覆盆子鑒別與含量測定方法學確認方案

1、覆盆子鑒別與含量測定方法學確認方案文件審批、t姓名簽名日期起草人質(zhì)量部XXX年 月曰審核人質(zhì)量部XXX年 月曰批準人質(zhì)量部XXX年 月曰1、目的本試驗對覆盆子鑒別與含量測定檢驗方法進行確認，為了確保檢驗數(shù)據(jù)的科學 性、準確 性和可靠性，制定本確認方案，以確定建立的鑒別與含量測定檢驗方法能夠 對該產(chǎn)品進行準 確的檢驗，為我司化驗室以后的覆盆子檢驗方法提供依據(jù)。2、范圍本方案適用于我公司覆盆子鑒別與含量測定檢驗方法確實認。3、職責職務岡位姓名職責組長質(zhì)量部部長XXX1. 確認方案及報告的審核；確保方案及報告內(nèi)容符合 GM及 檢測要求。2. 組織實施確認工作，確保確認工作嚴格按照方案實施；3. 確認

2、過程中偏差和變更的審核，組織確認過程中發(fā)生 的偏 差的調(diào)查；小組成員QC主任XXX負責確認方案及確認報告的起草，確認實施記錄的審核QCXXX按照確認方案進行確認工作，填與記錄，并判疋是否符 合認 可標準要求4、確認依據(jù)文件?中國藥典?2021年版5、確認程序5.1先決條件確實認儀器經(jīng)過校準確認所需儀器經(jīng)過校準并在有效期內(nèi)，確認記錄見附表01 05.1.2.人員培訓確認確認小組人員參加了本方案的培訓，以及儀器的操作、維護和保養(yǎng)培訓、偏差處理、變更控制等SOP勺培訓，確認記錄見附表02。相關SOP確實認制定儀器操作、校驗、維護和保養(yǎng)標準程序并批準，確認記錄見附表03。藥品確實認確認方案確認過程中使

3、用的藥品符合規(guī)定，并在有效期內(nèi)。確認記錄見附表0405.2鑒別方法學確認專屬性：供試品溶液制備取山柰酸-3-0-蕓香糖苷含量測定項下供試品溶液，即得。對照品溶液制備取椴樹苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.1mg的溶液，即得。陰性溶液制備 照供試品溶液制備方法除取樣品外，同法制成陰性溶液 測定 照?薄層色譜法標準操作規(guī)程?試驗，吸取上述供試品溶液與陰性溶液各5卩I,及對照品溶液2卩I,分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯-甲醇冰-甲酸90 :4 : 4 : 0.5 為展開劑，展開，取出，晾干，噴以三氯化鋁溶液，在105C加熱5分鐘，在紫外光燈365nm 下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應

4、的位置上,顯相同顏色的熒光斑點；陰性液在相應位置上不顯斑點見薄層色譜圖05-1 。確認記錄見附表05。5.3含量測定方法學確認鞣花酸含量測定檢查方法：照?高效液相色譜法標準操作規(guī)程?測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.2%磷酸溶液15 : 85為流動相；檢測波長為254nm理論板數(shù)按鞣花酸峰計算應不低 于3000。 對照品溶液的制備取鞣花酸對照品適量，精密稱定，加70%?醇制成每1ml含5卩g的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉末過四號篩約 0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密參加70%甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再稱定重量，用70

5、%?醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液1ml，置5ml量瓶中，用70%甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10卩l(xiāng)，注入液相色譜儀，測定，即得。本品按枯燥品計算，含鞣花酸G4fQ 不得少于0.20%。系統(tǒng)適用性確認5.3.1.2.1 色譜條件咼效液相色譜儀XXXXX色譜柱Aglile nt TC-C18(2) 250*4.6mm 5um流速1.0ml/min檢測波長254nm UV檢測器柱溫25 r進樣量10A1運行時間30mi n53122溶液配制名稱配制方法流動相分別量取乙腈色譜純與超純水，以乙腈-0.2%磷酸溶液15 : 85

6、的比例混合，用0.45水系微孔濾膜濾過，超聲脫氣10 min,即得。必 要時可根據(jù)實際使用情況調(diào)整配制溶液的體積?？瞻兹軇悠诽幚碛?0%甲醇溶液。對照品溶液取鞣花酸對照品適量，精密稱定，加70%?醇制成每1ml含5卩g的 溶液，即得。平行制備2份，分別為對照品溶液1、2。供試品溶液取本品粉末過四號篩約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密參加70%?醇50ml，稱定重量，加熱回流1小時，放冷，再 稱定重 量，用70%?醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取 續(xù)濾液1ml， 置5ml量瓶中，用70%?醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。平行制備2份，分別為供試品溶液1、2。53123試

