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文檔簡介
1、藥用植物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)夸浘w論實(shí)驗(yàn)一顯微鏡的構(gòu)造和使用實(shí)驗(yàn)二植物細(xì)胞后含物及細(xì)胞壁實(shí)驗(yàn)三綜合實(shí)驗(yàn)植物細(xì)胞減數(shù)分裂實(shí)驗(yàn)四植物組織(一)實(shí)驗(yàn)五植物組織(二)實(shí)驗(yàn)六根的顯微構(gòu)造實(shí)驗(yàn)七莖的顯微構(gòu)造實(shí)驗(yàn)八葉的形態(tài)和內(nèi)部構(gòu)造實(shí)驗(yàn)九植物繁殖器官實(shí)驗(yàn)十綜合實(shí)驗(yàn)薄荷實(shí)驗(yàn)十藻、菌、地衣實(shí)驗(yàn)十一苔蘚、蕨類、祼子植物實(shí)驗(yàn)十一設(shè)計(jì)性實(shí)驗(yàn)被子植物花圖式與花程式及檢索表的使用實(shí)驗(yàn)十二被子植物1實(shí)驗(yàn)十三被子植物2實(shí)驗(yàn)十四被子植物3實(shí)驗(yàn)十五被子植物4實(shí)驗(yàn)十六被子植物5附錄植物標(biāo)本的采集制作及其鑒定緒論、實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)(一)實(shí)驗(yàn)前的準(zhǔn)備工作:1根據(jù)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo),預(yù)習(xí)與本次實(shí)驗(yàn)相關(guān)的課堂講授內(nèi)容,并閱讀指定的參考文獻(xiàn)。2仔細(xì)閱讀本次實(shí)驗(yàn)的內(nèi)容,
2、要求弄懂實(shí)驗(yàn)原理和方法。3對(duì)于需要同時(shí)進(jìn)行的幾項(xiàng)實(shí)驗(yàn),預(yù)先思考進(jìn)行的先后次序,以便實(shí)驗(yàn)時(shí)節(jié)約時(shí)間。4準(zhǔn)備好各種自備的實(shí)驗(yàn)用品,如鉛筆(HB、2B各一支)、白色橡皮擦、直尺、報(bào)告紙等。(二)實(shí)驗(yàn)過程中的幾點(diǎn)要求:1遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則,保持實(shí)驗(yàn)室安靜。2實(shí)驗(yàn)認(rèn)真、觀察仔細(xì),觀察應(yīng)當(dāng)和思考結(jié)合起來,因此實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)當(dāng)手、眼、腦三者并用。3由于實(shí)驗(yàn)時(shí)間有限,實(shí)驗(yàn)時(shí)應(yīng)當(dāng)善于安排自己的工作,注意力應(yīng)當(dāng)集中在主要的問題上,不要花過多時(shí)間去鉆研細(xì)小的次要問題,一時(shí)解決不了的次要問題,可留待課外時(shí)間去解決。4實(shí)驗(yàn)開始前,教師進(jìn)行講解和提問時(shí),應(yīng)當(dāng)注意聽取,并作必要的記錄。5在實(shí)驗(yàn)過程中,應(yīng)當(dāng)隨時(shí)觀察所得現(xiàn)象,測(cè)量數(shù)據(jù),
3、計(jì)算、推理及結(jié)論等寫在報(bào)告紙上,應(yīng)當(dāng)養(yǎng)成能隨時(shí)作出準(zhǔn)確、清楚、整齊的記錄而不需要重抄的良好習(xí)慣,測(cè)量的數(shù)據(jù)禁止用另外紙片記錄。6實(shí)驗(yàn)進(jìn)行過程中,必須注意聽取接受教師的指導(dǎo)。7實(shí)驗(yàn)桌面上和地面上應(yīng)隨時(shí)保持整潔,非實(shí)驗(yàn)必要物品一律不許放在桌面或桌架上。8酒精燈用后,應(yīng)及時(shí)熄滅。9紙屑、廢紙應(yīng)置紙簍內(nèi),不得亂丟在地上,紙簍內(nèi)不得倒入液體。(三)實(shí)驗(yàn)完畢時(shí)的幾點(diǎn)要求:1按照教師指定時(shí)間交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。2把實(shí)驗(yàn)用品收拾干凈,放在指定位置,擦凈桌面。3值日負(fù)責(zé)最后清掃實(shí)驗(yàn)室地面,清理桌面,擦凈黑板及完成指定的工作。4實(shí)驗(yàn)完畢后,應(yīng)檢查水源、電源是否關(guān)好,離開實(shí)驗(yàn)室應(yīng)關(guān)好門窗。二、細(xì)胞壁及內(nèi)含物的顯微化學(xué)鑒別法
4、取切片或粉末少量,置載玻片上。照下列方法加規(guī)定的試液12滴,加蓋玻片,置顯微鏡下觀察:1木化細(xì)胞壁:加間苯三酚試液12滴,稍放置或微熱后,加鹽酸1滴,因木化程度不同,顯紅色或紫紅色。2.木栓化或角質(zhì)化細(xì)胞壁:加蘇丹田試液或紫草試液,放置后或微熱后,顯橘紅色、紅色或紫紅色。3纖維素細(xì)胞壁:加氯化鋅碘試液,或先加碘試液濕潤后,稍放置,用濾紙條吸去多余的碘液,再加66%(ml/ml)硫酸溶液,顯藍(lán)色或紫色。4淀粉粒:加碘試液顯藍(lán)色或紫色。5 .菊糖:加10%a茶酚的乙醇溶液,再加硫酸,顯紫紅色并很快溶解。6 .脂肪油、揮發(fā)油或樹脂:(1)加蘇丹田或紫草試液,顯橘紅色、紅色或紫紅色。(2)加90%乙醇
5、,脂肪油不溶解(蓖麻油及豆油例外),揮發(fā)油則溶解。7糊粉粒:加碘試液,顯棕色或黃棕色;加三硝基苯酚試液,顯黃色;加硝酸汞溶液,顯磚紅色。8粘液:(1)加墨汁,粘液呈無色透明塊狀,而其他細(xì)胞及細(xì)胞內(nèi)含物均顯黑色。(2)加釕紅試液,顯紅色。9 草酸鈣結(jié)晶:加稀醋酸不溶解;加稀鹽酸即溶解而無氣泡發(fā)生;加硫酸(12)溶液,片刻后析出硫酸鈣針狀結(jié)晶。10碳酸鈣(鐘乳體):加稀鹽酸即溶解,同時(shí)有氣泡發(fā)生。11硅質(zhì):加硫酸不溶解。三、藥材圖和顯微圖的一般繪制法生藥鑒定實(shí)驗(yàn)繪圖的目的,是使學(xué)生仔細(xì)觀察實(shí)物標(biāo)本,并將觀察到的特征通過圖保存下來,供學(xué)習(xí)和日后參考之用;教師也可根據(jù)學(xué)生的繪圖來考查學(xué)生對(duì)實(shí)物標(biāo)本特征
