三聚氰胺試劑盒說明書1ppbVer1403

1、 三聚氰胺（MEL）ELISA檢測試劑盒說明書產(chǎn)品編號：HE09037/HE12003一、概要 三聚氰胺(melamine)是一種低毒、無味的純白色單斜棱晶體，形似蛋白粉，屬于三嗪類含氮雜環(huán)有機化合物，廣泛應(yīng)用于塑料、染料、化肥的生產(chǎn)和紡織行業(yè)。由于三聚氰胺分子含氮量很高，只要添加到食品中就可在檢測中造成蛋白質(zhì)含量較高的假象。目前在飼料、牛奶、奶粉、餅干、奶糖等相關(guān)產(chǎn)品均發(fā)現(xiàn)有三聚氰胺殘留現(xiàn)象。動物實驗結(jié)果表明，三聚氰胺的攝入可能會導(dǎo)致繁殖障礙、膀胱炎、慢性腎炎、腎結(jié)石、甚至膀胱癌。現(xiàn)有的檢測三聚氰胺方法如液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、質(zhì)譜電噴射離子技術(shù)其樣品前處理復(fù)雜、所需儀器昂貴、操作復(fù)雜、耗費時

2、間。而使用三聚氰胺ELISA試劑盒能夠既快速又準確的分析樣本中三聚氰胺殘留。 本試劑盒是應(yīng)用ELISA技術(shù)研發(fā)而成的檢測產(chǎn)品，與儀器分析技術(shù)相比具有快速、簡便、準確和靈敏度高等優(yōu)點，操作時間為45min，能最大限度地減少操作誤差和工作強度。二、實驗原理本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在酶標板微孔上預(yù)包被三聚氰胺抗原，樣本殘留的三聚氰胺和微孔上預(yù)包被的抗原競爭三聚氰胺抗體（抗試劑），同時加入酶標二抗（酶標物）反應(yīng)，再加入TMB底物顯色，樣本吸光值與其殘留物三聚氰胺成負相關(guān)，與標準曲線比較再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)，即可得出樣本中三聚氰胺的含量。三、適用范圍可定性、定量檢測奶粉、牛奶、酸奶等乳制品

3、、雞蛋及飼料樣本中三聚氰胺的殘留量。四、交叉反應(yīng)率三聚氰胺100五、使用單位需自備的設(shè)備及試劑設(shè)備：微孔板酶標儀450/630nm渦旋儀天平：感量0.01g聚苯乙烯離心管微量移液器：單道 10L100L、100L1000L、多道 30L300L試劑：-去離子水-乙腈（分析純）-氫氧化鈉（分析純）-三氯乙酸-濃鹽酸（分析純）六、提供的材料與試劑組份名稱96T裝量48T裝量酶標板96T48T標準品×6瓶*1 mL 0.5 mL 高濃度標準品(10 ppm)1 mL 0.5 mL 三聚氰胺酶標物6 mL3 mL三聚氰胺抗試劑6 mL3 mL底物液A液6 mL3 mL底物液B液6 mL3 m

4、L終止液6 mL3 mL濃縮洗滌液（10×）40 mL×2瓶40 mL三聚氰胺濃縮樣本稀釋液12mL6 mL試劑盒說明書1份1份檢測報告1份1份蓋板膜2個1個*注：標準品濃度為0 ppb, 1 ppb, 3 ppb, 9 ppb, 27 ppb, 81 ppb。七、溶液的配制配液1：樣本稀釋液I用去離子水將濃縮樣本稀釋液按1 : 15體積比進行稀釋，即1份濃縮樣本稀釋液加15份去離子水；用于酸奶、生鮮奶、成品純牛奶樣本的稀釋，樣本稀釋液I在4 環(huán)境可保存一個月。配液2：樣本稀釋液II用去離子水將濃縮樣本稀釋液按1 : 7體積比進行稀釋，即1份濃縮樣本稀釋液加7份去離子水；用

5、于乳飲料、雞蛋樣本、飼料樣本的稀釋，樣本稀釋液II在4 環(huán)境可保存一個月。配液3：飼料提取液 量取86L鹽酸，加入100mL去離子水中。配液4：雞蛋提取液稱取3g三氯乙酸，加蒸餾水溶解并定容至100 mL。配液5：洗滌液用去離子水將濃縮洗滌液（10×）按1 : 9體積比進行稀釋，即1份濃縮洗滌液（10×）加9份去離子水；用于酶標板的洗滌，以及奶粉樣本的稀釋，洗滌液在4 環(huán)境可保存一個月。配液6：1M NaOH溶液（現(xiàn)配現(xiàn)用）稱取4g NaOH，加入蒸餾水100 mL，攪拌溶解即可。8、 樣本前處理步驟 樣本處理前須知 處理任何樣本時，都必須注意：(a) 實驗中必須使用一次性

6、吸頭，在吸取不同的試劑時需更換 吸頭。(b) 實驗之前須檢查各種實驗器具是否潔凈，必須使用潔 凈實驗器具，以避免污染干擾實驗結(jié)果。(c) 未處理的生鮮奶樣本需冷凍環(huán)境保存,牛奶等樣本需要 冷藏環(huán)境保存。(d) 處理好的樣本應(yīng)立即用于檢測。（一）奶粉-稱取1.0g奶粉樣本，加4.5 mL洗滌液（配 液5），充分渦動1min，至樣本充分溶解；-取100L奶粉溶液，加入900L洗滌液（配 液5），渦動1min混勻；-取50L用于分析。稀釋倍數(shù)：50（二）生鮮奶、成品純牛奶：-移取1mL牛奶樣本，加入1mL 去離子水，渦動1min 混勻；-取40L樣本溶液，加入960L樣本稀釋液I（配液1）， 渦動1