7、驗操作待儀器穩(wěn)定后，按以下進樣序列注入高效液相色譜儀， 記錄色譜圖，以鞣花酸峰 面積計 算5針對照品溶液1的RSD按外標法以對照品溶液1的鞣花酸峰面積計算對 照品溶液2的回 收率。序號樣品名稱進樣體積ul進樣針數(shù)1空白溶劑512對照品溶液1553對照品溶液25253124系統(tǒng)適用性回收率RcR21Ar21 m RICriAR1 M R2CR2100%Ar22AriCR1R1CR2按以下公式計算對照品溶液2的回收率:RCr222第一針式中：Ar1、Ar21、Ar22 :分別為對照品溶液1連續(xù)5針的平均峰面積和對照品溶液和第二針的峰面積；M R2Mr1、Mr2:分別為對照品1、2的稱樣量；Cr1和

8、心2:分別為對照品1、2中鞣花酸的含量；Rc.21和Rc.22：分別為對照品溶液2第1針和第2針的回收率；可接受標準5針對照品溶液1鞣花酸主峰的保存時間的 RSD勻不大于2.0% ,鞣花酸主峰面積 的 RSD勻應不大于1.0% ;對照品溶液2的回收率應在98.0%? 102.0%。理論板數(shù)按鞣 花酸 峰計算應不低于3000。注：假設系統(tǒng)適用性不符合標準應立即停止進樣，排查原因后再重做系統(tǒng)適用性，系統(tǒng)適用性合格前方可進行如下試驗。確認記錄見附表06。含量測定5.3.1.3.1 操作系統(tǒng)適用性合格后，接看系統(tǒng)適用性進樣序列取供試品溶液1、2,用0.45um 尼龍66 一次性針式過濾頭棄去5ml后取

9、續(xù)濾液，進樣，進樣序列如下序號 4、5、6序號樣品名稱進樣體積ul進樣針數(shù)1空白溶劑512對照品溶液1553對照品溶液2524供試品溶液1525供試品溶液2526對照品溶液152注：在對照品溶液1運行完成后一般間隔10針以時間最短的計后，應重新插入2針對照品溶液1,作為系統(tǒng)跟蹤，以此來評價系統(tǒng)穩(wěn)定性。5.3.1.3.2 計算綜合前面 5 針對照品溶液 1 和后面 2 針對照品溶液 1 計算鞣花酸峰面積的 RSD 當含量%供試品重量 1水分% 稀釋倍數(shù)RSD不大于2.0%時，按以下公式計算覆盆子的含量:注：綜合供試品溶液的前面5針對照品溶液1和后面2針對照品溶液1計算鞣花酸峰面 積的RSD不符合

10、規(guī)定時，應排查原因后，再按項重新測定。53133可接受標準：按枯燥品計算，含鞣花酸C4HQ 不得少于0.20%。確認記錄見附表06。山柰酸-3-O-蕓香糖苷含量測定檢查方法：照?高效液相色譜法標準操作規(guī)程?測定。色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-0.2%磷酸溶 液15 : 85為流動相；檢測波長為 344nm理論板數(shù)按山柰酸-3-O-蕓香糖 苷峰計算應 不低于3000。對照品溶液的制備取山奈酸-3-O-蕓香糖苷對照品適量，精密稱定，加70%?醇分別制成每1ml含80卩g的溶液，即得。供試品溶液的制備取本品粉末過四號篩約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密參加70%

11、甲醇50ml，稱定重量，加熱回流提取1小時，放冷，再稱定重量，用70%?醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用石油醚振搖提取 3次，每次20ml，棄去石油醚液，再用水飽和正丁 醇振 搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10卩I,注入液相色譜儀，測定，即得。本品按枯燥品計算，含山柰酸-3-O-蕓香糖苷QHOh 不得少于0.03%。系統(tǒng)適用性確認色譜條件咼效液相色譜儀XXX色譜柱Aglile nt TC-C18(2