6、的觀察是否仔細(xì)和正確無誤。圖可以集中地、突出地表現(xiàn)實(shí)物的主要特征,它比單純的文字描述形象的多,易記得多,不少特征用圖比攝影效果好。因此,它是中藥鑒定工作者的一項(xiàng)必須掌握的基本功之一。1藥材圖的繪制法(1)準(zhǔn)備工作:除準(zhǔn)備繪圖的筆、紙等工具外,還必須對(duì)所要繪圖的藥材特征有所了解,應(yīng)當(dāng)畫出最本質(zhì)的、最典型的特征,拋掉次要的和偶然的東西。(2)標(biāo)本的選擇和處理:應(yīng)從大量的藥材標(biāo)本中,選擇具有典型特征,大小適中的標(biāo)本來畫,不要選擇形狀特異,缺乏典型基本特征的標(biāo)本,在畫藥材圖的時(shí)候,一般的藥材標(biāo)本不必經(jīng)過處理,但有些皺縮的葉子應(yīng)放在軟化器中(盛有氯仿水的干燥器)軟化,然后放在濾紙上展開壓平,以便畫出其全
7、形狀;皮類、莖木類藥材,一端可用刀削平;果實(shí)、種子類藥材,有的為了表示出內(nèi)部種子著生及排列情況,需將果實(shí)縱切或橫切。(3)圖的大小和數(shù)量:圖的大小是根據(jù)標(biāo)本的特點(diǎn),圖面的要求來考慮,同時(shí)也應(yīng)該使圖和實(shí)物的大小比例成為一個(gè)簡單的整數(shù)或分?jǐn)?shù),例如,原大、放大5倍、縮小1/2倍等。總之,圖的大小必須能清楚地表示標(biāo)本各部分的特點(diǎn)。一種藥材需繪制圖的數(shù)量取決于標(biāo)本的特點(diǎn)和大小,如較大的根類、果實(shí)類、卷筒的皮類等,一般只繪制一個(gè)圖;片塊狀的皮類,兩面被毛不同的葉類,異形葉等,應(yīng)繪制正反兩面和相異的圖;很小的種子類藥材,應(yīng)多繪一些種子,也可以將其中一粒種子倍數(shù)放大而畫出表面特征。(4)藥材放置的位置和投影:
8、在畫圖前必須選好標(biāo)本放置的位置,一方面有利于采光投影,反映出標(biāo)本的主要特征和立體感,另一方面要避免畫顛倒,如橫生根莖放成水平方向,有芽和地上莖的一端應(yīng)向上;葉柄的一端應(yīng)向下,對(duì)莖、節(jié)、枝痕、果實(shí)及種子等的非采光的陰影處,應(yīng)畫出投射的線條。(5)圖的注解:圖畫好后應(yīng)當(dāng)附上盡可能詳細(xì)的注解,根據(jù)指示線標(biāo)注各部分名稱和特征的名稱,這些指示線要避免和圖中的線條平行,也要避免深入圖中1/2以上,指示線和指示線之間應(yīng)當(dāng)有適當(dāng)?shù)木嚯x,在圖的下方應(yīng)注明圖的編號(hào)、名稱和放大(縮?。┍稊?shù)。2顯微圖繪制法藥材的顯微特征可分為兩大類:一類是組織簡圖,一類是組織詳圖、解離組織圖和粉末圖。(1)簡圖:是用來表示低倍鏡下所
9、見各種組織和某些特征,組織的排列和分布情況。在這種圖中,用線條表示各種組織的界限,用符號(hào)來表示某些特征細(xì)胞的分布,一般不畫出細(xì)胞的形狀。通過簡圖的觀察,能對(duì)組織構(gòu)造情況有清晰而簡明的概念,但對(duì)每個(gè)細(xì)胞的情況就不能了解到。( 2) 詳圖:是用來表示在高倍鏡下所見組織中各種細(xì)胞的形狀及其排列情況的。常分橫切面圖、縱切面圖和表面觀圖三種。繪制比較典型有代表性的一部分,細(xì)胞的形狀、細(xì)胞壁的厚度和紋孔及層紋等,都要盡可能畫得準(zhǔn)確。如每個(gè)細(xì)胞都含數(shù)目很多而形狀又相似的內(nèi)含物(如淀粉、糊粉粒)則只需在一部分細(xì)胞中畫出作為代表,其余細(xì)胞可以不畫。在畫解離組織或粉末特征時(shí),應(yīng)將顯微鏡下觀察到的主要特征,按類別畫
10、出來,如各種形狀的纖維、石細(xì)胞、導(dǎo)管、油細(xì)胞、草酸鈣結(jié)晶、淀粉粒、保護(hù)毛等,同一類的畫在一起。(3)繪圖方法:有徒手繪圖法和利用顯微描繪器的繪圖法等。將繪圖紙放在顯微鏡的右側(cè),左眼觀察物象,右眼看繪圖。將所見物象畫在繪圖紙上,把每個(gè)細(xì)胞按比例和形狀畫出來,同時(shí)還要注意各種組織之間的比例。一般用兩種線條畫圖。一般的薄壁細(xì)胞用單線條,繪出細(xì)胞的形狀及組織特征;一般的厚壁細(xì)胞用雙線條,繪出細(xì)胞的形狀及組織特征。在一般的組織詳圖中多是單線條和雙線條混合使用,表示各種細(xì)胞壁的厚薄程度和形狀K圖21常用的簡圖符號(hào)F說明:A框中的符號(hào)是單線。它可根據(jù)繪圖的需要延伸或縮短,繪成平直或彎曲狀用以表示內(nèi)皮層、中柱
11、鞘、形成層、表皮、一列細(xì)胞構(gòu)成的射線、花序軸(肉穗花序的花序軸除外)等。也可用以表示簡圖內(nèi)某個(gè)組織或部分的邊界。B框中的符號(hào)就是空白。用以表示各種薄壁組織,如:外皮層、中皮層、栓內(nèi)層、髓、束間薄壁組織、基本組織、海綿組織、兩列以上的細(xì)胞所構(gòu)成的射線,還可用來表示某個(gè)部分中暫時(shí)不被強(qiáng)調(diào)的組織,例如切皮部中除纖維外的其它組織,木質(zhì)部中除導(dǎo)管外的其它組織C框中的符號(hào)可根據(jù)需要延長。它表示木栓層。有時(shí),可認(rèn)為符號(hào)中位于內(nèi)側(cè)的?。ɑ颦h(huán))形線代表木栓形成層。D框中的符號(hào)是一些交叉線。用以表示纖維(群)或石細(xì)胞(群)。E框中的符號(hào)是黑色團(tuán)塊,可隨需要而呈不同形狀。也用以表示纖維(群)或石細(xì)胞(群)。F框中的
