實(shí)驗(yàn)開題報(bào)告模板

1、 本 科 生 畢 業(yè) 設(shè) 計(jì)（論 文）開題報(bào)告題 目：中藥菊花有效成分的提取及含量測(cè)定姓 名：冷 晶學(xué) 號(hào)：200504030106指導(dǎo)教師：李 楠班 級(jí)：藥 劑 051 班所在院系：生命科學(xué)與工程學(xué)院本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）開題報(bào)告考核一、導(dǎo)師對(duì)開題報(bào)告的評(píng)語(yǔ)： 指導(dǎo)教師 200 年 月 日成績(jī)二、開題報(bào)告答辯評(píng)語(yǔ)及成績(jī): 答辯小組負(fù)責(zé)人 200 年 月 日開 題 報(bào) 告一 課題名稱：中藥菊花有效成分的提取及含量測(cè)定二 選題目的及意義隨著中藥研究的不斷深入，中藥現(xiàn)代化得到不斷推進(jìn)，中藥所含物質(zhì)研究的現(xiàn)代化和中藥質(zhì)量控制的現(xiàn)代化成為當(dāng)前中藥現(xiàn)代化研究的兩個(gè)重要方面。中藥菊花為菊科植物菊Chrys

2、anthemum morifolium Ramat 的干燥頭狀花序, 以產(chǎn)于浙江的杭白菊最負(fù)盛名，享譽(yù)全國(guó)各地及東南亞地區(qū)，是國(guó)家衛(wèi)生部第一批批準(zhǔn)的藥食同源的道地藥材之一，具有散風(fēng)清熱、平肝明目的作用, 臨床應(yīng)用廣泛。其主要含揮發(fā)油、黃酮類有效成分，本課題旨在利用現(xiàn)代科學(xué)的理論方法和技術(shù)對(duì)杭白菊的兩類主要活性成分進(jìn)行含量測(cè)定，并對(duì)提取工藝進(jìn)行研究，同時(shí)考察不同種植基地、不同采摘時(shí)間、不同炮制工藝及不同等級(jí)的杭白菊中有效成分含量變化，從而有助于更好的對(duì)杭白菊的質(zhì)量進(jìn)行控制以及更合理的開發(fā)利用課題有無(wú)創(chuàng)新性？。三 研究背景介紹可精簡(jiǎn)，重點(diǎn)在國(guó)內(nèi)外對(duì)此相關(guān)研究的現(xiàn)狀（一）2005版藥典對(duì)菊花的介紹1

3、. 性狀菊花為菊科植物菊Chrysanthemum morifolium Ramat.的干燥頭狀花序。9-11月花盛開時(shí)分批采收，陰干或焙干，或熏、蒸后曬干。藥材按產(chǎn)地和加工方法不同，分為“毫菊”、“滁菊”、“貢菊”、“杭菊”。我們以杭菊為研究對(duì)象，提取其揮發(fā)油，并用氣相色譜法鑒定其主要成分。2005版中國(guó)藥典第一部上記載：亳菊，呈倒圓錐形或圓筒形，有時(shí)稍壓扁呈扇形，直徑1.5-3cm，離散?？偘鸂?；總苞片3-4層，卵形或橢圓形，草質(zhì)，黃綠色或褐綠色，外面被柔毛，邊緣膜質(zhì)。花托半球形，無(wú)托片或托毛。舌狀花數(shù)層，雌性，位于外圍，類白色，勁直，上舉，縱向折縮，散生金黃色腺點(diǎn)；管狀花多數(shù)，兩性，位

4、于中央，為舌狀花所隱藏，黃色，頂端5齒裂。瘦果不發(fā)育，無(wú)冠毛。體經(jīng)，質(zhì)柔潤(rùn)，平時(shí)松脆。氣清香，味甘、微苦。滁菊，呈不規(guī)則球形或扁球形，直徑1.5-2.5cm。舌狀花類白色，不規(guī)則扭曲，內(nèi)卷，邊緣皺縮，有時(shí)可見淡褐色腺點(diǎn)；管狀花大多隱藏。貢菊，呈扁球形或不規(guī)則球形，直徑1.5-2.5cm。舌狀花白色或類白色，斜升，上部反折，邊緣稍內(nèi)卷而皺縮，通常無(wú)腺點(diǎn)；管狀花少，外露。杭菊，呈碟形或扁球形，直徑2.5-4cm，常數(shù)個(gè)相連成片。舌狀花類白色或黃色，平展或微折疊，彼此粘連，通常無(wú)腺點(diǎn)；管狀花多數(shù),外露。2. 鑒別方法取本品1g，剪碎，加石油醚20ml，超聲處理10分鐘，棄去石油醚，藥渣揮干，加稀鹽酸

