創(chuàng)新實踐論文最終版20121056田淑睿

1、創(chuàng)新實踐課程評分表綜述類項目分值得分積極參加教師科研活動具有較強動手能力20文獻資料查閱能力15結(jié)構(gòu)、邏輯性15文筆流暢25內(nèi)容全面性15符合寫作規(guī)范10總分100創(chuàng)新實踐論文論文題目：細胞熒光探針對腫瘤細胞的監(jiān)測姓名 ： 田淑睿 學號： 20121056 學院：化學化工學院 專 業(yè) ：藥學 指導教師：應(yīng) 明細胞熒光探針對腫瘤細胞的監(jiān)測作者：田淑睿（天津理工大學化學化工學院 2012藥學1班 學號：20121056）摘要：惡性腫瘤是目前嚴重危害人類健康的重大疾病之一，是造成死亡的重要原因，隨著生存環(huán)境的逐漸惡化，其發(fā)病率逐年上升。而腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和診斷對其預(yù)防和治療至關(guān)重要，研究表明，若在癌癥

2、早期能被及時發(fā)現(xiàn)并治療，竟會大大的提高惡性腫瘤的治愈率。因此，惡性腫瘤的治療已成為世界各國共同關(guān)心的問題。本文綜述了高敏熒光探針對腫瘤細胞的監(jiān)測，熒光探針在流式細胞術(shù)檢測腫瘤中的應(yīng)用，量子點-CK19抗體熒光探針檢測中的應(yīng)用。通過熒光探針的監(jiān)測可以監(jiān)測癌細胞的位置，并預(yù)測其發(fā)展趨勢。為合理的選擇和正確的臨床應(yīng)用以及科學研究提供參考。關(guān)鍵詞：高敏熒光探針，流式細胞術(shù),量子點-CK19抗體熒光探針,腫瘤細胞 Detection of Tumor cells by Fluorescent Probeshurui Tian(School of Chemical Engineering ,Tianjin

3、 University of Technology,Tianjin ,20121056 china)Abstract: Cancer is one of the major diseases that seriously endanger human health . Is the important cause of death . With the gradual deterioration of the living environment, the incidence of the disease is increasing year by year . And the early d

4、iagnosis and diagnosis of tumor is vital for its prevention and treatment , Studies have indicated that the cure rate of malignant tumor can be greatly improved if it is found and treated in early stage of cancer. So the treatment of cancer has become the common concern of the countries all over the

5、 world. The monitoring of tumor cells by sensitive fluorescent probe is reviewed in this paper,Application of fluorescence probe in tumor detection by flow cytometry (FCM), Application of quantum dot -CK19 antibody fluorescence probe for detection .The location of cancer cells can be monitored by fl

6、uorescence probe monitoring,And forecast its development trend, Provide reference for reasonable choice and correct clinical application and scientific research. Key words: sensitive fluorescent probe ,flow cytometry (FCM), quantum dot -CK19 antibody fluorescence probe, tumor cells 前言惡性腫瘤是目前嚴重危害人類健康

7、的重大疾病之一，是造成死亡的重要原因，隨著生存環(huán)境的逐漸惡化，其發(fā)病率逐年上升。而腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和診斷對其預(yù)防和治療至關(guān)重要，研究表明，若在癌癥早期能被及時發(fā)現(xiàn)并治療，竟會大大的提高惡性腫瘤的治愈率。因此，對于腫瘤的早期檢測和診治已成為各國科學家關(guān)注的熱點。為了實現(xiàn)腫瘤早期診治，目前研究大多集中于檢測活細胞內(nèi)一種腫瘤標志物，這可能會帶來“假陽性”結(jié)果。因為一些腫瘤標志物不但在癌細胞中表達，在正常細胞中也會表達，所以同時檢測活細胞中多種腫瘤標志物的表達有非常重要的意義。 腫瘤mRNA作為一種特異性的標志物，唄廣泛用來評估癌細胞的轉(zhuǎn)移或者評定癌細胞是否進入了血液循環(huán)之中，細胞內(nèi)的腫瘤mRNA表達水

