植物根系(脫氫酶)活力檢測試劑盒(TTC比色法)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上 植物根系(脫氫酶)活力檢測試劑盒(TTC比色法)簡介： 植物根系是活躍的吸收器官和合成器官，根的生長情況和代謝水平即根系活力直接影響植物地上部的生長和營養(yǎng)狀況以及最終產(chǎn)量，是植物生長的重要生理指標(biāo)之一。TTC(2，3，5-氯化三苯基四氮唑)是一種氧化還原物質(zhì)，是標(biāo)準(zhǔn)氧化電位為80mV的氧化還原色素，溶解于水為無色，可以檢測根系活力。Leagene 植物根系(脫氫酶)活力檢測試劑盒(TTC比色法)檢測原理是在弱酸性條件下，以TTC為底物，植物根系中脫氫酶能夠還原TTC生成紅色而不溶于水的三苯基甲腙(TTF)，生成的TTF比較穩(wěn)定(不會被空氣中的氧自動氧化)，于分光光度

2、計或酶標(biāo)儀485nm處檢測吸光度，計算TTC還原量，以該還原量表示脫氫酶活性，并作為植物根系活力的指標(biāo)。該試劑盒主要用于定量測定植物根系中根系活力或脫氫酶活性。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不宜用于臨床診斷或其他用途。組成： 編號 名稱TP102340TStorage試劑(A): TTC2×0.5g RT 避光試劑(B): TTC Assay buffer2×250ml RT 試劑(C): TTC終止液100ml RT 使用說明書1份操作步驟(僅供參考)：1、 配制TTC Assay buffer工作液：取0.5g TTC完全溶解于TTC Assay buffer中，即為TTC

3、Assay buffer工作液，即配即用，短期4避光保存。2、 制作TTC標(biāo)準(zhǔn)曲線：取0.25ml TTC Assay buffer工作液置于離心管或容量瓶，加入少許NaS2O4粉末(一般2mg左右，各管量一致)，混勻，產(chǎn)生紅色的TTF，用乙酸乙酯補加至10ml，混勻。按下表，分別取上述溶液0.25、0.5、1、2、3ml置于離心管或容量瓶中，用乙酸乙酯補加至10ml，即TTF含量為的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液，以乙酸乙酯為空白調(diào)零，以分光光度計或酶標(biāo)儀測定485nm處吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。 加入物(ml)12345TTC Assay buffer工作液0.250.5123乙酸乙酯9.759.5987相當(dāng)于

4、TTF含量(g/10ml)25501002003003、 準(zhǔn)備樣品：取植物須根系，洗凈，用濾紙吸干，完全浸沒于TTC Assay buffer工作液，37避光孵育，加入 TTC終止液?？瞻讓φ眨合燃尤?ml TTC終止液，加入干凈的植物須根系，完全浸沒于TTC Assay buffer工作液，37避光孵育，以次液作為空白對照。4、 加樣：把上述根系取出，濾紙吸干水分，放入研缽或勻漿器中，加入乙酸乙酯，充分研磨或勻漿，以提取出TTF。把紅色提取液轉(zhuǎn)移至離心管，并用少量乙酸乙酯把殘渣洗滌2-3次，再將洗滌液一并轉(zhuǎn)移至離心管，最后補加乙酸乙酯至。5、 根系檢測：以空白調(diào)零，比色杯光徑1.0cm，以分

5、光光度計或酶標(biāo)儀測定485nm處TTF吸光度。計算： 以系列標(biāo)準(zhǔn)溶液TTF濃度(25g、50g、100g、200g、300g10ml)為橫坐標(biāo)，以對應(yīng)的吸光度為縱坐標(biāo)，繪制TTF標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)TTF與吸光度計算回歸方程，根據(jù)回歸方程計算出待測樣品的四氮唑還原量，即為根系活力或脫氫酶活性。 根系(脫氫酶)活力(mg/g·h)=C×V/(1000×W×t) 式中：C=根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線查得的樣品提取液的濃度(g/ml) V=樣品提取液總體積(ml) W=植物須根系的重量(g) t=孵育時間(h)=1(h)注意事項：1、 配制好的TTC Assay buffer工作液應(yīng)避光保存，如果見光會變紅，影響實驗結(jié)果。2、 提高溫度可以增加反應(yīng)速度，但會降低重氮鹽的穩(wěn)定性，所以反應(yīng)需在相同條件下進行。3、 如果沒有分光光度計，也可以使用普通的酶標(biāo)儀測定，但應(yīng)注意酶標(biāo)板每孔最大檢測體積。編號名稱CC0007磷酸緩沖鹽溶液(10×PBS,無鈣鎂)CM0004LB培養(yǎng)基DC0032Masson三色染色液DF0135