大鼠肌鈣蛋白T(TnT)

1、大鼠鈣蛋白T（TnT）酶聯(lián)免疫檢測試劑盒使用說明書使用前仔細(xì)閱讀本說明書。本酶聯(lián)免疫試劑盒是基于雙抗體夾心技術(shù)原理，來檢測大鼠鈣蛋白T（TnT），只能用于研究用途，不得用于醫(yī)學(xué)診斷。用 途： 用于大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中鈣蛋白T（TnT）的測定。工作原理本試劑盒采用的是雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）測定樣品中大鼠鈣蛋白T（TnT）的水平。向預(yù)先包被了大鼠鈣蛋白T（TnT）單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入鈣蛋白T（TnT），溫育；洗滌后，加入HRP標(biāo)記過的鈣蛋白T（TnT）抗體。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶，然后加入底物A、B，產(chǎn)生藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺與樣品

2、中大鼠鈣蛋白T（TnT）的濃度呈正相關(guān)。試劑盒組成 1標(biāo)準(zhǔn)品（640ng/L）0.5ml7顯色劑A液6ml2標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液3ml8顯色劑B液6ml3酶標(biāo)包被板12孔8條9終止液6ml4酶標(biāo)試劑6ml10說明書1份530倍濃縮洗滌液20ml11封板膜2張6樣品稀釋液6ml12密封袋1個(gè)需要而未提供的試劑和器材1 37恒溫箱。2 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。3 精密移液器及一次性吸頭4 蒸餾水，5 一次性試管6 吸水紙注意事項(xiàng)1 從2-8取出的試劑盒，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。2 各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。3 建議

3、所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再按說明書操作進(jìn)行測定，計(jì)算時(shí)請最后乘以總稀釋倍數(shù)（n5）。4 嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。5 為避免交叉污染，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。6 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。7 底物B對光敏感，避免長時(shí)間暴露于光下。洗板方法手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要，重復(fù)此過程數(shù)次。自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī)，應(yīng)在熟練使用后

4、再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中。標(biāo)本要求 1不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。2標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。操作程序1 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：（本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶請按照說明自行在小試管中倍比稀釋）：320ng/L（5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）120l的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入120l的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液160ng/L（4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）120l的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120l的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液80ng/L（3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）120l的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120l的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液40ng/L（2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）120l的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加

5、入120l的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液20ng/L（1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品）120l的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入120l的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液2 分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50l；在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品最終稀釋度為5倍）。輕輕晃動(dòng)混勻，37溫育30分鐘。 3 棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。4 每孔加入酶標(biāo)試劑50l，空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻，37溫育30分鐘。 5 棄去液體，甩干，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒，甩去洗

6、滌液，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次，拍干。6 每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色10分鐘。7 取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50l，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。8 測定：以空白孔調(diào)零，在450nm波長下測量各孔的吸光度值（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。9 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。操作程序總結(jié)：準(zhǔn)備試劑，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品 加入準(zhǔn)備好的樣品和標(biāo)準(zhǔn)品，37反應(yīng)30分鐘洗板5次，加入酶標(biāo)試劑，3