8、平的變化與腫瘤的惡化程度或轉(zhuǎn)移進程密切相關(guān)，通過相互關(guān)聯(lián)細胞間腫瘤mRNA標志物的檢測，可以為臨床診斷癌癥提供新的工具。熒光成像的方法可以在細胞層面實現(xiàn)無損，高靈敏度的分析，因此具有廣泛的應(yīng)用前景，目前許多熒光探針已經(jīng)被設(shè)計和合成用于檢測和成像腫瘤細胞中的mRNA。 在搜索資料和百度查詢中了解到功能納米熒光探針可用于腫瘤細胞檢測，該課題組基于金納米粒子設(shè)計了一種多色納米熒光探針，實現(xiàn)了活細胞內(nèi)三種腫瘤標志物的同時檢測和成像。該探針成功用于區(qū)分乳腺癌細胞、肝癌細胞和正常的乳腺細胞、肝細胞，并能評估腫瘤標志物在細胞中的不同表達水平。相比較傳統(tǒng)的單一標志物檢測，該方法可以有效避免可能出現(xiàn)的“假陽性”

9、結(jié)果，從而提高癌癥早期診斷的可靠性。 有關(guān)研究組以聚苯乙烯納米微球為載體，基于適體特異性識別和DNA雜交原理，組裝了一種DNA-CdTe量子點納米線，制備了具有較高熒光強度的復合型熒光探針，并成功用于hela細胞（宮頸癌細胞）的熒光成像。該探針可以用于特異性識別腫瘤細胞，在熒光成像中信號強靈敏度高，為腫瘤細胞的檢測提供一種新方法.綜述了流式細胞術(shù)在腫瘤研究過程中熒光探針的開發(fā)狀況和選擇利用.結(jié)合使用不同的熒光探針,采用雙色、三色乃至多色標記,流式細胞儀可以通過細胞膜抗原分析、細胞周期和DNA倍體分析、細胞凋亡分析等手段鑒定、分型腫瘤細胞,監(jiān)控腫瘤的發(fā)生和治療過程.通過對不同熒光探針使用上的優(yōu)勢

10、和局限的比較,提出了新一代熒光探針開發(fā)方向的建議,以期改善流式細胞術(shù)在腫瘤細胞檢測中的精度和廣度上的局限。1.高敏熒光探針對腫瘤細胞的監(jiān)測熒光成像技術(shù)出現(xiàn)后，因其高靈敏度、高穩(wěn)定性、成本低廉等優(yōu)點得到了國內(nèi)外學者的廣泛關(guān)注，其核心技術(shù)熒光探針更是研究的重點，且已在光學、生物醫(yī)學等學科中有重要應(yīng)用。腫瘤的發(fā)生多由基因突變引起，相比于正常細胞，腫瘤細胞的生理特點和形態(tài)特征發(fā)生明顯變化，特別是在分子水平上，例如遺傳基因和蛋白質(zhì)組發(fā)生了變化。往往腫瘤細胞能夠合成一些正常細胞內(nèi)不存在或者含量很低的蛋白質(zhì)（腫瘤標志物），而這些特征反過來為科研工作者所利用，發(fā)展了諸如腫瘤標志物檢測、腫瘤適體檢測等新穎而高效

11、的腫瘤細胞識別檢測手段。這些新的方法技術(shù)中腫瘤細胞熒光成像探針的研究成為了近年來的研究熱點，腫瘤細胞的研究和癌癥的臨床診斷都離不開熒光成像技術(shù)，該技術(shù)的核心內(nèi)容就是需要賦予熒光成像探針特異識別的能力。近年來一種被稱為DNA適體的特異性識別分子成為了這方面研究的新寵兒，DNA適體3-6以其高特異性、高親和力、無毒、分子量小等優(yōu)點，自出現(xiàn)后發(fā)展迅速，已廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)研究、藥物開發(fā)和臨床診斷等領(lǐng)域，其發(fā)展勢頭大有蓋過抗原抗體檢測方法的趨勢，而實際上DNA適體法不但具備抗原抗體法的所有優(yōu)點，而且其分子可設(shè)計性、可組裝性、靈活多變的功能化特點都是抗原抗體法不可比擬的2。有關(guān)研究以聚苯乙烯納米微球為載體，