7、min混勻；-取50L用于分析。稀釋倍數(shù)：50（三）液態(tài)酸奶-稱取1.0g酸奶樣本，加入1 mL去離子水，渦動1min混勻，4000r/min離心5min；-取200L上清，加入800L樣本稀釋液I（配液1）， 渦動1min混勻；-取50L用于分析。稀釋倍數(shù)：10（四）乳飲料-移取50L乳飲料樣本，加入950L 樣本稀釋液II(配液2)，渦動1min混勻；-取50L用于分析稀釋倍數(shù)：20（五）飼料-用均質(zhì)器均質(zhì)飼料樣本；-稱取1.0 g均質(zhì)的樣本于50 mL離心管中， 加5 mL 飼料提取液（配液3）,再加入5mL乙腈，充分振蕩5min，4000r/min離心5min。-取200L上清液加到8

8、00L的樣本稀釋液II（配液2），混勻后取50L用于分析。稀釋倍數(shù)：50（六）雞蛋-稱取2.0g均質(zhì)后的雞蛋樣本于50mL離心管中， 加4mL 雞蛋提取液（配液4），充分振蕩5min，4000r/min離心5min。-取150L上清液，再加入350L 樣本稀釋液II（配液2）混勻，用1M NaOH溶液（ 配液6） 調(diào)pH至 6.0-8.0（約510L） ，混勻取50L分析。稀釋倍數(shù)：10九、檢測步驟 1、將所需試劑從冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（2025 ）平衡30 min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。2、取出需要數(shù)量的微孔板，將不用的微孔放入自封袋，保存于28 。3、洗滌液在使用前也需回

9、溫。4、編號：將樣本和標準品對應(yīng)微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。5、加標準品/樣本：加標準品/樣本50L到對應(yīng)的微孔中，再加入酶標物50L /孔，再加入抗試劑50L /孔輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫25避光環(huán)境中反應(yīng)30 min。6、洗板：小心揭開蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用洗滌液300L /孔，充分洗滌5次，每次間隔10 s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用未使用過的槍頭戳破）。7、顯色：加入底物液A液50L /孔，再加底物液B液50L /孔，輕輕振蕩混勻，用蓋板膜蓋板后置室溫25避光環(huán)境反應(yīng)15min。8、測定：加入終止液50L /孔，輕

10、輕振蕩混勻，設(shè)定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630 nm檢測，請在5 min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)），測定每孔OD值。（若無酶標儀，則不加終止液用目測法可進行判定）。十、 結(jié)果判定結(jié)果判定有兩種方法，定性判定可用第1種方法，而定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含三聚氰胺成負相關(guān)。1、 定性分析 用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍（ppb）。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.569，樣本2的吸光度值為1.325，標準液吸光度值分別是：0 ppb為1.85；1 ppb為1.483；3 ppb為1.112；9 ppb為0. 746；27 ppb為0.367;81ppb為0.018。

11、則樣本1的濃度范圍是927 ppb；樣本2的濃度范圍是13 ppb。再乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即可得出樣本中三聚氰胺的濃度范圍。2、定量分析（1）百分吸光率的計算，標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個標準（0標準）的吸光度值，再乘以100%，即百分吸光率（%）B×100%B0B標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值B00（ppb）標準溶液的平均吸光度值（2）標準曲線的繪制與計算以標準品百分吸光率為縱坐標，以三聚氰胺標準品濃度（ppb）的對數(shù)為橫坐標，繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度，乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即

12、為樣本中三聚氰胺實際殘留量。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來電索?。┦?、試劑盒參數(shù)試劑盒靈敏度：1 ppb樣本最低檢測限：奶粉50ppb酸奶10ppb純牛奶、生鮮奶50ppb乳飲料20ppb飼料50ppb雞蛋10ppb回收率：奶粉100±20%酸奶100±20%純牛奶、生鮮奶100 ± 20%飼料100±20%雞蛋100±20%精密度：試劑盒的變異系數(shù)均小于10%十二、注意事項1、室溫低于20或試劑及樣本沒有回到室溫（2025）會導(dǎo)致所有標準的OD值偏低。2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會出

13、現(xiàn)標準曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進行下一步操作。3、每加一種試劑前需將其搖勻。4、反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。5、不要使用過了有效日期的試劑盒；也不要使用過了有效期的試劑盒中的任何試劑，摻雜使用過了有效期的試劑盒會引起靈敏度的降低；不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。6、儲存條件 保存試劑盒于28，不要冷凍，將不用的酶標板放進自封袋重新密封。標準物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。7、試劑變質(zhì)的跡象發(fā)色試劑有任何顏色表明發(fā)色劑變質(zhì)，應(yīng)當棄之。0標準的吸光度（450/630nm）值小于0.5（A450nm<0.5）時，表示試劑可能變質(zhì)。8、 在加入底物液A液和底物液B液后，一般顯色時間為15min即可。若顏色較淺，可延長反應(yīng)時間到20min，但不得超過20min。反之，則減短反應(yīng)時間。9、 濃縮洗滌液如有結(jié)晶屬正?，F(xiàn)象，請加熱溶解后使用。10、該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25，溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。十三、貯藏條件及保存期 貯藏條件：保存試劑盒于28。保存期：該產(chǎn)品有效期為12個月。14、 本公司其他檢測產(chǎn)品檢測類別檢測產(chǎn)品檢測類別檢測產(chǎn)品真菌毒素黃曲霉毒素總量4項抗生素氯霉素黃曲霉毒素總量6項甲砜霉素黃曲