12、符號(hào)是一群小圓點(diǎn)。用以表示除韌皮射線的韌皮部組織。有時(shí)可只表示韌皮部中的篩管及其伴胞。G框中的符號(hào)是一些與半徑同向的直線。用以表示除木射線外木質(zhì)部區(qū)域。H框中的符號(hào)是一些小圓圈。用以表示木質(zhì)部中的導(dǎo)管(群)。I框中的符號(hào)是一些平行的斜線,用以表示厚角組織。也可表示柵欄組織。J框中的符號(hào)表示葉片下表皮上的氣孔。K框中的符號(hào)是單線構(gòu)成的環(huán),可隨需要而會(huì)成圓形或其它的環(huán)。用以表示子房壁。L框中的符號(hào)表示有珠柄的胚珠、有種柄的種子或有花柄的花。若去掉符號(hào)中的直線,則剩下的部分(即小圓圈)代表無珠柄的胚珠、無種柄的種子或無花柄的花。(4)圖的注解:組織圖的注解方法同藥材外形圖。粉末的注解,是在靠近各類細(xì)
13、胞圖的附近標(biāo)上番號(hào),圖下正中注明圖的名稱及放大的倍數(shù),再下面按圖中的番號(hào)順序注明每類特征的名稱,每個(gè)番號(hào)的右下方用縮寫符號(hào)“.表示?!彼?、常用的顯微制片方法(一)粉末的制備及粉末制片1粉末的制備選擇具有代表性的樣品適量(10g20g),用粉碎器(沖窩、鐵碾等)粉碎,使之全部樣品通過四至五號(hào)篩,成藥則應(yīng)通過六號(hào)篩,裝于瓶中備用。注:如有較多的組織(如纖維等)不能過篩,而作殘?jiān)鼟伻?,就?huì)影響該藥材的特征和檢出,造成結(jié)果判斷的困難。2粉末制片(1)臨時(shí)制片一般制片即以甘油醋酸試液、水或稀甘油作為濕潤劑,與粉末混合后裝片。方法:于載玻片上滴加濕潤劑12滴,用解剖針挑取粉末少許與濕潤劑混合均勻。然后將蓋
14、玻片一側(cè)的邊沿輕輕壓在粉末旁載玻片上,慢慢放下,盡量避免氣泡的產(chǎn)生。若濕潤劑未充滿蓋玻片,可在一側(cè)滴加少量濕潤劑,使之充滿蓋玻片;若濕潤劑過多而溢于蓋玻片外,則用濾紙屑從側(cè)面將過多的濕潤劑吸去,保持制片清潔,再置顯微鏡下觀察。凡含淀粉粒的粉末進(jìn)行鑒定時(shí),必須先按此法進(jìn)行。特殊處理制片A若粉末中含有大量淀粉、葉綠體、油脂及色素時(shí),用一般制片方法不易清晰地觀察細(xì)胞組織,則可用清潔劑處理制片。最常用的清潔劑為水合氯醛溶液,除能溶解上述物質(zhì)外,還能使萎縮細(xì)胞壁膨脹。方法:取水合氯醛溶液12滴于載玻片中央,再挑取粉末少許,混合后在火焰上來回加熱,并以解剖針攪拌,補(bǔ)充23次水合氯醛溶液(切勿使溶液蒸干),
15、然后將處理的粉末集中一處,以稀甘油12滴混合后蓋上蓋玻片,用濾紙屑清潔蓋玻片周圍多余藥液,再置鏡下觀察。B若粉末色澤太暗,不易清楚觀察,亦可將粉末先用漂白劑處理。常用漂白劑為過氧化氫、漂白粉或碳酸鈣溶液(合金氏溶液)浸漬以后,以沸水及冷水洗滌(離心分離)后,再挑取少許,按一般制片法裝片觀察。C粉末油脂太多,可先放在兩層濾紙中壓去部分油脂后再以水合氯醛處理,或直接以脂溶媒氯仿浸漬,提出油指后再進(jìn)行制片觀察。D若粉末纖維過多,細(xì)胞彼此不易分離,則用5%氫氧化鉀液浸漬若干小時(shí)或水浴上加熱浸漬,使組織崩解后再進(jìn)行制片觀察。(2)永久制片 將粉末浸入10%威尼斯松節(jié)油醇液中,置于干燥器材內(nèi),待威尼斯松節(jié)
16、油呈稠厚狀態(tài)時(shí),加可取混懸液滴在載玻片上,加蓋玻片封藏,并于蓋玻片四周封加拿大樹膠即成。 將粉末置于30%甘油醇液中,放干燥器中,待粉末被透化,甘油變稠,用解剖針挑取粉末置于載玻片上,加一滴甘油明膠封片,蓋玻片四周以加拿大樹膠涂封。 將粉末放在載玻片上,先用無水乙醇充分濕潤,瀝去無水乙醇,加二甲苯1滴,使其充分混勻,瀝去二甲苯,如粉末已透明,則加加拿大樹膠的二甲苯溶液1滴,然后按前法加蓋玻片。樹膠的量應(yīng)適當(dāng),制好的標(biāo)本應(yīng)在溫暖無塵處放置,待其中的二甲苯揮發(fā),樹膠硬固后,方可使用。(二)徒手切片這是一種最基本也是最常用的切片方法,不但操作簡單迅速,而且制成的切片還可以保持其細(xì)胞和內(nèi)含物的固有形態(tài)
17、,便于進(jìn)行各種顯微化學(xué)反應(yīng)。中藥鑒定工作者對(duì)此必須養(yǎng)成熟悉的操作技巧。1材料的制備:藥材上如附有泥沙雜質(zhì),應(yīng)先刷除干凈,以免切片時(shí)損壞刀口。粗大或長形的材料應(yīng)先切成適當(dāng)大小的塊或短段,一般以寬不超過1cm,長不超過3cm為宜,較堅(jiān)硬的材料則須先使其軟化才能切片。簡便的軟化方法是在玻質(zhì)干燥器中不放干燥劑而放入含0.5%苯酚的水,把材料放在小玻器中,然后放在干燥器的隔板上,蓋緊。一般材料經(jīng)過1224小時(shí)后可吸濕軟化,供切片用,如仍然過硬,則可放入水中浸軟或煮軟,特別堅(jiān)硬的材料可入壓力鍋煮軟(120)。過于柔軟的材料不便夾持切片,可將其浸入7075%乙醇中,約20分鐘后即可變得較硬。注意:需要觀察切
18、片中糊粉粒、粘液、菊糖等物質(zhì)的材料,在軟化、切片、裝片等過程中均不可與水直接接觸,以免溶解;需要觀察揮發(fā)油、樹脂等的材料,則不可與高濃度乙醇或其他有機(jī)溶劑接觸。柔軟而薄的材料,如葉片、花瓣等以及細(xì)長的莖或根等,不便直接手持切片的,可用接骨木、通草或向日葵、玉蜀黍等的莖髓剖成兩半夾著切。細(xì)小的種子或果實(shí),既不能手持也不能用木髓夾著切的,可用軟木塞或白橡皮一塊,在一端切一窄縫,將材料嵌入其中切片;如仍不行,則可用甘油樹膠將材料粘接在軟木塞一端,或取一小方塊石蠟,用燒紅的解剖針在石蠟塊的一端燙開一小孔,立即將材料放入孔中,冷后凝固即可供切片用。2徒手切片刀:徒手切片刀最好是刀刃一面平,一面凹的特種有
19、柄剃刀,或用比較堅(jiān)固的保安剃胡刀片。3切片方法:用左手拇指、食指夾持材料,并用中指托著,使材料略高出食、拇二指,肘關(guān)節(jié)靠在桌沿,以避免手臂及手腕的搖動(dòng),并使材料的切面保持水平。右手執(zhí)刀片,刀口向內(nèi)并使刀刃與材料的切面平行,移動(dòng)右臂使刀鋒自左前方向右后方切削,即可得薄片。在切片時(shí),材料的切面和刀刃上必須經(jīng)常加水(較堅(jiān)實(shí)的材料)或50%乙醇(較柔軟或含粘液的材料)保持濕潤,以防止材料的干燥收縮和避免切出的薄片粘在刀上,不易取下,切出的薄片用筆輕輕從刀上拂下,放在盛有蒸餾水或50%乙醇的培養(yǎng)皿中,剔除木髓等夾持材料及過厚的切片,即得。圖5徒手切片的持刀方式4.裝片:徒手切片一般多不然色,直接封藏在適