12、利用DNA自組裝技術(shù)和DNA適體特異性識別技術(shù)，組裝了一種超分子DNA CdTe量子點納米線，并成功制備了具有較高熒光強度的復合納米粒子熒光成像探針，該探針可以用于腫瘤細胞的特異性識別及熒光成像檢測，具有識別反應(yīng)迅速、高特異性和熒光信號強度高的特點。 當今，惡性腫瘤已經(jīng)嚴重威脅到人類的生命健康，早發(fā)現(xiàn)、早治療對腫瘤疾病的防治起重要作用。該工作中構(gòu)建了一種復合型的熒光探針，該探針具有較高的熒光特性，可以放大信號，便于對低濃度細胞的監(jiān)測，靈敏度很高。本次實驗中用到的識別單元可以很容易的被替換，從而進行其他的檢測。該熒光探針的選擇性很好，可以準確區(qū)分靶細胞和其他細胞，具有多種功能。此種熒光探針的成功

13、制備及其應(yīng)用，表明了它具有制備簡單、性質(zhì)優(yōu)良等優(yōu)點，為腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和治療提供了一條新思路，在醫(yī)學及其他領(lǐng)域具有一定的應(yīng)用價值。2. 熒光探針在流式細胞術(shù)檢測腫瘤中的應(yīng)用流式細胞術(shù)( FCM )是20世紀70年代發(fā)展起來的一種對細胞各種參量, 如大小、內(nèi)部結(jié)構(gòu)、DNA、RNA、蛋白質(zhì)及表面抗原等進行快速測量并分類收集的技術(shù)。隨著單克隆抗體技術(shù)的發(fā)展和熒光探針的開發(fā)。流式細胞術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域也從細胞生物學基礎(chǔ)研究擴大到腫瘤學、免疫學、血液學、藥物學、臨床檢測等各個方面。流式細胞術(shù)測量細胞的各種參量必須用熒光探針(即熒光染料)進行標記,所以熒光探針的開發(fā)和利用在很大程度上決定流式細胞術(shù)的應(yīng)用范圍1。2

14、.1膜抗原的分析與腫瘤研究有關(guān)的膜抗原分析有以下幾個方面: 造血系統(tǒng)腫瘤的分型、癌基因表達產(chǎn)物、多藥耐藥基因的表達產(chǎn)物、腫瘤相關(guān)抗原、激素受體、淋巴細胞亞群以及與癌細胞生物行為有關(guān)的因子等. 膜抗原的檢測需要特異性的單克隆抗體,這些抗體被標上各種熒光探針,帶有相應(yīng)抗原的細胞通過單抗與熒光探針相結(jié)合,從而在流式細胞儀上可以測出這些膜抗原的表達水平 。細胞外膜抗原的種類很多，僅CD抗原系列就有200多種.每種腫瘤細胞都會有特異性的抗原表達這些特異性抗原的檢測就成為判斷鑒定腫瘤細胞的證據(jù)，細胞用一種熒光染料標記的抗體染色'稱為單標記染色 但為了更準確地區(qū)分腫瘤細胞'需要同時檢測兩種或

15、兩種以上的抗原 這就要求使用多種不同發(fā)射波長的熒光染料分別標記不同抗體'但是由于流式細胞儀中激光發(fā)生器成本高'種類相當有限'而且多色分析要求激發(fā)波長種類盡量少以避免對發(fā)射波長的干擾'這就要求不同發(fā)射波長的熒光染料要有接近的激發(fā)波長。2.2細胞周期和DNA倍體分析細胞內(nèi)DN A體積分數(shù)是呈周期性變化的。 G2期和M期的DN A體積分數(shù)是G1期的2倍.采用特異的DN A熒光染料不僅可以在流式細胞儀上測得細胞周期中各時相細胞所占的百分比,而且還可測出腫瘤細胞的DN A體積分數(shù)的相對變化, 即DN A倍體分析. 流式細胞術(shù)對DN A染色一般采用化學染色方法, PI(碘化

