分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備簡(jiǎn)介(精)

1、實(shí)驗(yàn)一 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備簡(jiǎn)介實(shí)驗(yàn)室主要儀器，設(shè)備的簡(jiǎn)介及使用方法微量移液器微量移液器是連續(xù)可調(diào)的、計(jì)量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計(jì)。微量移液器有多種規(guī)格，在移液器量程范圍內(nèi)能連續(xù)調(diào)節(jié)讀數(shù)。移液器常見的四種規(guī)格分別是：0.510 “（讀數(shù)窗顯示 0.510.0，每轉(zhuǎn)1檔為0.1Wl）;10100 “（讀數(shù)窗顯示10.0100,每轉(zhuǎn)1檔為1 “）；20200 “（讀數(shù)窗顯示 20200,每轉(zhuǎn)1檔1 “）；1001000“（讀數(shù)窗顯示1001000,每轉(zhuǎn)1檔為5“）.量液的操作步驟：1 將微量移液器裝上吸頭（不同規(guī)格的移液器用不同的吸頭）2 將微量移液器按鈕輕輕壓至第一停點(diǎn)

2、；3 垂直握持微量移液器，使吸嘴浸入液樣面下幾毫米，千萬不要將吸嘴直接插到液體底部；4 緩慢、平穩(wěn)地松開控制按鈕，吸上樣液。否則液體進(jìn)入吸嘴太快，導(dǎo)致液體倒吸入移液器內(nèi)部，或吸入體積減少；5 等一秒鐘后將吸嘴提離液面6 平穩(wěn)地把按鈕壓到第一停點(diǎn)，再把按鈕壓至第二停點(diǎn)以排出剩余液體；7 提起微量移液器，然后按吸嘴彈射器除去吸嘴。量液操作注意問題：1 未裝吸嘴的微量移液器絕對(duì)不可用來吸取任何液體。2 一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量，千萬不要將讀數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍，否則會(huì)造成損壞。3 不要橫放帶有殘余液體吸嘴的移液器。4 不要用大量程的移液器移取小體積樣品。5 移液器使用完后，將刻度調(diào)到最

3、大刻度，收藏。低溫臺(tái)式高速離心機(jī)離心機(jī)的分類低速：每分鐘幾千轉(zhuǎn)高速：每分鐘1 3 萬轉(zhuǎn)超速：每分鐘3 萬轉(zhuǎn)以上離心機(jī)的功能：分離，純化低速：細(xì)胞等大分子高速：DNA ,蛋白等超速 : 病毒，蛋白等，根據(jù)用途又可分為分析超速離心機(jī)和制備超速離心機(jī)。低溫分離技術(shù)是分子生物學(xué)研究中必不可少的手段基因片段的分離、酶蛋白的沉淀和回收以及其它生物樣品的分離制備實(shí)驗(yàn)中都離不開低溫離心技術(shù)本實(shí)驗(yàn)室所用離心機(jī)為臺(tái)式高速離心機(jī)（舊M ）,配有角式轉(zhuǎn)頭：24 X 1.5ml ;極限轉(zhuǎn)速20000rpm臺(tái)式高速離心機(jī)使用步驟1、把離心機(jī)放置于平面桌或平面臺(tái)上，目測(cè)使之平衡，用手輕搖一下離心機(jī)，檢查離心機(jī)是否放置平衡。

4、2、打開門蓋，將離心管放入轉(zhuǎn)子內(nèi)，離心管必須成偶數(shù)對(duì)稱放入，且要事先平衡，完畢用 手輕輕旋轉(zhuǎn)一下轉(zhuǎn)子體，使離心管架運(yùn)轉(zhuǎn)靈活。3、關(guān)上門蓋，注意一定要使門蓋鎖緊，完畢用手檢查門蓋是否關(guān)緊。4、插上電源插座，按下電源開關(guān)（電源開關(guān)在離心機(jī)背面，電源座上方）。5、設(shè)置轉(zhuǎn)子號(hào)、轉(zhuǎn)速、時(shí)間： 在停止?fàn)顟B(tài)下時(shí)，用戶可以設(shè)置轉(zhuǎn)子號(hào)、轉(zhuǎn)速、 時(shí)間， 此時(shí)離心機(jī)處于設(shè)置狀態(tài)，停止燈亮、運(yùn)行燈閃爍；按下啟動(dòng)離心開始（常用，最高轉(zhuǎn)速為13000r/min ，時(shí)間最長(zhǎng)為20 分鐘） ；注意：對(duì)應(yīng)的轉(zhuǎn)子一定要設(shè)置在相應(yīng)的轉(zhuǎn)速范圍內(nèi)，不可超速使用，否則對(duì)試管或轉(zhuǎn)子有損壞。6、離心機(jī)時(shí)間倒計(jì)時(shí)到“0”時(shí)，離心機(jī)將自動(dòng)停止，

