中藥黃芪對糖尿病大鼠CYP4502E1活性的影響

1、中藥黃黃對糖尿病大鼠CYP4502E1活性的影響單位：【摘要】目的用探針藥物研究黃黃對大鼠CYP450活性的影響.方法采用四氧喀咤誘發(fā)糖尿病大鼠,正常大鼠為對照組,給予黃黃水提物誘導,通過HPLC檢測探針藥物的代謝率來評價各組CYP4502E1活性.結(jié)果給藥組動物血液中的氯嚶沙宗的含量與模型組和空白組的含量無顯著區(qū)別P0.05o結(jié)論黃黃對大鼠CYP2E1活性無明顯影響.【關鍵詞】CYP450氯嚏沙宗探針藥黃黃Abstract:ObjectiveToevaluatetheeffectofHuangqionCYP2E1activityofdiabeticratswithprobedrug.Meth

2、odsDiabeticratmodelwasinducedbyalloxan.TheratsweregiventheaqueousextractsofHuangqiorallyforsixdays.TheactivityofCYP2E1wasevaluatedbymeasuringchlorzoxazone,adrugprobeforCYP2E1,anditsmetabolitesweredetectedbyDOC格式論文,方便您的復制修改刪減HPLC.ResultsHuangqihadnoeffectonplasmaconcentrationofcholrzoxazone,therewasn

3、osignificantdiffereneewhencomparedwithcontrolgroupanddiabetic-modelgroup(P>0.05).ConclusionHuangqihasnoeffectonCYP2E1activity.Keywords:CYP450;Chlorzoxazone;Probedrug;Huangqi黃黃作為一種常用中藥,不管是組方配伍湯劑,還是提取物的注射劑,均已經(jīng)在臨床上廣泛應用于糖尿病(中醫(yī)“消渴)的治療1,但黃黃對CYP450酶系的影響尚屬空白,因此本實驗研究了黃黃對細胞色素P450的影響.細胞色素P450(cytochromeP450

4、,CYP)酶系一般簡稱藥酶,在外源性物質(zhì)和內(nèi)源性物質(zhì)的代謝中起著極其重要的作用2o本實驗用探針藥物法,通過體內(nèi)實驗來評價黃黃對CYP2E1活性的影響,CYP2E1底物為氯嚏沙宗(chlorzoxazone):3,41.1器材與方法1.1 藥物黃黃(購自河南省藥材公司,經(jīng)河南中醫(yī)學院中藥鑒定學科鑒定為正品),粉碎并準確稱量,經(jīng)水煎濃縮,使其濃度相當于1g/ml的原藥萃取液.冷藏備用.1.2 試劑四氧喀口定、氯嗖沙宗為Sigma公司試劑,氯仿、甲酸和2-丙醇為分析純試劑,乙睛為色譜純試劑.1.3 儀器高效液相色譜(美國Waters公司)；Millennium2021色譜工作站.1.4 動物SD大鼠

5、,雄性230±20g,二級,購自鄭州大學醫(yī)學院實驗動物中央1.5 方法1.5.1 模型制作大鼠隨機分為兩組,實驗組在空腹12h后按200mg/kg體重腹腔注射2%四氧喀咤,正常對照組大鼠腹腔注射相同體積的生理鹽水.造模期間檢測體重、血糖強生血糖儀.于第7天,禁食12h,眼內(nèi)眥靜脈叢取血測血糖.空腹血糖升高,體重下降,說明已制備2型糖尿病模型.因四氧喀咤對肝臟可能有潛在損傷,故監(jiān)測谷丙轉(zhuǎn)氨酶GPT.將已制備成2型糖尿病模型的大鼠且GPT無明顯改變者隨機分為模型組、給藥組,每組5只.152給藥方法給藥組每天清晨空腹灌胃給予黃黃提取液1次,0.3ml/100g,空白對照組、模型組給予相同體