16、丙啶)、EB (溴化乙啶)、HO 33342 ( Hoechst 33342)、DAPI( 4, 6-二脒基二苯基吲哚)、7-A AD( 7-氨基-放線菌素D)、AO (丫啶橙)、PY(派洛寧丫)等都是常用的核酸染料.分析所得到的DN A 直方圖上,正常組織表現(xiàn)為一較高的G1峰和一較低的G2峰。而惡性腫瘤具有染色體數(shù)目或結(jié)構(gòu)異常,導致DN A的異常變化,表現(xiàn)在直方圖上呈現(xiàn)異倍體峰。流式細胞儀腫瘤DNA異倍體分析在臨床上具有重大意義。2.3細胞凋亡分析細胞死亡有兩種方式: 細胞凋亡和細胞壞死.細胞凋亡是一種為維持機體自身穩(wěn)定的“積極主動”的死亡.它在腫瘤發(fā)生、發(fā)展及治療中的作用引起了人們的極大關(guān)

17、注,誘導腫瘤細胞凋亡是腫瘤學研究的一大熱點. 流式細胞術(shù)因為其簡捷、靈敏、直觀等特點成為細胞凋亡分析的重要工具。包括DNA單染色 DNA雙染色 DNA和蛋白質(zhì)染色 細胞凋亡早期事件檢測。流式細胞術(shù)作為腫瘤學研究方面的主要手段之一,已廣泛應(yīng)用于腫瘤臨床研究,為腫瘤的診斷、療效評價和預(yù)后預(yù)測提供了重要的信息. 熒光細胞化學技術(shù)的進展，以及熒光探針標記的單克隆抗體的開發(fā),為流式細胞術(shù)研究各種腫瘤性抗原、腫瘤性蛋白、致癌基因開辟了新途徑,極大地提高了腫瘤學的研究水平。但是現(xiàn)在應(yīng)用的熒光探針仍存在一些問題,例如由于藻膽分子的分子質(zhì)量很大,難以標記小分子及細胞內(nèi)抗原或受體,某些核酸染料易造成污染等.流式細

18、胞術(shù)應(yīng)用的開拓需要開發(fā)更特異和更敏感的新型熒光探針。首先,新的熒光探針應(yīng)該具有更簡單的交聯(lián)方式與配體結(jié)合;其次,新的熒光探針不僅僅用于標記單克隆抗體,而且可以同時標記核酸,將核酸與抗原的信息連貫起來；再有,發(fā)展能與不同種腫瘤細胞同時結(jié)合的熒光探針以提高檢測效率。3. 量子點CK19抗體熒光探針3.1量子點CK19抗體熒光探針對腫瘤細胞的監(jiān)測量子點是由人工合成的半導體納米顆粒，又被稱為“人造原子”，在光激發(fā)下能發(fā)出熒光。醫(yī)用熒光量子點通常由族或族元素組成，其晶粒大小為1-10。與傳統(tǒng)的有機熒光染料相比，量子點具有許多優(yōu)越性。如尺寸小，可直接進入細胞內(nèi)部而不對細胞造成損傷；熒光波長的尺寸依賴性和較

19、窄的熒光特征峰，可對不同細胞或單一細胞同時進行多色標記；熒光壽命長；抗光漂白能力強，光穩(wěn)定性好；良好的表面化學、生物可塑性；生物相容性好。基于上述特點，量子點熒光標記技術(shù)迅猛發(fā)展。 將CdTeS量子點與細胞角蛋白19抗體（cytokeration，CK19）結(jié)合制備成具有生物靶向性的量子點-CK19抗體免疫熒光探針，實現(xiàn)對乳腺癌細胞的熒光標記，為乳腺癌的早期診斷、腫瘤細胞的定位與成像和靶向治療提供新的方法和思路。近年來關(guān)于量子點的毒性問題還存在不同的爭議。本研究通過體外實驗，檢測量子點CK19抗體探針對乳腺癌細胞株MDA-MB-231增殖和凋亡的影響，從而進一步認識該自主合成探針的細胞毒性4。