5、1ml與乙酸乙酯50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，作為供試品溶液。另取綠原酸對(duì)照品，加乙醇制成每1ml含0。5mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。照薄層色譜法（附錄 B）試驗(yàn)，吸取上述兩種溶液各0.5-1l，分別點(diǎn)于同一聚酰胺薄膜上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-冰醋酸-水（1:15:1:1:2）的上層溶液為展開劑，展開，取出。晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。3. 含量測(cè)定照高效液相色譜法（附錄 D）測(cè)定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.1mol/L磷酸二氫鈉緩沖液取磷酸二氧納（

6、NaH2PO4·2H2O）15.6g，加水至1000ml制成0.1mol L的溶液，加入磷酸適量，使pH值為2.7-甲醇（70:30）為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為328nm。理論板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于2500。對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品適量，置棕色量瓶中，加水制成每1ml含0.2mg的溶液，即得（10以下保存）。供試品溶液的制備 取本品粉末（過一號(hào)篩）約1g，精密稱定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，稱定重量，加熱回流2小時(shí)，冷卻，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液10ml，蒸干，殘?jiān)尤燃淄?m1，浸漬3分鐘，棄去三氯甲烷液，殘?jiān)鼡]去三氯甲烷、

7、加水適量使溶解，并轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得（應(yīng)于當(dāng)日測(cè)定）。測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10l，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。本品按干燥品計(jì)算，含綠原酸（C16H18O9）不得少于0.20。（二）菊花揮發(fā)油中的主要成分包括脂肪族、單萜、倍半萜及含氧衍生物。單萜、倍半萜的含氧衍生物多具有較強(qiáng)的生物活性和香氣,是醫(yī)藥、化妝品和食品工業(yè)的重要原料。劉偉等采用毛細(xì)管柱氣相色譜-質(zhì)譜技術(shù)對(duì)菊花的揮發(fā)油的化學(xué)成分進(jìn)行了初步研究,鑒定出二十余種萜烯類化學(xué)成分:-側(cè)柏烯、-菲蘭烯、-菲蘭、-松油烯、1,8-桉葉素、叔丁基苯、-萜品烯、蒲勒烯、優(yōu)葛縷酮、樟腦、龍腦、異龍腦、醋酸冰

8、片酯、芳樟醇、-石竹烯、-欖香烯、假紫羅酮、-松油醇、Dihgdrkhusilol等;并指出因產(chǎn)地及加工炮制方法的不同,揮發(fā)油的成分不同,導(dǎo)致其藥效不同。黃保民等利用毛細(xì)管氣相色譜-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用技術(shù)研究懷菊揮發(fā)油的化學(xué)成分,鑒定了45個(gè)化合物,主要成分是-菲蘭烯、對(duì)聚傘花烯、菊烯酮、1, 8-桉油精、冰片及檜烯等。周維書等采用氣相色譜-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用技術(shù)對(duì)香菊揮發(fā)油成分進(jìn)行了質(zhì)譜分析,測(cè)定了香菊揮發(fā)油含a-蒎烯(16.6% ) 、樟烯( 12.47% ) 、異纈草酸丁酯( 6.8% ) 、冰片(4.42% ) 、-桉醇(7.25% ) 、松油醇(4.12% )等為主的43個(gè)成分。其中異領(lǐng)