5、當(dāng)轉(zhuǎn)子停轉(zhuǎn)后，打開門蓋取出離心管，關(guān)斷電源開關(guān)。注意事項(xiàng)： 1、離心機(jī)在運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，不得移動(dòng)離心機(jī)，不要打開門蓋。2、安放離心機(jī)的臺(tái)面應(yīng)堅(jiān)實(shí)平整，四只橡膠機(jī)腳都應(yīng)與臺(tái)面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)生振 動(dòng)。3、離心前，離心管加液要平衡，若加液差異過大運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)會(huì)產(chǎn)生大的振動(dòng)，此時(shí)應(yīng)停機(jī)檢查，使加液符合要求，離心試管必須成偶數(shù)對(duì)稱放入。4、若運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)有離心試管破裂，會(huì)引起較大振動(dòng)應(yīng)立即停機(jī)處理。5、離心機(jī)徹底停止后，才可開蓋，取樣 恒溫氣浴搖床 使用及性能： 搖床（振蕩器）為實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備。廣泛用于對(duì)溫度和振蕩頻率有較高要求的細(xì)菌培養(yǎng)、 發(fā)酵、雜交、生物化學(xué)反應(yīng)以及酶和組織研究等。實(shí)驗(yàn)室常用的液體搖勻，微生物

6、、細(xì)菌和 細(xì)胞培養(yǎng)。SHK-99- n型臺(tái)式空氣恒溫?fù)u床，采用微電腦控制系統(tǒng)，溫度范圍：室溫+5c60C,精度 0.5C;時(shí)間范圍：1分鐘99小時(shí)59分鐘；轉(zhuǎn)速范圍：60RPM250RPM 操作程序： 1）樣品瓶牢固放入彈簧夾中 2）接通電源開關(guān)，儀器進(jìn)入準(zhǔn)備狀態(tài) 3）參數(shù)設(shè)定，（設(shè)定溫度、時(shí)間、轉(zhuǎn)速等參數(shù)）4） 按啟動(dòng)鍵儀器開始工作，按暫停鍵可暫停托盤的旋轉(zhuǎn)；5）按下控制面板的電源鍵兩秒，顯示屏顯示消失，關(guān)閉電源總開關(guān) 超凈工作臺(tái) 使用及性能： 超凈工作臺(tái)為分子生物學(xué)無菌操作提供可能，分為垂直送風(fēng)和水平送風(fēng)兩種。超凈臺(tái)由三相電機(jī)作鼓風(fēng)動(dòng)力，功率 145260W左右，將空氣通過由特制的微孔泡沫

7、塑料 片層疊合組成的“超級(jí)濾清器”后吹送出來，形成連續(xù)不斷的無塵無菌的超凈空氣層流，即所謂高效的特殊空氣”，它除去了大于0.3 m的塵埃、真菌和細(xì)菌抱子等等。超凈空氣的流 速為2430m/min,這已足夠防止附近空氣可能襲擾而引起的污染，這樣的流速也不會(huì)妨礙采用酒精燈或本生燈對(duì)器械等的灼燒消毒。工作人員就在這樣的無菌條件下操作，保持無菌材料在轉(zhuǎn)移接種過程中不受污染。 操作程序： 1）使用工作臺(tái)時(shí)，先經(jīng)過清潔液浸泡的紗布擦拭臺(tái)面，然后用消毒劑擦拭消毒。 2） 接通電源，提前30 分鐘打開紫外燈照射消毒，處理凈化工作區(qū)內(nèi)工作臺(tái)表面積累的微生物， 15 分鐘后，關(guān)閉紫外燈，開啟送風(fēng)機(jī)。3）工作臺(tái)面上