20、31.1量子點和探針的光學性質(zhì) 利用水熱法制備的CdTeS 量子點9，其激發(fā)光譜寬而連續(xù)，發(fā)射光譜窄而對稱，在波長555nm附近有一窄而強的熒光發(fā)射帶。量子點-CK19抗體探針基本保持了CdTeS 量子點原有的光學性質(zhì)。與CdTeS 量子點相比，量子點-CK19抗體探針的熒光強度有一定的降低，發(fā)光峰紅移，位于560nm 附近。在紫外光（波長365nm）的激發(fā)下，該量子點探針發(fā)出黃色熒光。3.1.2探針標記MDA-MB-231 熒光顯微鏡示，在紫外光（波長365nm）激發(fā)下，標記上量子點-CK19抗體探針的腫瘤細胞膜及細胞質(zhì)發(fā)出黃色熒光，DAPI標記的細胞核發(fā)出藍色熒光；對照組加入未經(jīng)-CK19

21、抗體鏈接的量子點，經(jīng)過緩沖液的沖洗，去除了溶液中游離的和非特異性吸附在細胞膜上的量子點，因此不能觀察到量子點發(fā)出的熒光，只能觀察到DAPI標記的細胞核發(fā)出的藍色熒光。通過觀察熒光，可以對上皮源性腫瘤細胞進行定位。在激光共聚焦顯微鏡下，可以更加清楚地觀察到量子點發(fā)出的黃色熒光，熒光明亮而清晰，主要定位于細胞質(zhì)和細胞膜，與定位于細胞核的DAPI的藍色熒光形成鮮明的對比。通過雙色熒光，細胞和細胞核的形態(tài)清晰可辨，這是許多傳統(tǒng)的熒光染料所難以達到的。將觀察過的量子點與DAPI雙染的細胞爬片置于4冰箱保存，之后每隔24h在激光共聚焦顯微鏡下觀察1次，48hDAPI的藍色熒光已經(jīng)消失殆盡，而量子點的黃色熒

22、光直到第14天仍然十分清晰。3.2.量子點作為熒光探針在生物樣品檢測中的應(yīng)用量子點(quantum dots，QDs) 作為納米材料中的一種典型結(jié)構(gòu)，因其獨特的理化性質(zhì)而廣受關(guān)注。QDs 一般為球形或類球形，是由半導體材料( 通常由 B B 或 B B 元素組成) 制成的納米粒子，穩(wěn)定直徑為2 20 nm。由于QDs 的電子和空穴被量子限域，連續(xù)的能帶結(jié)構(gòu)變成具有分子特性的分立能級結(jié)構(gòu)，受激后可以發(fā)射熒光。QDs具有獨特的量子尺寸效應(yīng)和表面效應(yīng)，與傳統(tǒng)熒光染料相比，顯示出優(yōu)良的光譜特征和光化學穩(wěn)定性。QDs 熒光探針法與其他分析方法相比，更加便捷、成本低、靈敏度高、選擇性好。由于獨特的光學性質(zhì)

23、，QDs 已被應(yīng)用于生物識別及檢測中。本文主要探討了QDs 在生物檢測中的主要應(yīng)用，并對其前景作了展望，為QDs 在生物檢測領(lǐng)域的進一步開發(fā)和應(yīng)用提供參考。QDs 熒光探針的應(yīng)用于QDs 熒光探針在分子水平，細胞水平，組織水平的檢測，分子水平上包括蛋白質(zhì)的檢測，DNA的檢測和生物小分子的檢測。Hahn 等報道了用QDs 免疫探針檢測大腸桿菌O157:H7 型6。這是屬于QDs 熒光探針在細胞水平的檢測用于檢測微生物。QDs 熒光探針對早期腫瘤的診斷靈敏度較高。Hu 等用PEG 修飾的硒化鎘 QDs 實現(xiàn)了細胞表面腫瘤標記物癌胚抗原(carcinoembryonic antigen，CEA) 的