20、宜的試劑中,如水合氯醛液、稀甘油或顯微化學(xué)試劑等。取材方法是毛筆選取上述已切好的完整、清晰的薄片,放在清潔的載玻片上,加上所需試劑,蓋上蓋玻片,即可觀察。如果制成半永久性標(biāo)本片,可用稀甘油洗去水合氯醛液,然后封藏在熔化了的甘油明膠中。(三)石蠟切片見藥用植物學(xué)教材實(shí)驗(yàn)部分。(四)表面制片表面制片主要是觀察表皮細(xì)胞的形狀、著毛情況、氣孔的類型和數(shù)目以及角質(zhì)層的特征等,一般多用于葉的上下表皮及草質(zhì)莖的表皮。1 .鮮植物標(biāo)本:用解剖剪刀剪下所需的制片部位,如葉片,應(yīng)從葉基或柄部剪下,過大的葉片應(yīng)在規(guī)定的觀察范圍剪下一個(gè)方塊(5X5cm或4Mcm),用清水沖洗一次,再泡在30%得乙醇溶液中,以防腐。2
21、 .干藥材樣品:如荊芥葉、枇杷葉、益母草莖、陳皮等,在剝離前應(yīng)經(jīng)過軟化的過程,先用冷水浸,再用溫水浸,較硬的材料(如枳殼類),還應(yīng)泡在50%甘油酒精中,經(jīng)35日,方能剝離制片。剝離制片的方法:將已準(zhǔn)備好的材料取出,放置于干凈的分割木板或玻板上,認(rèn)清上、下表皮,再用刀片輕輕地在表面上劃一刀,不能劃斷葉片,再用小銀子撕取表皮。有時(shí),表皮不易與葉肉組織分離開來,應(yīng)借助刀片,一邊撕剝,一邊切割(平切),取下一塊(0.5:0.5cm)即可,速置于干凈的載玻片上,滴加一滴稀甘油,封片,即可觀察。如需透化,可滴加水合氯醛液,微微加熱,在滴加稀甘油封片,觀察。(五)解離組織制片解離組織法在顯微鑒定中,對(duì)于觀察
22、木化、栓化及角質(zhì)化的組織是必不可少的,特別常用在細(xì)胞、纖維、導(dǎo)管、管胞的單個(gè)細(xì)胞形狀的觀察以及角質(zhì)化表皮的制片觀察。解離是用化學(xué)試劑使組織中各細(xì)胞之間的胞間層溶解,達(dá)到細(xì)胞分離。對(duì)于不同性質(zhì)的藥材所采用的方法不同。如果藥材的薄壁組織占極大部分,木化組織很少或分散存在,可用氫氧化鉀法;如薄壁組織較少,木化組織較多或集合成較大的群束,須用硝鉻酸法或氯酸鉀法。在進(jìn)行組織解離前,應(yīng)將藥材切成不粗于火柴梗的條狀或片狀。1氫氧化鉀法:將少量材料置于試管中,加5%氫氧化鉀溶液適量(25ml),在沸騰的水浴中加熱,至用玻璃棒擠壓材料能離散為止(一般需要30分鐘),傾去堿液,用清水洗滌35次,取少許在載玻片上,
23、用解剖針?biāo)洪_,用稀甘油封片觀察。2硝鉻酸法:將材料放入小試管中,加入20%硝酸與20%鉻酸的等量混合液適量,以淹沒材料為止,放置20分鐘,用玻璃棒擠壓材料能離散為止。傾去酸液,用清水洗滌35次,取少許在載玻片上,用解剖針?biāo)洪_,用稀甘油封片觀察。(經(jīng)此法解離的木化細(xì)胞壁不再顯木化反應(yīng))3.氯酸鉀法:將材料置于試管中,加50%(V/V)硝酸以淹沒材料為度,投入相當(dāng)于材料體積量的氯酸鉀粉末,并在小火上或沸水浴中加熱,待產(chǎn)生的氣泡平息后,立即再投入少量氯酸鉀,以保持氣泡穩(wěn)定發(fā)生,至用玻璃棒擠壓材料能離散為止,余同上法。五、藥用植物學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告的基本要求(一)實(shí)驗(yàn)次數(shù)及名稱(二)實(shí)驗(yàn)材料的來源(寫出品種的
24、學(xué)名)(三)內(nèi)容:(根據(jù)所做實(shí)驗(yàn),選擇如下內(nèi)容)1植物形態(tài):主要鑒別特征或?qū)Ρ戎饕b別特征,文字要精簡,重點(diǎn)要突出。2性狀:注意描述的次序,歸納要點(diǎn)同上。3組織:注意有外到內(nèi)的觀察和描述,各部分的比例、結(jié)構(gòu)特征及內(nèi)含物的情況等。4粉末:首先應(yīng)觀察紀(jì)錄粉末顏色和氣味,有的還需注意質(zhì)地。顯微鏡下應(yīng)注意各組分的特征,包括形狀、顏色、大小、多少等,并多以繪圖表示。注:實(shí)驗(yàn)報(bào)告紙上的注意事項(xiàng)1文圖必須字跡清楚,布局合理;2保持紙上整潔,不得亂涂亂畫;3圖文均用鉛筆。實(shí)驗(yàn)一顯微鏡的構(gòu)造和使用、植物細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和各部分性能,學(xué)習(xí)和掌握顯微鏡的使用方法。2學(xué)習(xí)生活細(xì)胞觀察
25、方法,掌握植物細(xì)胞基本結(jié)構(gòu),了解質(zhì)體類型及特點(diǎn)。3學(xué)習(xí)臨時(shí)制片方法(斯取法、刮取法)和生物繪圖方法。二、實(shí)驗(yàn)器具與試劑光學(xué)顯微鏡、載玻片、蓋玻片、尖頭鑷子、解剖針、刀片、剪刀、吸水紙、擦鏡紙、紗布?jí)K、吸水紙、蒸儲(chǔ)水、稀碘液、蘇丹田、水合氯醛、稀甘油、20須糖液。三、實(shí)驗(yàn)材料洋蔥鱗葉表皮細(xì)胞制片、新鮮洋蔥、新鮮女貞葉、新鮮綠辣椒、新鮮紅辣椒、番茄、蘿卜。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(一)普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡是研究植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)、組織特征和器官構(gòu)造的重要的和不可替代的儀器。顯微鏡的種類繁多,可分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。電子顯微鏡結(jié)構(gòu)相對(duì)復(fù)雜,光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)較為簡單,基本結(jié)構(gòu)均可分為機(jī)械部分和光學(xué)系統(tǒng)部
