平菇對降血脂的作用

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上摘要：本實驗以平菇為原料，對其進行提取，得到多糖。之后進行動物實驗，首先造大鼠2型糖尿病模型，造模成功后，研究平菇多糖，對2型糖尿病大鼠血糖，TC，TG，HDL-c，LDL-c，胰島素，糖元儲備以及FFA的影響。結(jié)果表明，平菇多糖能明顯降低2型糖尿病大鼠的血糖；平菇多糖能改善2型糖尿病“三多一少”的癥狀；升高肝糖原、肌糖原儲備；降低血清中TG、LDL-c水平，改善2型糖尿病大鼠血脂代謝紊亂的情況；改善2型糖尿病大鼠的高胰島素水平，提高ISI 和 HOMA- 指數(shù)，降低 HOMA-IR 指數(shù)，改善胰島素抵抗；降低血清FFA含量。關(guān)鍵詞：平菇多糖，2型糖尿病;降血糖，降血

2、脂平菇(Pleurotus ostreatus)又名白平菇、側(cè)耳，屬擔子菌亞門，層菌綱，傘菌目，口磨科，是廣泛栽培的食用菌之一。平菇中含有大量碳水化合物,多糖是其主要活性物質(zhì),其對減少人體血清膽固醇、降低血壓等有明顯的效果1 。胰島素抵抗是指各種原因使胰島素促進葡萄糖攝取和利用的效率下降，機體代償性的分泌過多胰島素產(chǎn)生高胰島素血癥，以維持血糖的穩(wěn)定。胰島素抵抗易導致代謝綜合征和2型糖尿病。糖尿病有兩種類型，其中2型糖尿病病例居多。2型糖尿病的引發(fā)因素復雜，以血糖、血脂紊亂、胰島素抵抗、為主要病理特征2-4。磷酯酰肌醇3激酶(phosphoinositide-3-kinase，PI3K)家族，是

3、生長因子超家族信號傳導過程中的重要分子，可被多種細胞因子和理化因素激活，是一類特異性地催化磷酯酰肌醇 (phos-phatidylinositol，PI)3位羥基磷酸化，產(chǎn)生具有第二信使作用的肌醇脂物質(zhì)的激酶。絲/蘇氨酸激酶 （set-ine threonine kinase，AKT）通路主要負責由PI3K始動的生物信息的傳導，AKT處于這一通路的中心環(huán)節(jié)，它在細胞代謝、細胞周期調(diào)控、細胞生長凋亡等多種生物學過程中發(fā)揮著重要作用，與IR的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)5-6，近年來相關(guān)研究日漸增多。1 實驗藥品與儀器實驗用干平菇為新鮮采摘的平菇晾干后剪碎得到。Wistar大鼠18只，雄，體重180-260g

4、。檸檬酸，濃硫酸，無水乙醇，氯化鈉，甲醇，檸檬酸鈉， 1,2-丙二醇，甲醛，2,4-二硝基苯肼均為分析純，吐溫80為化學純。甘油三酯試劑盒，肝/肌糖元試劑盒，游離脂肪酸試劑盒，總膽固醇試劑盒，大鼠胰島素ELISA試劑盒，高密度脂蛋白試劑盒。HH-S型恒溫水浴鍋（江蘇省水浴化學科技有限公司）；GZX-GW2-BS高溫干燥箱（上海博泰實驗設(shè)備有限公司）；SHB-A循環(huán)水式真空泵（鄭州長城科技工貿(mào)有限公司）；RT-08多功能粉碎機（榮聰精密科技有限公司）；752型紫外可見分光光度計（上海精密科學儀器有限公司）；KQ118超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；FA2004電子分析天平（上海精細科技儀

