泡方式、攪拌速度等），以確保測(cè)定結(jié)果的可靠性。5.3 對(duì)于小容量注射液，可以采用直接取樣法測(cè)定，也可以采用多支內(nèi)容物合并法測(cè)定。直接取樣法可考察多支樣品檢查結(jié)果的重現(xiàn)性，體現(xiàn)各容器間的差異。當(dāng)選用直接取樣發(fā)測(cè)定時(shí)，為避免供試品溶液與儀器管路中的水在相溶過程中可能產(chǎn)生的

10、氣泡、乳光等導(dǎo)致測(cè)定數(shù)據(jù)偏高的現(xiàn)象，應(yīng)將前幾個(gè)容器的測(cè)定數(shù)據(jù)棄去，使供試品溶液充滿管路，然后讀取后續(xù)容器的測(cè)定數(shù)據(jù)作為供試品的測(cè)定結(jié)果，在小容量注射液直接取樣的檢測(cè)過程中，一定要避免吸入氣泡。一旦吸入氣泡，應(yīng)使用微粒檢測(cè)用水或其它適宜溶劑對(duì)管路進(jìn)行充分清洗，直至氣泡消失。當(dāng)采用合并法取樣時(shí)，其關(guān)鍵步驟在于安瓿的打開和內(nèi)容物的取出。玻璃安瓿是小容量注射劑的主要包裝形式，雖然通常都為易折安瓿，但在實(shí)際操作中很多安瓿并不“易折”，盡管用砂輪割鋸安瓿會(huì)大量增加微粒，但有時(shí)卻是開啟安瓿時(shí)的必要操作步驟。實(shí)際操作中如果在割鋸之后直接掰開，會(huì)大量引入微粒。經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，認(rèn)為在保證開啟安瓿的情況下應(yīng)盡量減少劃痕

11、的長(zhǎng)度和力度，掰開前增加用水清洗的操作過程。安瓿打開后，大量微粒集中于玻璃斷口處，經(jīng)實(shí)驗(yàn)比較，認(rèn)為用干凈注射器抽取轉(zhuǎn)移的方法可以減少瓶口碎屑的干擾。此外，采用較粗的針頭抽取溶液，可減少氣泡的產(chǎn)生。5.4 注射用無菌粉末一般先用微粒檢查用水或適宜溶劑溶解后，再采用直接取樣法或合并取樣法測(cè)定。在某些品種（如頭孢替唑鈉、頭孢曲松鈉等）的檢測(cè)中發(fā)現(xiàn)，同一批樣品采用不同體積的溶劑溶解后，微粒測(cè)定結(jié)果差異較大，這可能與藥物性質(zhì)等因素有關(guān)。經(jīng)試驗(yàn)研究，這些品種在某一個(gè)濃度范圍內(nèi)，不溶性微粒數(shù)與主藥濃度成線性關(guān)系；故這些品種一般在正文項(xiàng)下均規(guī)定了不溶性微粒測(cè)試溶液的濃度，應(yīng)依法操作。5.5 當(dāng)光阻法測(cè)定結(jié)果不

12、符合規(guī)定時(shí)，應(yīng)采用顯微計(jì)數(shù)法進(jìn)行復(fù)驗(yàn)，并以顯微計(jì)數(shù)法為判斷依據(jù)。6 結(jié)果與判定6.1 標(biāo)示裝量為100ml或100ml以上的靜脈用注射液 除另有規(guī)定外，每1ml 中含10µm以上（10µm）的微粒不得過25 粒，含25µm以上（25µm）的微粒不得過3 粒，判為符合規(guī)定。6.2 標(biāo)示裝量為100ml以下的靜脈用注射液、靜脈注射用無菌粉末、注射用濃溶液及供注射用無菌原料 除另有規(guī)定外，每個(gè)供試品容器（份）中含10µm以上（10µm）的微粒不得過6000粒，含25µm以上（25µm）的微粒不得過600粒，判為符合規(guī)定。

13、第二法 顯微計(jì)數(shù)法 1 簡(jiǎn)述顯微計(jì)數(shù)法是將一定體積的供試液濾過，使所含不溶性微粒截留在微孔濾膜上，在100倍顯微鏡下，用經(jīng)標(biāo)定的目鏡測(cè)微尺分別測(cè)定其最長(zhǎng)直徑在10m以上（10m）和25m以上（25m）的微粒，根據(jù)過濾面積上得微粒總數(shù)，計(jì)算出被檢供試液每1ml（或每個(gè)容器）中含不溶性微粒的數(shù)量。2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境、儀器和用具2.1 實(shí)驗(yàn)環(huán)境 實(shí)驗(yàn)操作所處環(huán)境應(yīng)不得引入外來微粒，可以在超凈室、層流凈化臺(tái)或符合要求的潔凈實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。玻璃儀器在和其他所需的用品都應(yīng)潔凈。本法所用微粒檢查用水（或其他適宜溶劑），使用前須經(jīng)不大于1.0m的微孔濾膜濾過。2.2 顯微鏡 雙筒大視野顯微鏡，目鏡內(nèi)附標(biāo)定的測(cè)微尺（每

14、格510m）。坐標(biāo)軸前后、左右移動(dòng)范圍均應(yīng)大于30mm，顯微鏡裝置內(nèi)附有光線投射角度、光強(qiáng)度均可調(diào)節(jié)的照明裝置。檢測(cè)時(shí)放大100倍。2.3 鏡臺(tái)測(cè)微尺（用于目鏡測(cè)微尺的標(biāo)定）。2.4 微孔濾膜 白色，孔徑0.45m、直徑25mm或13mm，一面印有間隔3mm的格柵；膜上如有10m以上（10m）的不溶性微粒，應(yīng)在5粒以下，并不得有25m以上（25m）的微粒，必要時(shí)，可用微粒檢查用水沖洗使符合要求。2.5 直徑25mm（或13mm）夾式定量濾器。2.6 平皿。2.7 平頭無齒鑷子。2.8 計(jì)數(shù)碼器。3 操作方法（應(yīng)在符合2.1項(xiàng)下條件進(jìn)行）3.1 供試品檢查前的準(zhǔn)備 取50ml微粒檢查用水（或其他