8、，不要存放不必要的物品，以保持工作區(qū)內(nèi)的潔凈氣流不受干擾。4）操作結(jié)束后，清理工作臺(tái)面，收集各廢棄物，關(guān)閉風(fēng)機(jī)及照明開關(guān)，用清潔劑及消毒劑擦拭消毒。5）最后開啟工作臺(tái)紫外燈，照射消毒30 分鐘后，關(guān)閉紫外燈，切斷電源。注意事項(xiàng)：操作時(shí)一定注意關(guān)掉紫外，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成傷害滅菌鍋使用及性能：細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)以及核酸等有關(guān)實(shí)驗(yàn)所用的試劑、器皿及實(shí)驗(yàn)用具，應(yīng)嚴(yán)格滅菌；應(yīng)將實(shí)驗(yàn)器械，試劑等進(jìn)行高壓消毒。對(duì)于經(jīng)過導(dǎo)入DNA 重組分子的菌株，操作后必須進(jìn)行嚴(yán)格的高壓消毒滅活處理；大批實(shí)驗(yàn)物品、試劑、培養(yǎng)基等可以使用大型消毒器進(jìn)行消毒。一些不能經(jīng)受高壓、高溫消毒的試劑可用濾器濾膜除菌，器皿可用紫外線照射、7

9、5%乙醇或 0.1%的十二烷基硫酸鈉（SDS）浸泡消毒。所有的細(xì)胞培養(yǎng)、細(xì)菌培養(yǎng)的操作，都應(yīng)在紫外線消毒后的超凈工作臺(tái)中進(jìn)行操作程序：1）開蓋：轉(zhuǎn)動(dòng)手輪，使鍋蓋離開密封圈，添加蒸餾水剛沒至板上2）通電：將控制面板上電源開關(guān)按至ON處，若水位低（LOW）紅燈亮3）堆放物品：需包扎的滅菌物品，體積不超過200mm x 100mm x 100mm為宜，各包裝之間留有間隙，堆放在金屬框內(nèi)，這樣有利于蒸汽的穿透，提高滅菌效果， 滅菌時(shí)間：121 ，20min， ；如為液體，液體必須裝在可耐高溫的玻璃器皿中，且不可裝滿，2/3 即可，121，18-20min3）密封高壓鍋：推橫梁入立柱內(nèi)，旋轉(zhuǎn)手輪，使鍋蓋

10、下壓，充分壓緊4）設(shè)定時(shí)間和溫度，開始滅菌5）滅菌結(jié)束，所有東西放入干燥箱干燥，排盡水氣 注意事項(xiàng)：如是手動(dòng)的滅菌鍋，在滅菌過程中，應(yīng)注意排凈鍋內(nèi)冷空氣，鍋內(nèi)冷空氣如排放不凈，會(huì)影響滅菌效果，達(dá)不到徹底滅菌的目的。要等溫度降為“0”，才可打開滅菌鍋鍋蓋；由于高壓蒸汽滅菌時(shí)，要使用溫度高達(dá)120、兩個(gè)大氣壓的過熱蒸汽，操作時(shí)，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，否則容易發(fā)生意外事故。PCR 儀PCR 儀，也稱DNA 熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀，是使一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA 鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列DNA 片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進(jìn)行DNA 變性、引物復(fù)性、DNA

11、聚合酶催化的延伸反應(yīng)的三個(gè)過程PCR 儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)學(xué)等等操作步驟1、開機(jī)：打開開關(guān)，視窗上顯示SELF TEST”,顯示10秒中后，顯示 RUN-ENTER菜單準(zhǔn)備執(zhí)行程序。2、放入樣品管，關(guān)緊蓋子。3、如果要運(yùn)行已經(jīng)編好的程序，則直接按Proceed ， 用箭頭鍵選擇已儲(chǔ)存的程序，按 Proceed ，則屏幕顯示按Proceed選擇ENABLE ,則開始執(zhí)行程序。4、如果要輸入新的程序，則在RUN-ENTER 菜單上用箭頭鍵選擇ENTER PROGRAM, 按 Proceed ，1）命名新的程序，最多8個(gè)字母，輸入后