26、分。1機(jī)械部分:顯微鏡機(jī)械部分是由精密而牢固的零件組成,主要包括鏡座、鏡臂、載物臺(tái)、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器和調(diào)焦裝置等。(1)鏡座:是顯微鏡的基座,用以支持鏡體平衡,其上裝有反光鏡或照明光源。(2)鏡柱:是鏡座上面直立的短柱,連接、支持鏡臂及以上的部分。(3)鏡臂:彎曲如臂,上接鏡筒、下接鏡柱,支持載物臺(tái)、聚光器和調(diào)焦裝置。是取放顯微鏡時(shí)手握的部位。直筒顯微鏡鏡臂和鏡柱連接處有活動(dòng)關(guān)節(jié),可使顯微鏡在一定范圍內(nèi)后傾,一般不超過30。(4)鏡筒:一般長160mnrr170mm其上端放置目鏡,下端與物鏡轉(zhuǎn)換器相連。雙筒斜式的鏡筒,兩鏡筒距離可以根據(jù)兩眼距離及視力來調(diào)節(jié)。(5)物鏡轉(zhuǎn)換器:是固著在鏡筒下端的
27、圓盤,其上裝有不同倍數(shù)的物鏡??梢宰笥易杂赊D(zhuǎn)動(dòng),便于更換物鏡。(6)載物臺(tái):放置切片的平臺(tái),中央有一個(gè)通光孔,旁邊裝有固定玻片的壓夾或標(biāo)本移動(dòng)器。有的顯微鏡載物臺(tái)下裝有聚光鏡。(7)調(diào)焦裝置:鏡臂兩側(cè)有粗、細(xì)調(diào)焦輪各一對(duì),旋轉(zhuǎn)時(shí)可使鏡筒上升或下降,以便得到清晰物像,即調(diào)焦。大的一對(duì)是粗調(diào),每旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒升降10mm,察的目標(biāo),并將其移至視野中央,然后轉(zhuǎn)高倍鏡至工作位置。高倍鏡下視野變暗用于低倍物鏡觀察;小的一對(duì)是細(xì)調(diào),每旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒升降0.1mm,用于高倍物鏡觀察。使用時(shí),必須先用低倍鏡、后用高倍鏡。2光學(xué)部分:由成像系統(tǒng)和照明系統(tǒng)組成。前者包括物鏡和目鏡,后者包括反光鏡(或內(nèi)置光源)
28、、聚光器。(1)物鏡:物鏡是決定顯微鏡性能(如分辨率)的最重要部件。它將標(biāo)本第一次放大成倒像。物鏡放大倍數(shù)一般低倍物鏡有10X、4X,高倍物鏡為40X,而油鏡為100X。使用油鏡時(shí),玻片與物鏡之間需加入折射率大于1的香柏油作為介質(zhì)。(在物鏡上標(biāo)有“40/0.65160/0.17”字樣。40表示物鏡放大倍數(shù)。0.65表示鏡口率,其數(shù)值越大工作距離越小,分辨能力越高。分辨率是指顯微鏡能分辨兩點(diǎn)之間最小的距離。160表示鏡筒的長度。0.17表示要求蓋玻片的厚度。)(2)目鏡:目鏡的作用是將物鏡放大所成的像進(jìn)一步放大,放大倍數(shù)有5X、10X、15X等。目鏡內(nèi)可安裝“指針”,也可安裝測(cè)微尺。(3)聚光器
29、:由聚光鏡和彩虹光圈(可變光欄)組成。聚光鏡可以使光匯集成束,增強(qiáng)被檢物體的照明。彩虹光圈通過撥動(dòng)其操作桿,可使光圈擴(kuò)大或縮小,借以調(diào)節(jié)通光量。有的聚光器下方還有一個(gè)濾光片托架,根據(jù)鏡檢需要可放置濾光片。構(gòu)造簡單的顯微鏡無聚光器,僅有光圈盤,其上有若干個(gè)大小不同的圓孔,使用時(shí)選擇適當(dāng)?shù)膱A孔對(duì)準(zhǔn)通光孔。( 4) 反光鏡:反光鏡的作用是把光源投射來的光線向聚光鏡反射。反光鏡有平、凹兩面,平面鏡反光,凹面鏡兼有反光和聚光的作用。一般前者在光線充足時(shí)使用,后者在光線不足時(shí)使用。裝有內(nèi)置光源的顯微鏡,只要打開電源開關(guān),使用光亮調(diào)節(jié)器即可。(二)普通光學(xué)顯微鏡的使用1取放:拿取顯微鏡時(shí),應(yīng)一只手握住鏡臂,
30、另一只手平托鏡座。將顯微鏡放置在座位桌子左側(cè)距桌邊510cm處,以便騰出右側(cè)位置進(jìn)行觀察記錄或繪圖。裝配好適當(dāng)?shù)哪跨R或否。2對(duì)光:對(duì)光時(shí),先將低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔,用左眼或雙眼觀察目鏡。然后,調(diào)節(jié)反光鏡或打開內(nèi)置光源并調(diào)節(jié)光強(qiáng),使鏡下視野內(nèi)的光線明亮、均勻又不刺眼。3低倍鏡使用:將玻片標(biāo)本放置在載物臺(tái)上固定好,使觀察材料一定正對(duì)著通光孔中心。轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦輪下降物鏡距玻片5mmt,接著用左眼(或雙眼)注視鏡筒,再慢慢用粗調(diào)焦輪上升物鏡,直到看見清晰的物像為止。4高倍鏡使用:由于高倍鏡視野范圍更小,所以使用前應(yīng)在低倍鏡下選好欲觀且物像不清晰時(shí),可調(diào)節(jié)光亮度和細(xì)調(diào)焦輪,不得使用粗調(diào)。由于高倍鏡使用時(shí)與玻
31、片之間距離很近,因此,操作時(shí)要特別小心,以防鏡頭碰擊玻片。5油鏡使用:在高倍鏡下將要觀察的部分移至視野中央,上升鏡筒約1.5cm,然后轉(zhuǎn)油鏡至工作位置。在蓋玻片要觀察的位置上滴一滴香柏油,慢慢下降鏡筒,使之與油滴接觸,然后慢慢調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)焦輪上升鏡筒到物像清晰。若發(fā)現(xiàn)香柏油液滴與因物鏡分離,應(yīng)重新下降鏡筒至與油滴接觸,然后細(xì)調(diào)。油鏡工作距離非常小(約為0.2mm,所以這步操作要特別小心,防止壓碎玻片。6調(diào)換玻片:觀察時(shí)如需調(diào)換玻片,要將高倍鏡換成低倍鏡,取下原玻片,換上新玻片,重新從低倍鏡開始觀察。7使用后整理:觀察完畢后,上升鏡筒,取下玻片,將物鏡轉(zhuǎn)離通光孔呈非工作狀態(tài),放上擦鏡布,按原樣收好顯