15、溶劑），經(jīng)微孔濾膜（一般孔徑為0.45m）濾過，置于潔凈的適宜容器中，旋轉(zhuǎn)使可能存在的微粒均勻，靜置待氣泡消失。按顯微計(jì)數(shù)法項(xiàng)下的檢查法檢查，每50ml中含10m以上（10m）的不溶性微粒應(yīng)在20粒以下，含 25m以上（25m）的不溶性微粒應(yīng)在5粒以下。否則表明微粒檢查用水（或其他溶劑）、玻璃儀器或?qū)嶒?yàn)環(huán)境不適于進(jìn)行微粒檢查，應(yīng)重新進(jìn)行處理，檢測(cè)符合規(guī)定后方可進(jìn)行供試品檢查。 用水沖洗平皿，再用凈化水反復(fù)沖洗，瀝干，置實(shí)驗(yàn)環(huán)境中備用。 在凈化臺(tái)上，將濾器用凈化水沖洗至潔凈，用平頭無齒鑷子夾取2.4項(xiàng)下符合要求的測(cè)定用微孔濾膜置濾器托架上，用濾器夾固定濾器，倒置，反復(fù)用凈化水沖洗濾器內(nèi)壁，瀝干后

16、安裝在抽濾瓶上備用。 待檢樣品應(yīng)事先除去外包裝，并用凈化水將容器外壁沖洗干凈，置適宜實(shí)驗(yàn)環(huán)境中備用。3.2 檢查法 標(biāo)示裝量為25ml或25ml以上的靜脈用注射液或注射用濃溶液 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，在層流凈化臺(tái)上小心翻轉(zhuǎn)20次，使溶液混合均勻，立即小心開啟容器，用適宜的方法抽取或量取供試品溶液25ml，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入經(jīng)預(yù)處理的濾器（濾膜直徑25mm）中。靜置1min，緩緩抽濾至濾膜近干，再用微粒檢查用水25ml，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入，洗滌并抽濾至濾膜近干，然后用平頭鑷子將濾膜移置平皿上（必要時(shí)，可涂抹極薄層的甘油使濾膜平整），微啟蓋子使濾膜適當(dāng)干燥后，將平皿閉合，置顯

17、微鏡載物臺(tái)上。調(diào)好入射光，放大100 倍進(jìn)行顯微測(cè)量，調(diào)節(jié)顯微鏡至濾膜格柵清晰，移動(dòng)坐標(biāo)軸，分別測(cè)定有效濾過面積上最長(zhǎng)粒徑大于10m和25m的微粒數(shù)。另取至少兩個(gè)供試品，同法測(cè)定，計(jì)算測(cè)定結(jié)果的平均值。 標(biāo)示裝量為25ml以下的靜脈用注射液或注射用濃溶液 除另有規(guī)定外，取供試品，用水將容器外壁洗凈，在層流凈化臺(tái)上小心翻轉(zhuǎn)20 次，使混合均勻，立即小心開啟容器，用適宜的方法直接抽取每個(gè)容器中的全部溶液，沿濾器內(nèi)壁緩緩注入經(jīng)預(yù)處理的濾器（濾膜直徑13mm）中，照上述同法測(cè)定。 靜脈注射用無菌粉末及供注射用無菌原料藥 除另有規(guī)定外，照光阻法中檢查法的或制備供試品溶液，同上述操作測(cè)定。4 記錄與計(jì)算4

18、.1 記錄 記錄應(yīng)包括所用儀器型號(hào)；供試品包裝情況，檢測(cè)數(shù)量；測(cè)定用濾膜處理前后微粒水平，微粒檢查用水來源或制備情況與所含微粒數(shù)。4.2 計(jì)算 用手撳計(jì)數(shù)碼器分別統(tǒng)計(jì)濾膜上直徑10µm以上（10µm）的微粒數(shù)，以及直徑25µm以上（25µm）的微粒數(shù)，計(jì)算，即得每1ml供試品溶液（或每個(gè)容器或每份供試品）中所含10µm以上（10µm）及含25µm以上（25µm）的不溶性微粒數(shù)。5 注意事項(xiàng)5.1 各種形狀的微粒應(yīng)以實(shí)測(cè)到的最長(zhǎng)粒徑計(jì)算，重疊微粒和聚合膠體微粒均以單個(gè)微粒計(jì)數(shù)；結(jié)晶析出不屬于檢測(cè)范圍，故不應(yīng)計(jì)算。5.2 必要時(shí)可另取微粒檢查用水（或其他溶劑）25ml照項(xiàng)下自“沿濾器內(nèi)壁緩緩注入，洗滌并抽濾至濾膜近干”起，依法操作，此項(xiàng)空白試驗(yàn)僅可視作對(duì)操作環(huán)境、實(shí)驗(yàn)用具的認(rèn)證，所得數(shù)據(jù)不必在供試品檢查結(jié)果中扣除，但對(duì)檢測(cè)結(jié)果的正確與否有密切關(guān)系。此項(xiàng)試驗(yàn)必須檢測(cè)全濾膜，達(dá)到的要求后方可進(jìn)行樣品檢測(cè)。5.3 本法不適用于乳液型和混合型注射劑，對(duì)于黏度過高者，光阻法和本法均無法測(cè)定時(shí)，可用適宜的溶劑經(jīng)適量稀釋后測(cè)定。5.4 供試