5、器廠）；RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（上海亞榮生化儀器廠）。ELX800型酶標儀（美國伯騰儀器有限公司）；TDL-400型低溫冷凍離心機（金壇市白塔新寶儀器廠）；DW-86L338型超低溫冰箱（青島海爾特種電器有限公司）；NRY-200型全溫恒溫培養(yǎng)搖床（上海雙舜實業(yè)發(fā)展有限公司）；QL-866型漩渦混合器（海門市其林貝爾儀器有限公司）；TZB/湘0045-2012型安準血糖儀（三諾生物傳感股份有限公司）。1.2 實驗方法1.2.1 糖尿病大鼠模型的建立隨機從18只大鼠中取出6只作為空白組，自由飲食飲水。剩余的12只大鼠，每天給予脂肪乳，給藥時間為14天，第14天結(jié)束時，向12只大鼠注射鏈脲佐菌素（

6、STZ），給藥體積0.1mL/100g，72h后測量血糖值，血糖值大于11.1mmol/L，表明造模成功。1.2.2 糖尿病大鼠的分組及給藥將造模成功的12只大鼠，隨機分為兩組，即模型組和平菇組。灌胃給藥，給藥體積10mL/kg，給藥過程中，2型糖尿病大鼠繼續(xù)給予脂肪乳，每兩天一次，平菇組每天給予平菇多糖溶液，給藥體積10mL/kg，連續(xù)給藥4周。1.2.3 實驗過程記錄大鼠每天的飲食和飲水量，每周測量大鼠的體重，每周割尾取血，測量空腹血糖值。末次測定各組空腹血糖值后，3%戊巴比妥鈉30mg·kg-1麻醉，斷頭取血，并分離血清。采集肝臟，肌肉，胰腺，腎臟，一部分用10%甲醛固定，一部

7、分放進密封袋，用超低溫冰箱進行冷凍保存。1.2.3 藥理活性研究用采集的血清，測定大鼠胰島素含量，膽固醇，甘油三酯，高密度脂蛋白，低密度脂蛋白，游離脂肪酸含量；肝臟，肌肉測定糖元含量。1.2.5 平菇多糖抗2型糖尿病作用的初步機制將用10%甲醛固定的肝臟，肌肉，胰腺，腎臟，進行H-E染色，制備病理蠟塊。1.2.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計方法采用SPSS 統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)處理。實驗結(jié)果以均數(shù)±標準差，表示，Students t-test進行組間比較。差異為P <0.05有統(tǒng)計學意義。2 結(jié)果與分析2.1 平菇多糖對2型糖尿病大鼠體重的影響由表1可知，大鼠在經(jīng)過脂肪乳28天的喂食后，模型組和平菇

8、組的體重均升高；開始給藥之后，與模型組相比，平菇組大鼠體重逐漸升高（P<0.05或P<0.01）。表1 平菇多糖對大鼠體重的影響序號0W（g）1W（g）2W（g）3W（g）4W（g）空白組188.83±9.28190.83±5.85191.00±4.69193.17±7.41195.33±6.68模型組239.83±15.50*219.67±16.57*227.00±24.02*227.33±23.03*213.50±22.95平菇組231.50±13.94226.83&#

9、177;9.97245.33±14.43245.00±12.79253.33±15.17#2.2 平菇多糖對2型糖尿病大鼠血糖的影響由表2可知，與空白組相比，模型組大鼠血糖值，在0W，1W，2W，3W，4W，明顯升高（P<0.05或P<0.01），與模型組相比，平菇組大鼠的血糖值隨著給藥時間，明顯降低（P<0.05或P<0.01），表明平菇多糖可以改善大鼠高血糖的癥狀。表2 平菇多糖對大鼠血糖的影響序號0W(mmol·L-1)1W(mmol·L-1)2W(mmol·L-1)3W(mmol·L-1)4W

10、(mmol·L-1)空白組4.23±0.274.43±0.394.60±0.534.35±0.724.50±0.65模型組24.93±5.21*19.43±3.79*20.65±3.87*17.58±7.45*23.43±5.60*平菇組16.22±5.99#11.15±5.08#6.73±2.78#4.20±0.96#5.52±0.65#2.3 2型糖尿病大鼠飲水和飲食情況2.3.2.1飲食量由圖1可知，在第2周，用高脂飼料喂養(yǎng)模型組