12、按Proceed確認(rèn)（如何輸入字母、數(shù)字）。2）輸入程序步驟：名字輸入后，確認(rèn)，然后輸入相關(guān)程序5、輸入完成的程序后，到RUN-ENTER 菜單，選擇新程序，開始運(yùn)行。6、其它：用pause可以暫停一個(gè)運(yùn)行的程序，再按一次繼續(xù)程序。用stop或Cancel可停止運(yùn)行的程序。如何設(shè)置一個(gè)PCR 程序：一般分為8 步：1、預(yù)變性：可用 9495 C, 210min,一般用 5min。2、變性：一般用95，30s2min, 一般 45s1min。3、退火：溫度自定，30s2min。4、延伸：72，對(duì)于1kb=1min, 每增加 1kb 加 1min。5、循環(huán)數(shù)：一般 2535個(gè)循環(huán)（2,3,4步循環(huán)

13、）。6、最終延伸：72 C, 515min。7、保存：4，時(shí)間設(shè)為0。8、 END 。電泳儀電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等， 這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G 薄層等，分子生物學(xué)領(lǐng)域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳應(yīng)用電泳法可以對(duì)不同物質(zhì)進(jìn)行定性或定量分析，或?qū)⒁欢ɑ旌衔镞M(jìn)行組份分析或單個(gè)組份提取制備。實(shí)驗(yàn)室所用DYY-12 型電腦三恒多用電泳儀（北京六一儀器廠）

14、操作程序：1 首先用導(dǎo)線將電泳槽的兩個(gè)電極與電泳儀的直流輸出端聯(lián)接，注意極性不要接反。2 .按電源開關(guān)，顯示屏出現(xiàn)歡迎使用DYY-12型電腦三恒多用電泳儀 ”等字樣后，同時(shí)系統(tǒng)初始化，蜂鳴4 聲， 設(shè)置常設(shè)置。屏幕轉(zhuǎn)成參數(shù)設(shè)置狀態(tài)，根據(jù)工作需要選擇穩(wěn)壓穩(wěn)流方式及電壓電流范圍。3 確認(rèn)各參數(shù)無誤后，按 “啟動(dòng) ”鍵， 啟動(dòng)電泳儀輸出程序。在顯示屏狀態(tài)欄中顯示Start! 并蜂鳴 4 聲，提醒操作者電泳儀將輸出高電壓，注意安全。之后逐漸將輸出電壓加至設(shè)置值。同時(shí)在狀態(tài)欄中顯示 “Run；并有兩個(gè)不斷閃爍的高壓符號(hào)，表示端口已有電壓輸出。在狀態(tài)欄最下方，顯示實(shí)際的工作時(shí)間（精確到秒）4 .電泳結(jié)束，

15、儀器顯示：“END；并連續(xù)蜂鳴提醒。此時(shí)按任一鍵可止鳴注意事項(xiàng)1 電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也不能到電泳槽內(nèi)取放東西，如需要應(yīng)先斷電，以免觸電。同時(shí)要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。2 儀器通電后，不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險(xiǎn)絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。3 由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳時(shí)所通過的電流量也不同，其泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行。4 .使用過程中發(fā)現(xiàn)異?，F(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進(jìn)行檢修，以免發(fā)生意外事

16、故。作業(yè)列出分子生物學(xué)常用儀器的名稱，用途及操作時(shí)的注意事項(xiàng)。一，微量移液器微量移液器是連續(xù)可調(diào)的、計(jì)量和轉(zhuǎn)移液體的專用儀器，其裝有直接讀數(shù)容量計(jì)。量液操作注意問題1 未裝吸嘴的微量移液器絕對(duì)不可用來吸取任何液體。2 一定要在允許量程范圍內(nèi)設(shè)定容量，千萬不要將讀數(shù)的調(diào)節(jié)超出其適用的刻度范圍，否則會(huì)造成損壞。3 不要橫放帶有殘余液體吸嘴的移液器。4 不要用大量程的移液器移取小體積樣品。5. 移液器使用完后，將刻度調(diào)到最大刻度，收藏。二， 離心機(jī)的功能：分離，純化注意事項(xiàng)：1、離心機(jī)在運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)，不得移動(dòng)離心機(jī)，不要打開門蓋。2、安放離心機(jī)的臺(tái)面應(yīng)堅(jiān)實(shí)平整，四只橡膠機(jī)腳都應(yīng)與臺(tái)面接觸和均勻受力，以免產(chǎn)