24、檢測7。這是屬于QDs 熒光探針在組織水平的檢測用于檢測腫瘤組織。 但是QDs 熒光探針具有細胞毒性。QDs 熒光探針技術(shù)最大的挑戰(zhàn)就是如何克服其細胞毒性。但對其毒性及其毒性消除的報道較少。Mahto 等研究了其表面修飾的毒性8，發(fā)現(xiàn)不同修飾的QDs 在細胞中的定位不同。QDs 是一種典型的納米材料，其粒徑比紅細胞( 6 9 um) 小得多。如果研制成QDs 納米機器人注入血管內(nèi)，其發(fā)光特性可清楚地展現(xiàn)體內(nèi)的狀況，可以清除動靜脈壁的脂肪沉積，防止動脈粥樣硬化的形成；可以疏通腦血管中血栓；清除結(jié)石，防止結(jié)石病的產(chǎn)生；防止尿酸鹽沉積，預(yù)防痛風；可以吞噬病毒，清除腫瘤細胞；還可根據(jù)其粒徑大小，作用于

25、特定的靶位，減少藥品的不良反應(yīng)。未來醫(yī)療有向小型化、便捷化發(fā)展的趨勢。QDs 作為一種半導體材料可以應(yīng)用于集成電路，制成的集成電路作為腦起搏器可以調(diào)節(jié)體內(nèi)多巴胺的平衡，治療帕金森病。此外，該集成電路可應(yīng)用于心臟起搏器，控制并改善心臟問題5。4.其它 此外有關(guān)的科研組做了人乳腺癌特異性基因1 mRNA實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)檢測試。建立人乳腺癌特異性基因1( BCSG1) mRNA 實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)( RT-PCR)檢測試劑盒，并評價其在乳腺癌循環(huán)腫瘤細胞檢測中的應(yīng)用價值。方法優(yōu)化試劑盒中各組分的濃度、確定試劑盒的穩(wěn)定性、靈敏度及特異性，并檢測外周血樣品中BCSG1 mR

26、NA的表達水平3。結(jié)果優(yōu)化了試劑盒中的引物、探針，成功制備了定值標準品，通過設(shè)立陰、陽性質(zhì)控品的方法，解決了試劑盒的特異性、靈敏性、準確性及質(zhì)量控制等關(guān)鍵技術(shù)問題，特異度及準確性均為95% 以上，靈敏度為100 拷貝/ml( 全血)。外周血標本中BCSG1mRNA 的檢測結(jié)果為，12 例臨床確診已轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者均為陽性，21例臨床未確診轉(zhuǎn)移的乳腺癌患者中12 例為陽性，其余9 例為陰性，15 例乳腺良性疾病患者、10 例正常人均為陰性。結(jié)論建立的BCSG1mRNA實時熒光定量 RT-PCR檢測試劑盒具有很高的臨床應(yīng)用價值，可用于檢測外周血樣品中BCSG1mRNA 的表達量，檢測結(jié)果可作為乳腺

27、癌患者診療過程中的重要監(jiān)測指標。目前，乳腺癌的治療方法有多種，如手術(shù)、放療、化療及生物治療等，但高復發(fā)和轉(zhuǎn)移率已成為阻腫瘤患者生存期提高的主要原因。血行播散是腫瘤轉(zhuǎn)移的主要途徑之一，由于自然或侵襲性醫(yī)源性因素，癌細胞可從原發(fā)灶脫落形成循環(huán)腫瘤細胞，但是由于受檢測方法靈敏度及特異性較低的限制，該微量的癌細胞未能被檢測到，這些癌細胞隨血液到達外周組織并處于休眠狀態(tài)，當患者機體免疫功能下降時，休眠的癌細胞就有可能被激活,從而導致了乳腺癌的復發(fā)和轉(zhuǎn)移10-11，循環(huán)腫瘤細胞的數(shù)量與乳腺癌的進展及患者生存期等密切相關(guān)12。若能及早發(fā)現(xiàn)并確定循環(huán)腫瘤細胞的存在，將對乳腺癌的診斷、預(yù)后和治療產(chǎn)生重要影響，可