6、積的生理鹽水,誘導時間為6d.黃黃誘導后的第6天在乙醴麻醉下,于大鼠的右側(cè)頸靜脈處做插管手術(shù),次日給予探針藥物氯嗖沙宗.氯口坐沙宗按20mg/kg的劑量參加少量聚山梨酯-80研磨,再參加生理鹽水制成乳濁液靜脈注入,并于給藥后的0.17,0.5,0.83,1.17,1.5h由插管處取出約025ml血液,立即以4000r/min離心5min,準確取出100山血清,參加內(nèi)標,混勻,再參加650山氯仿,混懸振蕩2min,離心5000r/min,5min,取有機相氯仿500山,氮氣下干燥,參加流動相100“溶解,取80山進樣.1.6 數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析AUC0s8h用梯形法計算,Cmax和tmax可以從

7、藥-時曲線直接讀出.Ke和t1/2運用藥代動力學專用軟件PAS2.0計算.給藥前后藥代動力學參數(shù)的差異用SPSS10.0統(tǒng)計,顯著性檢驗采用配對t檢驗.2結(jié)果從表1中可以看出在造模第5天,大鼠的體重平均值下降,血糖均值上升,造模前后體重和血糖的t檢驗說明,P0.01,均有極顯著差異,說明用四氧喀咤成功地誘導了大鼠糖尿病的形成.表1體重、血糖和GPT略大鼠腹腔注射四氧喀咤后2d開始出現(xiàn)多飲'多尿及體重不增等典型糖尿病病癥,于給藥后1周,糖尿病組大鼠血糖較對照組血糖明顯增加PV0.001o因四氧喀噬對肝臟可能有潛在損傷,故監(jiān)測GPTo結(jié)果說明,給藥前后GPT無顯著差異.對氯嗖沙宗的對照品進

8、樣量和峰面積數(shù)據(jù)進行線性回歸,可以得到氯口坐沙宗的回歸方程為Y=285.9865+7.684e+0.05X圖1,兩者的相關系數(shù)均為1,呈線性相關,說明可以從方程推算樣品氯嚶沙宗的含量.運用藥動學PAS1.0軟件對氯嗖沙宗藥動學數(shù)據(jù)進行處理,分別按單室、雙室、二室模型以最小二乘法擬和后,氯口坐沙宗同單室模型相吻合,權(quán)重為1/CC.01.5h的藥動學參數(shù)表2以及藥時曲線圖2可以看出：給藥組動物血液中的氯口坐沙宗的含量與模型組和空白組的含量無顯著區(qū)別P0.05.表2各組血漿中2種探針藥物的藥動學參數(shù)略3討論藥物在機體內(nèi)的生物轉(zhuǎn)化主要由肝細胞內(nèi)滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的肝藥酶催化,其中的細胞色素P450CYP45

9、0同工酶是催化藥物進行氧化、復原、水解等代謝作用的重要的酶系.CYP450不僅在藥物的代謝、降解和排泄中起著重要作用,所以研究中藥與CYP450酶系的關系意義重大.不但可以推知中藥的體內(nèi)代謝過程,而且可以為臨床中西藥物的合理搭配使用提供直接依據(jù).本實驗采用四氧喀咤誘導糖尿病大鼠模型,應用氯嗖沙宗作為CYP2E1的探針藥物來觀察比擬中藥黃黃對肝藥酶活性是否有影響.同時,由于四氧喀咤對肝臟有潛在損傷,所以測定GPT可以監(jiān)測有無肝損傷.從實驗結(jié)果來看,01.5h的藥動學參數(shù)表2以及藥時曲線圖2可以看出：給藥組動物血液中的氯嗖沙宗的含量與模型組和空白組的含量無顯著區(qū)別P0.05o這說明黃黃很可能對CYP2E1沒有作用,提示當黃黃和CYP2E1酶底物的藥物合用時,很可能不會發(fā)生藥物的相互作用.綜上所述,研究中藥對CYP450酶系的影響,可以為臨床中西藥物的合理配伍應用,中藥與中藥間的相互作用提供指導具體原貝人同時還可以為中藥的藥物代謝動力學提供研究思路和科學的研究數(shù)據(jù).【參考文獻】：1侯士良沖藥八百種詳解M,鄭州：河南科學技術(shù)出版社,1999:830.2侯艷寧,程桂芳,朱秀媛.黃苓式對小鼠肝細胞色