9、纈草酸丁酯、苦橙油醇、-桉醇在常用藥用菊花或野菊花中很少發(fā)現(xiàn),這三個(gè)揮發(fā)油成分占揮發(fā)油總重的15.88% ,能代表香菊的獨(dú)特香氣。（三）菊花揮發(fā)油的主要藥理作用1. 抑菌作用 現(xiàn)有研究認(rèn)為揮發(fā)油是菊花抗菌作用的物質(zhì)基礎(chǔ),其中的樟腦、龍腦則是其發(fā)揮抗菌作用的主要成分。李英霞等對(duì)不同產(chǎn)地的菊花揮發(fā)油的抑菌作用進(jìn)行了研究。結(jié)果發(fā)現(xiàn),不同產(chǎn)地的菊花對(duì)金黃色葡萄球菌、白葡菌、變形桿菌、乙型鏈球菌、肺炎鏈球菌均有一定的抑制作用,尤其對(duì)金黃色葡萄球菌的抑菌作用最明顯。2. 抗腫瘤作用菊花揮發(fā)油中含有較多的-欖香烯,而-欖香烯具有廣譜抗腫瘤等廣泛的藥理作用。國(guó)家一類新藥-欖香烯乳劑已用于癌癥病人的臨床治療。因

10、此菊花揮發(fā)油部位具有潛在的抗腫瘤作用。3. 其他作用丁香烯具有平喘作用,是治療老年性慢性支氣管炎的有效成分之一; 1,8-桉葉素和蒎烯均有較強(qiáng)的抗炎和祛痰作用。（四）氣相色譜法簡(jiǎn)介氣相色譜法(Gas Chromatography，GC)是一種重要的分離分析方法。這種技術(shù)廣泛應(yīng)用于石油化工醫(yī)藥衛(wèi)生等許多領(lǐng)域。在藥物的原料中間體成品制劑分析、中藥成分的分離分析、藥物代謝研究、毒物分析及環(huán)境檢測(cè)等方面，GC是必不可少的工具。它是采用氣體為流動(dòng)相（載氣）流經(jīng)裝有填充劑的色譜柱進(jìn)行分離測(cè)定的色譜方法。物質(zhì)或其衍生物氣化后，被載氣帶入色譜柱進(jìn)行分離，各組分先后進(jìn)入檢測(cè)器，用記錄儀、積分儀或數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)記錄

11、色譜信號(hào)。1.原理氣相色譜法的分離原理基于物質(zhì)在流動(dòng)氣體和固定相兩相分配的不同而導(dǎo)致分離。載氣經(jīng)減壓閥減壓后進(jìn)入凈化干燥器，通過汽化室進(jìn)入色譜柱。試樣由進(jìn)樣器進(jìn)入汽化室，則液體試樣立即汽化為氣體并被載氣帶入色譜柱。因色譜柱中的固定相對(duì)試樣中不同組分的吸附能力或溶解能力不同，從而使試樣中各種組分彼此分離而先后流出色譜柱，并進(jìn)人檢測(cè)器，檢測(cè)器得到不同組分的濃度(或質(zhì)量)變化轉(zhuǎn)變?yōu)殡娦盘?hào)，并經(jīng)放大器放大通過記錄儀即可得到色譜圖。由組分及其濃度即檢測(cè)器輸出的樣品信號(hào)(電壓或電流)隨時(shí)間變化的曲線成為色譜圖。如果分離完全則每個(gè)色譜峰代表一種組分，并且根據(jù)色譜峰的位置可進(jìn)行定性分析；根據(jù)色譜峰的面積或高度

12、可進(jìn)行定量分析；根據(jù)色譜峰的峰寬和峰間距可評(píng)價(jià)色譜柱的分離效能和考察操作條件是否恰當(dāng)?shù)纫蛩亍?.分類在GC中，流動(dòng)相是氣體，固定相是固體吸附劑(氣-固色譜法，gas-solid chromatography，GSC)或涂在惰性固體表面的液膜(氣-液色譜法，gas-liquid chromatography GLC)。其中以GLC應(yīng)用最為廣泛。3.特點(diǎn)氣相色譜具有高選擇性、高靈敏度和高分辨率。高選擇性指GC能分離結(jié)構(gòu)極為相似的異構(gòu)體(位置異構(gòu)、結(jié)構(gòu)異構(gòu)和空間異構(gòu))等，并可用于制備色譜純物質(zhì)。高靈敏度是指GC可測(cè)定ppm、ppt級(jí)的物質(zhì)。高分辨率是指GC的一般填充柱約為每米2000理論塔板數(shù)，而毛