32、微鏡。8使用注意事項(xiàng): 顯微鏡是精密儀器,使用時(shí)一定嚴(yán)格遵守操作規(guī)則,不許隨意拆修。 隨時(shí)保持顯微鏡清潔。觀察臨時(shí)裝片時(shí),一定要將蓋玻片四周溢出的水或其他液體用吸水紙吸干凈,以免污染鏡頭。已被污染的鏡頭要用鏡頭紙擦試。 觀察時(shí),坐姿要端正,雙目同時(shí)張開,切勿睜一眼、閉一眼或用手遮擋一只眼。 觀察玻片時(shí),一定要按先低倍、后高倍物鏡順序使用。細(xì)調(diào)焦輪是在觀察到物像而不夠清晰時(shí)使用,切忌沿同一方向不停地轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)焦輪。(三)細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)觀察1植物細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)取洋蔥鱗葉表皮細(xì)胞永久制片或用新鮮洋蔥材料撕取表皮制臨時(shí)裝片觀察,可見表皮為一層細(xì)胞,其細(xì)胞多為近長方形,選擇形狀較規(guī)則、結(jié)構(gòu)清晰的細(xì)胞移至高倍鏡
33、下觀察,可分辨細(xì)胞壁、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核結(jié)構(gòu)。由于大液泡的形成,細(xì)胞核位于一側(cè),高倍鏡下還可看見核仁。通過調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)焦輪可使細(xì)胞的不同層次依次成像,加深對(duì)細(xì)胞立體結(jié)構(gòu)的理解。加水合氯醛,加熱透化,再加稀甘油。鏡下觀察細(xì)胞變化。細(xì)胞壁較透明,細(xì)胞質(zhì)無色均勻,細(xì)胞核扁球形,仔細(xì)觀察可見其內(nèi)13個(gè)發(fā)亮的核仁。從一側(cè)滴加稀碘液,細(xì)胞質(zhì)被染成淺黃色,細(xì)胞核被染成深黃色從一側(cè)滴加20%蔗糖液,放置20分鐘后觀察質(zhì)壁分離現(xiàn)象。圖2洋蔥嶙葉表皮細(xì)胞的構(gòu)造J期胞質(zhì)2,液泡3.細(xì)胞壁2.質(zhì)體(1)葉綠體:取新鮮女貞葉,撥取葉肉組織制成臨時(shí)裝片觀察,其細(xì)胞為狹長形,內(nèi)含多數(shù)橢圓形綠色顆粒,即為葉綠體。高倍鏡下可觀察到細(xì)胞
34、內(nèi)葉綠體接近細(xì)胞壁并在循一定方向環(huán)形流動(dòng),這是葉綠體隨細(xì)胞質(zhì)環(huán)流的結(jié)果。(2)有色體:用銀子取少量新鮮紅辣椒靠近果皮的果肉細(xì)胞制成臨時(shí)裝片觀察,高倍鏡下可觀察到細(xì)胞呈近圓形,內(nèi)含許多、細(xì)小、呈橘紅色的不規(guī)則顆粒,為有色體。另取番茄果肉細(xì)胞制成臨時(shí)裝片觀察桔紅色的顆粒,為有色體(3)白色體:再用銀子取少量新鮮蘿卜制成臨時(shí)裝片觀察,高倍鏡下細(xì)胞也呈近圓形,個(gè)別細(xì)胞內(nèi)含許多白色顆粒,即為白色體。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1 .繪12個(gè)洋蔥鱗葉表皮細(xì)胞圖并引線注明各部分名稱。2 .繪細(xì)胞中葉綠體、有色體形態(tài)圖,并引線注明。3、敘述典型植物細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)的組成及各部分主要功能?4、質(zhì)體有哪幾種類型?它們的結(jié)構(gòu)和功能
35、之間有何關(guān)系?實(shí)驗(yàn)二顯微鏡的構(gòu)造和使用、植物細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?了解普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造和各部分性能,學(xué)習(xí)和掌握顯微鏡的使用方法。2學(xué)習(xí)生活細(xì)胞觀察方法,掌握植物細(xì)胞基本結(jié)構(gòu),了解質(zhì)體類型及特點(diǎn)。3學(xué)習(xí)臨時(shí)制片方法(斯取法、刮取法)和生物繪圖方法。二、實(shí)驗(yàn)器具與試劑光學(xué)顯微鏡、載玻片、蓋玻片、尖頭鑷子、解剖針、刀片、剪刀、吸水紙、擦鏡紙、紗布?jí)K、吸水紙、蒸儲(chǔ)水、稀碘液、蘇丹田、水合氯醛、稀甘油、20須糖液。三、實(shí)驗(yàn)材料洋蔥鱗葉表皮細(xì)胞制片、新鮮洋蔥、新鮮女貞葉、新鮮綠辣椒、新鮮紅辣椒、番茄、蘿卜。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容(一)普通光學(xué)顯微鏡的構(gòu)造顯微鏡是研究植物細(xì)胞結(jié)構(gòu)、組織特征和器官構(gòu)造的重要的和
36、不可替代的儀器。顯微鏡的種類繁多,可分為光學(xué)顯微鏡和電子顯微鏡兩大類。電子顯微鏡結(jié)構(gòu)相對(duì)復(fù)雜,光學(xué)顯微鏡結(jié)構(gòu)較為簡單,基本結(jié)構(gòu)均可分為機(jī)械部分和光學(xué)系統(tǒng)部分。1機(jī)械部分:顯微鏡機(jī)械部分是由精密而牢固的零件組成,主要包括鏡座、鏡臂、載物臺(tái)、鏡筒、物鏡轉(zhuǎn)換器和調(diào)焦裝置等。(1)鏡座:是顯微鏡的基座,用以支持鏡體平衡,其上裝有反光鏡或照明光源。(2)鏡柱:是鏡座上面直立的短柱,連接、支持鏡臂及以上的部分。(3)鏡臂:彎曲如臂,上接鏡筒、下接鏡柱,支持載物臺(tái)、聚光器和調(diào)焦裝置。是取放顯微鏡時(shí)手握的部位。直筒顯微鏡鏡臂和鏡柱連接處有活動(dòng)關(guān)節(jié),可使顯微鏡在一定范圍內(nèi)后傾,一般不超過30。(4)鏡筒:一般長
37、160mnrr170mm其上端放置目鏡,下端與物鏡轉(zhuǎn)換器相連。雙筒斜式的鏡筒,兩鏡筒距離可以根據(jù)兩眼距離及視力來調(diào)節(jié)。(5)物鏡轉(zhuǎn)換器:是固著在鏡筒下端的圓盤,其上裝有不同倍數(shù)的物鏡。可以左右自由轉(zhuǎn)動(dòng),便于更換物鏡。(6)載物臺(tái):放置切片的平臺(tái),中央有一個(gè)通光孔,旁邊裝有固定玻片的壓夾或標(biāo)本移動(dòng)器。有的顯微鏡載物臺(tái)下裝有聚光鏡。(7)調(diào)焦裝置:鏡臂兩側(cè)有粗、細(xì)調(diào)焦輪各一對(duì),旋轉(zhuǎn)時(shí)可使鏡筒上升或下降,以便得到清晰物像,即調(diào)焦。大的一對(duì)是粗調(diào),每旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒升降10mm,察的目標(biāo),并將其移至視野中央,然后轉(zhuǎn)高倍鏡至工作位置。高倍鏡下視野變暗用于低倍物鏡觀察;小的一對(duì)是細(xì)調(diào),每旋轉(zhuǎn)一周可使鏡筒升