12、) 250*4.6mm 5um流速1.0ml/min檢測波長344nm UV檢測器柱溫25 r進樣量10A1運行時間35min5.322.2溶液配制名稱配制方法流動相分別量取乙腈色譜純與超純水，以乙腈-0.2%磷酸溶液15 : 85 的比例混合，用0.45水系微孔濾膜濾過，超聲脫氣10 min,即得。必 要時可根據(jù)實際使用情況調(diào)整配制溶液的體積?？瞻兹軇悠诽幚碛?0%甲醇溶液。對照品溶液取山柰酸-3-O-蕓香糖苷對照品適量，精密稱定，加 70%?醇分別制 成每1ml含80卩g的溶液，即得。平行制備2份，分別為對照品溶液1、2。供試品溶液取本品粉末過四號篩約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中， 精

13、密 參加70%?醇50ml,稱定重量，加熱回流提取1小時，放冷，再稱定重 量，用70%?醇補足減失的重量，搖勻，濾過，精密量 取續(xù)濾液25ml， 蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用石油醚振搖提 取3次，每次20ml， 棄去石油醚液，再用水飽和正丁醇振搖提取3次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇適量使溶解，轉移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。平行制備2份，分別為供試品溶液1、2。5.322.3試驗操作待儀器穩(wěn)定后，按以下進樣序列注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖，以山柰酸-3-O-蕓香糖苷峰面積計算5針對照品溶液1的RSD按外標法以對照品溶液1的山 柰酸-3-0-

14、蕓香糖苷峰面積計算對照品溶液 2的回收率。序號樣品名稱進樣體積ul進樣針數(shù)1空白溶劑512對照品溶液1553對照品溶液252下載可編輯5.322.4 系統(tǒng)適用性回收率按以下公式計算對照品溶液2的回收率:RCr22RcAr21 m riCR1Ari m R2CR2100%Ar22AriM R1M R2CR1CR2式中：Ari、Ar21、Ar22 :分別為對照品溶液1連續(xù)5針的平均峰面積和對照品溶液 2第一針和第二針的峰面積；Mr1、Mr2:分別為對照品1、2的稱樣量；CR1和心2:分別為對照品1、2中山柰酸-3-0-蕓香糖苷的含量；RC.21和RC.22：分別為對照品溶液2第1針和第2針的回收率

15、；可接受標準5針對照品溶液1山柰酸-3-0-蕓香糖苷主峰的保存時間的 RSD勻不大于2.0%,山柰酸 -3-0-蕓香糖苷主峰面積的RS%應不大于1.0%;對照品溶液2的回收率應在98.0%? 102.0%。理論板數(shù)按山柰酸-3-0-蕓香糖苷峰計算應不低于 3000。注：假設系統(tǒng)適用性不符合標準應立即停止進樣，排查原因后再重做系統(tǒng)適用性，系統(tǒng)適用性合格前方可進行如下試驗。確認記錄見附表07。含量測定5.3.2.3.1 操作系統(tǒng)適用性合格后，接看系統(tǒng)適用性進樣序列取供試品溶液1、2,用0.45um 尼龍66次性針式過濾頭棄去5ml后取續(xù)濾液，進樣，進樣序列如下序號 4、5、6序號樣品名稱進樣體積u

16、l進樣針數(shù)1空白溶劑512對照品溶液1553對照品溶液2524供試品溶液1525供試品溶液2526對照品溶液152注：在對照品溶液1運行完成后一般間隔10針以時間最短的計后，應重新插 入2 針對照品溶液1,作為系統(tǒng)跟蹤，以此來評價系統(tǒng)穩(wěn)定性。5.323.2 計算綜合前面5針對照品溶液1和后面2針對照品溶液1計算山柰酸-3-O-蕓香糖苷峰含量%供試品重量 1水分% 稀釋倍數(shù)面積的RSD當RSD不大于2.0%時，按以下公式計算覆盆子的含量:注：綜合供試品溶液的前面 5針對照品溶液1和后面2針對照品溶液1計算山柰酸-3-0- 蕓香糖苷峰面積的RSD不符合規(guī)定時，應排查原因后，再按5.322項重新測人

17、定。53233可接受標準：按枯燥品計算，含山柰酸-3-0-蕓香糖苷G7HO5不得少于0.03%。確認記錄見附表 07。6、偏差處理在確認過程中，應嚴格按照確認方案進行操作和判定，出現(xiàn)個別指標不符合標準的結果時，針對不合格指標應展開調(diào)查分析，對于確認是因操作不當?shù)茸陨碓蛟斐桑瑧匦逻M行測試。確認過程中所產(chǎn)生的偏差記錄在附表08中。7、變更控制涉及到方案變更時，填寫“變更申請表，需要對其進行原因分析，根據(jù)分析結果斷定是否需要重新制定確認方案還是修改可接受標準，并將涉及到的變更情況記錄 在附表09中。&附表清單編號附表名稱編號附表名稱01儀器校驗確認記錄表06鞣花酸含量測定方法確認記錄表0