28、以指導臨床治療方案的制定。檢測外周血中腫瘤細胞基因及特異性標志物表達是確定腫瘤轉(zhuǎn)移情況的一種有效方法，對腫瘤形成及轉(zhuǎn)移的診斷具有極大的幫助，但是在腫瘤轉(zhuǎn)移發(fā)生的早期，外周血中的腫瘤細胞一般很少，無法完全依賴病理形態(tài)檢查，未形成轉(zhuǎn)移灶或轉(zhuǎn)移灶未達到一定體積時，影像學診斷也無能為力。因此，循環(huán)血中的微量腫瘤細胞基因表達和一些特異性產(chǎn)物檢測的研究，引起了學者們的廣泛關(guān)注。循環(huán)腫瘤細胞中特異性基因mRNA 的定量測定，有利于腫瘤的早期診斷，治療方案的確定以及預(yù)后的判斷。隨著分子生物學技術(shù)的飛速發(fā)展及其在醫(yī)學研究中的廣泛應(yīng)用，通過RT-PCR 技術(shù)檢測外周血中微量腫瘤細胞已成為可能并被嘗試。實時熒光定量

29、PCR 技術(shù)是一種能夠準確定量mRNA的檢測方法，通過檢測腫瘤特異性基因mRNA的表達以判斷循環(huán)腫瘤細胞的存在13-14。5 結(jié)語與展望 腫瘤疾病是現(xiàn)在疾病的最大殺手，我們一聽到了癌癥，那可算是人人敬而遠之，誰也不愿給生命判了死刑，我們都不希望這種悲慘的事情發(fā)生在我們身上，為此，除了平時多注意自身的身體健康，從自身上防治，但是最重要的還是科學上的進步， 腫瘤的早期發(fā)現(xiàn)和診斷對其預(yù)防和治療至關(guān)重要，若在癌癥早期能被及時發(fā)現(xiàn)并治療，竟會大大的提高惡性腫瘤的治愈率。希望科研人士盡快的運用自己的知識，早日找到發(fā)現(xiàn)腫瘤治療腫瘤的最好方法，讓人們遠離癌癥。參考文獻1吳一峰，錢凱先.熒光探針在流式細胞術(shù)檢測

30、腫瘤中的應(yīng)用.浙江大學學報.2003，37（5）:617-622.2鐘華，張慧，許海平.高靈敏熒光探針用于腫瘤細胞的快速檢測.氨基酸和生物資源.2015,37(2):52-55.3程民，沈國棟，卞庚等.人乳腺癌特異性基因1mNA實時熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)檢測試劑盒的建立及應(yīng)用.中國臨床保健雜志.2014,17(1):63-67.4陳海燕，胡琴.量子點作為熒光探針在生物樣品檢測中的應(yīng)用及進展.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志.2015,46(2):207-221.5鄭少鸞,王本忠,朱立新等.量子點CK19抗體熒光探針對乳腺癌細胞免疫熒光標記及毒性研究. 中華腫瘤防治雜志.2014,21(2):81-85.

31、6Hahn MA, Tabb JS, Krauss TD. Detection of single bacterial pathogens with semiconductor quantum dots J. Anal Chem,2005, 77(15): 4861-4869.7Hu F, Ran Y, Zhou Z, et al. Preparation of biocon-jugates of CdTe nanocrystals for cancer marker detection J.Nanotechnol, 2006, 17(12): 2972-2977.8Mahto SK, Park C, Yoon TH, et al. Assessment