38、降0.1mm,用于高倍物鏡觀察。使用時(shí),必須先用低倍鏡、后用高倍鏡。2光學(xué)部分:由成像系統(tǒng)和照明系統(tǒng)組成。前者包括物鏡和目鏡,后者包括反光鏡(或內(nèi)置光源)、聚光器。(1)物鏡:物鏡是決定顯微鏡性能(如分辨率)的最重要部件。它將標(biāo)本第一次放大成倒像。物鏡放大倍數(shù)一般低倍物鏡有10X、4X,高倍物鏡為40X,而油鏡為100X。使用油鏡時(shí),玻片與物鏡之間需加入折射率大于1的香柏油作為介質(zhì)。(在物鏡上標(biāo)有“40/0.65160/0.17”字樣。40表示物鏡放大倍數(shù)。0.65表示鏡口率,其數(shù)值越大工作距離越小,分辨能力越高。分辨率是指顯微鏡能分辨兩點(diǎn)之間最小的距離。160表示鏡筒的長度。0.17表示要求
39、蓋玻片的厚度。)(2)目鏡:目鏡的作用是將物鏡放大所成的像進(jìn)一步放大,放大倍數(shù)有5X、10X、15X等。目鏡內(nèi)可安裝“指針”,也可安裝測(cè)微尺。(3)聚光器:由聚光鏡和彩虹光圈(可變光欄)組成。聚光鏡可以使光匯集成束,增強(qiáng)被檢物體的照明。彩虹光圈通過撥動(dòng)其操作桿,可使光圈擴(kuò)大或縮小,借以調(diào)節(jié)通光量。有的聚光器下方還有一個(gè)濾光片托架,根據(jù)鏡檢需要可放置濾光片。構(gòu)造簡單的顯微鏡無聚光器,僅有光圈盤,其上有若干個(gè)大小不同的圓孔,使用時(shí)選擇適當(dāng)?shù)膱A孔對(duì)準(zhǔn)通光孔。( 4) 反光鏡:反光鏡的作用是把光源投射來的光線向聚光鏡反射。反光鏡有平、凹兩面,平面鏡反光,凹面鏡兼有反光和聚光的作用。一般前者在光線充足時(shí)
40、使用,后者在光線不足時(shí)使用。裝有內(nèi)置光源的顯微鏡,只要打開電源開關(guān),使用光亮調(diào)節(jié)器即可。(二)普通光學(xué)顯微鏡的使用1取放:拿取顯微鏡時(shí),應(yīng)一只手握住鏡臂,另一只手平托鏡座。將顯微鏡放置在座位桌子左側(cè)距桌邊510cm處,以便騰出右側(cè)位置進(jìn)行觀察記錄或繪圖。裝配好適當(dāng)?shù)哪跨R或否。2對(duì)光:對(duì)光時(shí),先將低倍物鏡對(duì)準(zhǔn)通光孔,用左眼或雙眼觀察目鏡。然后,調(diào)節(jié)反光鏡或打開內(nèi)置光源并調(diào)節(jié)光強(qiáng),使鏡下視野內(nèi)的光線明亮、均勻又不刺眼。3低倍鏡使用:將玻片標(biāo)本放置在載物臺(tái)上固定好,使觀察材料一定正對(duì)著通光孔中心。轉(zhuǎn)動(dòng)粗調(diào)焦輪下降物鏡距玻片5mmt,接著用左眼(或雙眼)注視鏡筒,再慢慢用粗調(diào)焦輪上升物鏡,直到看見清晰
41、的物像為止。4高倍鏡使用:由于高倍鏡視野范圍更小,所以使用前應(yīng)在低倍鏡下選好欲觀且物像不清晰時(shí),可調(diào)節(jié)光亮度和細(xì)調(diào)焦輪,不得使用粗調(diào)。由于高倍鏡使用時(shí)與玻片之間距離很近,因此,操作時(shí)要特別小心,以防鏡頭碰擊玻片。5油鏡使用:在高倍鏡下將要觀察的部分移至視野中央,上升鏡筒約1.5cm,然后轉(zhuǎn)油鏡至工作位置。在蓋玻片要觀察的位置上滴一滴香柏油,慢慢下降鏡筒,使之與油滴接觸,然后慢慢調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)焦輪上升鏡筒到物像清晰。若發(fā)現(xiàn)香柏油液滴與因物鏡分離,應(yīng)重新下降鏡筒至與油滴接觸,然后細(xì)調(diào)。油鏡工作距離非常?。s為0.2mm,所以這步操作要特別小心,防止壓碎玻片。6調(diào)換玻片:觀察時(shí)如需調(diào)換玻片,要將高倍鏡換成
42、低倍鏡,取下原玻片,換上新玻片,重新從低倍鏡開始觀察。7使用后整理:觀察完畢后,上升鏡筒,取下玻片,將物鏡轉(zhuǎn)離通光孔呈非工作狀態(tài),放上擦鏡布,按原樣收好顯微鏡。8使用注意事項(xiàng): 顯微鏡是精密儀器,使用時(shí)一定嚴(yán)格遵守操作規(guī)則,不許隨意拆修。 隨時(shí)保持顯微鏡清潔。觀察臨時(shí)裝片時(shí),一定要將蓋玻片四周溢出的水或其他液體用吸水紙吸干凈,以免污染鏡頭。已被污染的鏡頭要用鏡頭紙擦試。 觀察時(shí),坐姿要端正,雙目同時(shí)張開,切勿睜一眼、閉一眼或用手遮擋一只眼。 觀察玻片時(shí),一定要按先低倍、后高倍物鏡順序使用。細(xì)調(diào)焦輪是在觀察到物像而不夠清晰時(shí)使用,切忌沿同一方向不停地轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)焦輪。(三)細(xì)胞基本結(jié)構(gòu)觀察1植物細(xì)胞
43、基本結(jié)構(gòu)取洋蔥鱗葉表皮細(xì)胞永久制片或用新鮮洋蔥材料撕取表皮制臨時(shí)裝片觀察,可見表皮為一層細(xì)胞,其細(xì)胞多為近長方形,選擇形狀較規(guī)則、結(jié)構(gòu)清晰的細(xì)胞移至高倍鏡下觀察,可分辨細(xì)胞壁、細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核結(jié)構(gòu)。由于大液泡的形成,細(xì)胞核位于一側(cè),高倍鏡下還可看見核仁。通過調(diào)節(jié)細(xì)調(diào)焦輪可使細(xì)胞的不同層次依次成像,加深對(duì)細(xì)胞立體結(jié)構(gòu)的理解。加水合氯醛,加熱透化,再加稀甘油。鏡下觀察細(xì)胞變化。細(xì)胞壁較透明,細(xì)胞質(zhì)無色均勻,細(xì)胞核扁球形,仔細(xì)觀察可見其內(nèi)13個(gè)發(fā)亮的核仁。從一側(cè)滴加稀碘液,細(xì)胞質(zhì)被染成淺黃色,細(xì)胞核被染成深黃色從一側(cè)滴加20%蔗糖液,放置20分鐘后觀察質(zhì)壁分離現(xiàn)象。圖2洋蔥嶙葉表皮細(xì)胞的構(gòu)造J期胞質(zhì)2