18、2人員培訓確認記錄表07山柰酸-3-0-蕓香糖苷含量測定方法確認記錄表03相關SOF確認記錄表08偏差處理確認記錄04藥品確認記錄09變更控制確認記錄05鑒別方法確認記錄表9、變更記錄變更描述版本號批準日期00/新文件。附表01:儀器校驗確認記錄表儀器校驗確認儀器名稱型號檢定有效期至檢定證書編號符合要求電子天平XXX是否XXX是否咼效液相色譜儀XXX是否玻璃儀器校驗確認玻璃儀器名稱規(guī)程編號校正日期符合要求谷量瓶10ml是否25ml是否50ml是否100ml是否移液管是否是否10ml是否50ml是否疋否存在偏差或不致項：是偏差或不一致記錄在偏差報告中，偏差編號：。否結論：所有儀器均經(jīng)校驗且在有效

19、期內(nèi)。檢查人/日期復核人/日期附表02:人員培訓確認記錄表培訓記錄覆盆子鑒別與含量測定方法學確認方案XXX電子天平標準操作與維護規(guī)程XXX型高效液相色 譜儀標準操作與維 護規(guī) 程偏差處理 標準管理 規(guī)程變更控制標準管理規(guī)程培訓時間培訓地點課時講師姓名是否已接受培訓是用 “ 2表示，否用“ X'表示疋否存在偏差或不致項：是偏差或不一致記錄在偏差報告中，偏差編號：。否結論：執(zhí)行本方案的人員已得到必要的培訓。檢查人/日期復核人/日期附表03:相關SOP確認記錄表SOP名稱檢杳標準檢查結果XXX電子天平標準操作與維護規(guī)程已批準生效是否XXX型高效液相色譜儀標準操作與維護規(guī)程已批準生效是否偏差處

20、理標準管理規(guī)程已批準生效是否變更控制標準管理規(guī)程已批準生效是否疋否存在偏差或不致項：是偏差或不一致記錄在偏差報告中，偏差編號：。否結論：相關SOP勻已批準生效。檢查人/日期復核人/日期附表04 :藥品確認記錄名稱批號來源符合要求覆盆子留樣室是否椴樹苷對照品中國食品藥品檢定研究院是否鞣花酸對照品中國食品藥品檢定研究院是否山柰酸-3-O-蕓香糖甘對照品中國食品藥品檢定研究院是否疋否存在偏差或不致項：是偏差或不一致記錄在偏差報告中，偏差編號：。否結論：樣品、對照品符合要求。檢查人/日期復核人/日期附表05:鑒別方法確認記錄人員工程薄層板點樣方式溫度濕度圖譜判定標準結果符合要求專屬性市售手動見05-1

21、供試品與對照品色譜相應 的位置上，顯相同顏 色的 斑點；陰性液不顯斑點。是否疋否存在偏差或不致項：是偏差或不一致記錄在偏差報告中，偏差編號：。否結論：椴樹苷鑒別分析方法已確認符合規(guī)定。檢查人/日期復核人/日期附表06:鞣花酸含量測定方法確認記錄色譜:柱柱溫檢測扌器波長流動相進樣量系統(tǒng)適用性確認工程理論板數(shù)對照品1對照品2供試品1供試品2鞣花酸可接受標準按鞣花酸峰計算應不低于3000是否符合規(guī)定是否是否工程別離度對照品1對照品2供試品1供試品2鞣花酸可接受標準與相鄰色譜峰之間的別離度應大于1.5是否符合規(guī)定是否是否工程重復性對照品1 RSD值對照品2回收率鞣花酸可接受標準5針峰面積的相對標準偏差RSD值應不大于2.0%;對照品溶液2的回收率應在98.0% ? 102.0%是否符合規(guī)定是否是否工程保存時間空白溶劑對照品溶液供試品溶液鞣花酸可接受標準空白溶劑在相應保存時間處沒有峰；供試品與對照品在相應保存時 間處出現(xiàn)峰。是否符合規(guī)定是否是否含量測定確認工程平均峰面積對照品1對照品2供試品1供試品2鞣花酸含量測定結果供試品1供試品2平均值可接受標準：按枯燥品計算，含鞣花酸C14HO 不得少于0.20%。是否符合規(guī)定是否疋否存在偏差或不致項：是 偏差或不一致記錄在偏差報告中，