13、細(xì)管柱可達(dá)每米1051O7理論塔板數(shù)。 4. 氣相色譜法測(cè)定揮發(fā)油的缺點(diǎn)所選用的指標(biāo)成分不能代表組成復(fù)雜的揮發(fā)油，實(shí)驗(yàn)的結(jié)果完全取決于所選用的指標(biāo)成分的穩(wěn)定性如何，因此從揮發(fā)油組成成分性質(zhì)差異大的角度考慮，至少需要2種或2種以上的化學(xué)成分，其中一種的極性較大(揮發(fā)性較小)，另一種極性較小(揮發(fā)性較大)，根據(jù)2個(gè)不同性質(zhì)的化學(xué)指標(biāo)的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果綜合評(píng)價(jià)揮發(fā)油整體的穩(wěn)定性情況。同理，在制劑工藝考察，成藥制劑質(zhì)量控制等方面，也應(yīng)該考慮選用2種或2種以上的極性差異較大的化學(xué)成分，使評(píng)價(jià)結(jié)果更客觀真實(shí)。三 實(shí)驗(yàn)方案初定（一）菊花中揮發(fā)油的提取1. 提取方法1) 2005版藥典中的提取方法 取一定碎度的

14、菊花100g，精密稱定（準(zhǔn)確至0.01g），置2000mL圓底燒瓶中，參照2005版中國(guó)藥典I部附錄XD，加水800mL與玻璃珠數(shù)粒，振搖混合后，連接揮發(fā)油測(cè)定器與回流冷凝管，自冷凝管上端加水使充滿揮發(fā)油測(cè)定器的刻度部分，并溢流入燒瓶時(shí)為止，置電熱套中加熱至沸，調(diào)溫并保持微沸5h，停止加熱，放置片刻，開啟測(cè)定器下端活塞將水緩緩放出，收集揮發(fā)油，無(wú)水硫酸鈉脫水，得到淡黃色揮發(fā)油，精密稱重，計(jì)算提取率。 2) 超聲波提取法 將100g菊花磨碎后置于燒杯中，加入7倍量的水，用超聲波振蕩處理，超聲頻率40Hz、超聲處理時(shí)間25min、冷卻至室溫，用45加熱提取完畢后，過濾收集揮發(fā)油并稱重，揮發(fā)油為藍(lán)色

15、，具有特殊香味，收率為0.32mL100g.3) 索氏提取法 取杭白菊20克，剪碎，置索氏提取器中，加乙醚300mL，55水浴加熱5h，回收乙醚，得到浸膏。浸膏用乙醇熱提取，放冷過濾，回收乙醇，出凈油量較少。 2. 菊花揮發(fā)油提取的單因素實(shí)驗(yàn) 前期預(yù)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，菊花揮發(fā)油得率與其粉碎度、加水量、浸泡時(shí)間、蒸餾時(shí)間有關(guān)系，因此首先通過單因素實(shí)驗(yàn)考察提取菊花揮發(fā)油的工藝條件。1) 粉碎度對(duì)菊花揮發(fā)油提取率的影響設(shè)菊花粉碎度為整棵、剪段、2040目、406o目、6080目、80 100目、100目以上，10倍加水量，2 h浸泡時(shí)間，5 h蒸餾時(shí)間下進(jìn)行水蒸氣蒸餾提取，稱量并計(jì)算提取率。根據(jù)擴(kuò)散定律

16、：藥材粉碎度愈細(xì)，浸出效果愈好，成分得率愈高。2) 加水量對(duì)菊花揮發(fā)油提取率的影響設(shè)加水量為8，10，12，14，16，18，20倍，粉碎度為粉碎的混合顆粒，浸泡2 h，蒸餾5 h下進(jìn)行水蒸氣蒸餾，稱重并計(jì)算提取率。3) 浸泡時(shí)間對(duì)菊花揮發(fā)油提取率的影響設(shè)浸泡時(shí)間為0，2，4，6，8，10，12 h，粉碎度為粉碎的混合顆粒，10倍加水量，蒸餾5 h下進(jìn)行水蒸氣蒸餾，稱重并計(jì)算提取率。4) 蒸餾時(shí)間對(duì)菊花揮發(fā)油提取率的影響設(shè)蒸餾時(shí)間為35，5，7，9，10，11，13，15 h，粉碎度為粉碎的混合顆粒，10倍加水量，2 h浸泡時(shí)間下進(jìn)行水蒸氣蒸餾，稱重并計(jì)算提取率。3. 提取工藝參數(shù)的優(yōu)化一正交