17、生振動(dòng)。3、離心前，離心管加液要平衡，若加液差異過大運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)會(huì)產(chǎn)生大的振動(dòng)，此時(shí)應(yīng)停機(jī)檢查，使加液符合要求，離心試管必須成偶數(shù)對(duì)稱放入。4、若運(yùn)轉(zhuǎn)時(shí)有離心試管破裂，會(huì)引起較大振動(dòng)應(yīng)立即停機(jī)處理。5、離心機(jī)徹底停止后，才可開蓋，取樣三， 恒溫氣浴搖床使用及性能：搖床（振蕩器）為實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)設(shè)備。廣泛用于對(duì)溫度和振蕩頻率有較高要求的細(xì)菌培養(yǎng)、發(fā)酵、雜交、生物化學(xué)反應(yīng)以及酶和組織研究等。實(shí)驗(yàn)室常用的液體搖勻，微生物、細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)。四 超凈工作臺(tái)使用及性能：超凈工作臺(tái)為分子生物學(xué)無菌操作提供可能，分為垂直送風(fēng)和水平送風(fēng)兩種。注意事項(xiàng)：操作時(shí)一定注意關(guān)掉紫外，防止對(duì)實(shí)驗(yàn)人員造成傷害5 滅菌鍋使用及性能：

18、細(xì)菌和細(xì)胞培養(yǎng)以及核酸等有關(guān)實(shí)驗(yàn)所用的試劑、器皿及實(shí)驗(yàn)用具，應(yīng)嚴(yán)格滅菌；應(yīng)將實(shí)驗(yàn)器械，試劑等進(jìn)行高壓消毒注意事項(xiàng)：如是手動(dòng)的滅菌鍋，在滅菌過程中，應(yīng)注意排凈鍋內(nèi)冷空氣，鍋內(nèi)冷空氣如排放不凈，會(huì)影響滅菌效果，達(dá)不到徹底滅菌的目的。要等溫度降為“0”，才可打開滅菌鍋鍋蓋；由于高壓蒸汽滅菌時(shí)，要使用溫度高達(dá)120、兩個(gè)大氣壓的過熱蒸汽，操作時(shí)，必須嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，否則容易發(fā)生意外事故。6 PCR 儀PCR 儀，也稱DNA 熱循環(huán)儀、基因擴(kuò)增儀，是使一對(duì)寡核苷酸引物結(jié)合到正負(fù)DNA 鏈上的靶序列兩側(cè)，從而酶促合成拷貝數(shù)為百萬倍的靶序列DNA 片段，它的每一循環(huán)包括在三種不同溫度進(jìn)行DNA 變性、

19、引物復(fù)性、DNA 聚合酶催化的延伸反應(yīng)的三個(gè)過程PCR 儀主要應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和應(yīng)用研究等許多領(lǐng)域，如基因分析、序列分析、進(jìn)化分析、臨床診斷、法醫(yī)學(xué)等等7 電泳儀電泳技術(shù)是分子生物學(xué)研究不可缺少的重要分析手段。電泳一般分為自由界面電泳和區(qū)帶電泳兩大類，自由界面電泳不需支持物，如等電聚焦電泳、等速電泳、密度梯度電泳及顯微電泳等， 這類電泳目前已很少使用。而區(qū)帶電泳則需用各種類型的物質(zhì)作為支持物，常用的支持物有濾紙、醋酸纖維薄膜、非凝膠性支持物、凝膠性支持物及硅膠-G 薄層等，分子生物學(xué)領(lǐng)域中最常用的是瓊脂糖凝膠電泳注意事項(xiàng)1 電泳儀通電進(jìn)入工作狀態(tài)后，禁止人體接觸電極、電泳物及其它可能帶電部分，也

20、不能到電泳槽內(nèi)取放東西，如需要應(yīng)先斷電，以免觸電。同時(shí)要求儀器必須有良好接地端，以防漏電。2 儀器通電后，不要臨時(shí)增加或撥除輸出導(dǎo)線插頭，以防短路現(xiàn)象發(fā)生，雖然儀器內(nèi)部附設(shè)有保險(xiǎn)絲，但短路現(xiàn)象仍有可能導(dǎo)致儀器損壞。3 由于不同介質(zhì)支持物的電阻值不同，電泳時(shí)所通過的電流量也不同，其泳動(dòng)速度及泳至終點(diǎn)所需時(shí)間也不同，故不同介質(zhì)支持物的電泳不要同時(shí)在同一電泳儀上進(jìn)行。4 使用過程中發(fā)現(xiàn)異常現(xiàn)象，如較大噪音、放電或異常氣味，須立即切斷電源，進(jìn)行檢修，以免發(fā)生意外事故。實(shí)驗(yàn)二瓊脂糖凝膠電泳的制備及核酸檢測(cè)帶電荷的物質(zhì)在電場(chǎng)中的趨向運(yùn)動(dòng)稱為電泳。電泳的種類多，應(yīng)用非常廣泛，它已成為分子生物學(xué)技術(shù)中分離生物