44、,液泡3.細(xì)胞壁2.質(zhì)體(1)葉綠體:取新鮮女貞葉,撥取葉肉組織制成臨時(shí)裝片觀察,其細(xì)胞為狹長形,內(nèi)含多數(shù)橢圓形綠色顆粒,即為葉綠體。高倍鏡下可觀察到細(xì)胞內(nèi)葉綠體接近細(xì)胞壁并在循一定方向環(huán)形流動(dòng),這是葉綠體隨細(xì)胞質(zhì)環(huán)流的結(jié)果。(2)有色體:用銀子取少量新鮮紅辣椒靠近果皮的果肉細(xì)胞制成臨時(shí)裝片觀察,高倍鏡下可觀察到細(xì)胞呈近圓形,內(nèi)含許多、細(xì)小、呈橘紅色的不規(guī)則顆粒,為有色體。另取番茄果肉細(xì)胞制成臨時(shí)裝片觀察桔紅色的顆粒,為有色體(3)白色體:再用銀子取少量新鮮蘿卜制成臨時(shí)裝片觀察,高倍鏡下細(xì)胞也呈近圓形,個(gè)別細(xì)胞內(nèi)含許多白色顆粒,即為白色體。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1 .繪12個(gè)洋蔥鱗葉表皮細(xì)胞圖并引線注明
45、各部分名稱。2 .繪細(xì)胞中葉綠體、有色體形態(tài)圖,并引線注明。3、敘述典型植物細(xì)胞的亞顯微結(jié)構(gòu)的組成及各部分主要功能?4、質(zhì)體有哪幾種類型?它們的結(jié)構(gòu)和功能之間有何關(guān)系?實(shí)驗(yàn)三植物細(xì)胞減數(shù)分裂一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶W(xué)習(xí)花粉母細(xì)胞涂抹制片技術(shù),觀察植物減數(shù)分裂各個(gè)時(shí)期染色體的變化特征。二、實(shí)驗(yàn)原理減數(shù)分裂是生物在性母細(xì)胞成熟時(shí)配子形成過程中發(fā)生的一種特殊的有絲分裂。它包括連續(xù)兩次的細(xì)胞分裂階段:第一次分裂為染色體數(shù)目的減數(shù)分裂,第二次分裂為染色體數(shù)目的等數(shù)分裂。兩次分裂可根據(jù)染色體變化特點(diǎn)各分為前期、中期、后期和末期,由于第一次分裂的前期較長,染色體變化比較復(fù)雜,故其前期又可分為五個(gè)時(shí)期。在減數(shù)分裂的整個(gè)過
46、程中,同源染色體之間發(fā)生聯(lián)會(huì)、交換和分離,非同源染色體之間進(jìn)行自由組合。最終分裂為染色體數(shù)目減半的四個(gè)子細(xì)胞,從而發(fā)育為雌性或雄性配子(n)。雌雄配子通過受精又結(jié)合成為合子,發(fā)育為新的個(gè)體,這樣又恢復(fù)了原有的染色體數(shù)目(2n)。由于不同雌雄配子染色體的重新組合,產(chǎn)生了大量的遺傳變異,有利于生物的適應(yīng)和進(jìn)化。生物的性母細(xì)胞成熟時(shí),減數(shù)分裂各時(shí)期染色體變化的特征簡述如下(以小麥為例如圖示):第一次分裂:前期I:可分為以下五個(gè)時(shí)期:細(xì)線期:核內(nèi)染色體呈細(xì)長線狀,互相纏繞,難以辨別成雙的染色體偶線期;同源染色體相互縱向靠攏配對(duì),稱為聯(lián)會(huì)。這樣聯(lián)會(huì)的一對(duì)同源染色體,稱為二價(jià)體。偶線期所表現(xiàn)的這一特征時(shí)間
47、很短,一般較難觀察到。粗線期:配對(duì)后的染色體逐漸縮短變粗,含有兩條姐妹染色單體,這樣一個(gè)二價(jià)體中就包含了四條染色單體,故又稱為四合體。在此期間各同源染色體的非姐妹染色單體間可能發(fā)生片段交換。雙線期:各對(duì)同源染色體開始分開,由于在粗線期非姐妹染色單體之間發(fā)生了交換,因而同源染色體在一定區(qū)段間出現(xiàn)交叉結(jié)。此期可清楚地觀察到交叉現(xiàn)象。終變期:染色體更為濃縮粗短,交叉結(jié)向二價(jià)體的兩端移動(dòng),核仁和核膜開始消失,此時(shí)各二價(jià)體分散在核內(nèi),適于計(jì)數(shù)染色體的數(shù)目。中期I:核仁和核膜消失,所有二價(jià)體排列在赤道板兩側(cè),細(xì)胞質(zhì)里出現(xiàn)紡錘體,每個(gè)二價(jià)體的兩條染色體的著絲點(diǎn)分別趨向紡錘體的兩極,此時(shí)最適于計(jì)數(shù)染色體的數(shù)目
48、和觀察各染色體的形態(tài)特征。后期l二價(jià)體中的一對(duì)同源染色體開始分開,在紡錘體的作用下分別向兩極移動(dòng),完成染色體數(shù)目的減半過程。此期,同源染色體的兩個(gè)成員必然分離,非同源染色體間的各個(gè)成員以同等機(jī)會(huì)隨機(jī)結(jié)合,分別移向兩極。注意此時(shí)染色體的著絲點(diǎn)尚未分裂,每條分裂,在赤道板處形成細(xì)胞板,成為二分體。第二次分裂:前期II:染色體又開始明顯縮短,而其包含的兩條染色單體分得很開,只是著絲點(diǎn)仍然沒有分裂。中期Il染色體整齊地排列在分裂細(xì)胞的赤道板上,出現(xiàn)紡錘絲。后期幾染色體的著絲點(diǎn)分裂為二,兩條姐妹染色單體在紡錘絲的牽引下分別移向兩極。末期II:染色體分到兩極后,又重新出現(xiàn)核仁和核膜,同時(shí)細(xì)胞質(zhì)分隔為二,從而使一個(gè)母細(xì)胞分裂成為四個(gè)子細(xì)胞,稱為四分體或四分孢子。每個(gè)子細(xì)胞內(nèi)只含有原來母細(xì)胞的半數(shù)的染色體(n)。減數(shù)分裂中染包體的行為變化與生物的遺傳變異密切相關(guān)。既然染色體是遺傳物質(zhì)的載體,因此染色體在減數(shù)分裂中的行為對(duì)遺傳物質(zhì)的分配和重組產(chǎn)生了重大影響。高等植物的性母細(xì)胞(2n)在形成雌雄配子(n)過程中必須通過減數(shù)分裂。由于植物花藥取材容易,操作和鑒定比較方便。故一般都取用花粉母細(xì)胞作為制片材料,在光學(xué)顯微
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