17、實(shí)驗(yàn)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)根據(jù)單因素結(jié)果，以揮發(fā)油提取率為評(píng)定指標(biāo)，選擇菊花粉碎度(A)、浸泡時(shí)間(B)、加水量(C)和蒸餾時(shí)間(D)為考察因素，每個(gè)因素3個(gè)水平，選用 L9(34)正交表，實(shí)驗(yàn)安排見表。水平ABCD粉碎度/目浸泡時(shí)間t/h加水量/倍蒸餾時(shí)間t/h1204021072408061210380100101413（二）菊花揮發(fā)油中樟腦、龍腦、一欖香烯等的氣相測(cè)定1. 色譜條件方案一: DB-1毛細(xì)管柱(30m×0.32mm×0.25µm);程序升溫從70以4/min升至100, 再以10/min升至150, 最后以30/min升至250;無(wú)分流進(jìn)樣時(shí)間1min;

18、分流比101;氫火焰離子化檢測(cè)器(FID); 進(jìn)樣口溫度為220;載氣為氮?dú)?體積流量:2.0 mL/min, 空氣的體積流量為500mL/min, 氫氣的體積流量為50mL/min;進(jìn)樣量: 1µL.方案二：Agilent HP-5毛細(xì)管色譜柱(30m×0.32mm×0.25µm)。程序升溫從70以2.5/min升至140，再以10/min升至260，氣化室溫度280，檢測(cè)器FID溫度300，分流比20：1，氮?dú)饬魉?mL/min，空氣350 mL/min，氫氣70 mL/min.2. 內(nèi)標(biāo)物 選用正辛醇為樟腦、龍腦內(nèi)標(biāo)，正十四烷作為-欖香烯的內(nèi)標(biāo)。3

19、. 內(nèi)標(biāo)溶液的制備 精密稱取正辛醇262mg、正十四烷2678 mg，用正己烷溶解并定容至10mL，作為內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液，該儲(chǔ)備液再以正己烷稀釋成0655 mg/mL 正辛醇和6695 mg/mL 正十四烷的內(nèi)標(biāo)溶液。4. 對(duì)照品儲(chǔ)備液的制備 分別精密稱取樟腦119 mg、龍腦133 mg、-欖香烯800 mg，以正己烷溶解并定容至一定體積，分別制成5950 mg/mL、1662 mg/mL及l(fā)6O0 mg/mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液，搖勻，備用。5. 供試品溶液的制備 按藥典法提取所得揮發(fā)油，用正己烷溶解并定容至2 mL，精密量取08mL置1 mL量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)溶液01 mL，用正己烷定容至刻度，搖

20、勻。6. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 從對(duì)照品儲(chǔ)備液中分別精密移取樟腦溶液120µL、龍腦溶液220µL、-欖香烯溶液1250µL，加入內(nèi)標(biāo)溶液200µL，以正己烷定容于2 mL量瓶中。再依次稀釋2，4，8，16倍，并添加內(nèi)標(biāo)保持內(nèi)標(biāo)濃度恒定。取1µL進(jìn)樣，以上述色譜條件測(cè)定。以對(duì)照品濃度(C)為縱坐標(biāo)，對(duì)照品峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)物峰面積之比(X)為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。7. 儀器精密度實(shí)驗(yàn) 取6.項(xiàng)下稀釋4倍的溶液測(cè)定，按上述色譜條件進(jìn)樣1µL測(cè)定峰面積，計(jì)算對(duì)照品峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)峰面積之比。8. 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一樣品5份，平行提取，測(cè)定。9. 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一份供試品溶液，于0，1，3，7，24 h分別進(jìn)樣，計(jì)算待測(cè)成分峰面積與相應(yīng)內(nèi)標(biāo)峰面積之比。10. 回收率實(shí)驗(yàn) 采用加樣回收率實(shí)驗(yàn)，精密稱取已測(cè)知含量的菊花樣品(杭白菊)9份，每3份一組，按高、中、低3個(gè)水平分別精密加入一定量對(duì)照