21、大分子的重要手段。瓊脂糖凝膠電泳由于其操作簡(jiǎn)單、快速、 靈敏等優(yōu)點(diǎn)，已成為分離和鑒定核酸的常用方法。實(shí)驗(yàn)?zāi)康恼莆窄傊悄z電泳的原理;學(xué)習(xí)瓊脂糖凝膠電泳的操作。實(shí)驗(yàn)原理瓊脂糖是一種天然聚合長(zhǎng)鏈狀分子，沸水中溶解，45開始形成多孔性剛性濾孔，凝膠孔徑的大小決定于瓊脂糖的濃度。DNA 分子在堿性環(huán)境中帶負(fù)電荷，在外加電場(chǎng)作用下向正極泳動(dòng)。DNA 分子在瓊脂糖凝膠中泳動(dòng)時(shí)，有電荷效應(yīng)與分子篩效應(yīng)。不同 DNA ,其分子量大小及構(gòu)型不同，電泳時(shí)的泳動(dòng)率就不同，從而分出不同的區(qū)帶。瓊脂糖凝膠電泳法分離DNA ， 主要是利用分子篩效應(yīng)，遷移速度與分子量的對(duì)數(shù)值成反比關(guān)系。溴化乙錠（EB ）為扁平狀分子，在

22、紫外照射下發(fā)射熒光。EB 可與 DNA 分子形成EB-DNA復(fù)合物， 其發(fā)射的熒光強(qiáng)度較游離狀態(tài)EB 發(fā)射的熒光強(qiáng)度大10倍以上， 且熒光強(qiáng)度與DNA的含量成正比。用肉眼觀察，可檢測(cè)到5 ng 以上的 DNA 。1 影響 DNA 在瓊脂糖凝膠中遷移速率的因素：1）DNA 分子大小遷移速率U 與 logN 成反比（N 為堿基對(duì)數(shù)目）。分子大小相等，電荷基本相等（DNA 結(jié)構(gòu)重復(fù)性）。分子越大，遷移越慢。等量的空間結(jié)構(gòu)緊密的電泳快（超螺旋線性DNA）2 ） 瓊脂糖濃度：不同的凝膠濃度，分辨不同范圍的DNAAgarose：0.5%：1-30 kb ；0.7%：0.8-12 kb1.2%：0.4-7

23、kb；1.5%：0.2-3 kb.3）DNA 構(gòu)象：一般遷移速率超螺旋環(huán)狀線狀 DNA 單鏈開環(huán)。4）所加電壓：低電壓時(shí)，線狀DNA 片段的遷移速率與所加電壓成正比。使分辨效果好，凝膠上所加電壓不應(yīng)超過5V/cm5）堿基組成與溫度：一般影響不大4 -30 6）嵌入染料的存在：降低線性DNA 遷移率，（不提倡加在電泳液中）7）電泳緩沖液的組成及其離子強(qiáng)度影響DNA 的遷移率，無離子存在時(shí)，核酸基本不泳動(dòng)，離子強(qiáng)度過大產(chǎn)熱厲害，熔化凝膠并導(dǎo)致DNA變性，一般采用1 X TAE , 1 X TBE , 1 X TPE（均含 EDTA pH8.0 ） 。2.澳化乙錠（EB）為致癌劑，操作時(shí)應(yīng)戴手套，盡量減少臺(tái)面污染。3電泳指示劑：核酸電泳常用的指示劑有兩種，溴酚藍(lán)（bromophenol blue, Bb ）呈藍(lán)紫色；二甲苯晴（xylene cyanol, Xc ）呈藍(lán)色，它攜帶的電荷量比溴酚藍(lán)少，在凝膠中的遷移率比溴酚藍(lán)慢。儀器和試劑儀器微量移液器，電泳儀，電泳槽，微波爐試劑瓊脂糖：1.0%；電泳緩沖液（50 X TAE 電泳緩沖液取 Tris24.2g ,冰醋酸 5.7ml , 0.25mol/L EDTA（pH8.0）20m