11、和平菇組大鼠之后，與空白組相比，模型組和平菇組的飲食量在逐漸上升 ；在第4周，造大鼠2型糖尿病模型后，平菇組大鼠開始給藥，與模型組相比，飲食量在逐漸下降。2.3.2.2飲水量由圖2可知，在第2周，用高脂飼料喂養(yǎng)模型組和平菇組大鼠之后，與空白組相比，模型組和平菇組的飲水量在逐漸上升；在第4周，造大鼠2型糖尿病模型后，平菇組大鼠開始給藥，與模型組相比，飲水量在逐漸下降。2.4 平菇多糖對2型糖尿病大鼠糖元含量的影響由表3可知，與空白組相比，模型組肝糖元、肌糖元含量明顯減少（P<0.05或P<0.01）；與模型組相比，平菇組肝糖元、肌糖元含量明顯升高（P<0.05或P<0.0

12、1），表明平菇多糖可以提高大鼠肝糖元、肌糖元含量。2.5 平菇多糖對2型糖尿病大鼠血脂的影響由表4可知，與空白組比較，模型組甘油三酯、低密度脂蛋白含量均顯著升高（P<0.05 或 P<0.01），膽固醇、高密度脂蛋白含量明顯下降（P<0.05 或 P<0.01）；與模型組比較，平菇組甘油三酯、低密度脂蛋白含量均顯著降低（P<0.05 或 P<0.01），膽固醇、高密度脂蛋白含量明顯升高（P<0.05 或 P<0.01），表明POP可以調(diào)節(jié) T2DM大鼠的血脂代謝紊亂。2.6 平菇多糖對2型糖尿病大鼠胰島素水平及胰島素抵抗指數(shù)的影響2.6.1胰島素

13、水平如表5所示，與空白組相比，模型組胰島素水平明顯升高（P<0.05 或 P<0.01），與模型組相比，平菇組胰島素水平明顯下降（P<0.05 或 P<0.01），表明平菇多糖可以改善2型糖尿病大鼠胰島素水平。2.6.2胰島素抵抗指數(shù)如表5所示，與空白組相比，模型組homa-IR明顯升高（P<0.05 或 P<0.01），homa-和ISI明顯降低（P<0.05 或 P<0.01），與模型組相比，平菇組homa-IR明顯降低（P<0.05 或 P<0.01），homa-和ISI明顯升高（P<0.05 或 P<0.01），表

14、明平菇多糖可以改善2型糖尿病大鼠高血糖、高胰島素的狀態(tài)，增強組織對胰島素有效利用，改善胰島素抵抗。2.7 平菇多糖對2型糖尿病大鼠游離脂肪酸含量的影響由表6可知，與空白組相比，模型組游離脂肪酸含量明顯升高（P<0.05 或 P<0.01），與模型組相比，平菇組游離脂肪酸含量逐漸下降（P<0.05 ）。2.8 對2型糖尿病大鼠胰島細胞的影響空白對照組大鼠胰腺未見病理損傷改變。由胰腺腺泡構(gòu)成的腺小葉和分隔腺小葉的結(jié)締組織所組成，胰腺的神經(jīng)纖維、導管、血管、淋巴管等，均穿行于胰的結(jié)締組織內(nèi)，內(nèi)分泌部胰島與外分泌部胰腺小葉清晰可辨，胰島體積大，細胞核居中，胞漿均勻。與空白對照組相比，

15、模型對照組部分腺泡細胞見有脂肪組織增生，腺泡細胞呈空泡狀，腺泡細胞體積縮小，胞漿減少，核濃縮深染；胰島數(shù)目減少，胰島結(jié)構(gòu)失去完整性，胰島細胞分散，分布不均勻，胰島內(nèi)細胞數(shù)明顯減少。與模型對照組比較，平菇組部分腺泡細胞見有脂肪組織增生，內(nèi)分泌部胰島與外分泌部胰腺小葉清晰可辨。部分胰腺腺泡周圍有少量空泡，胰島體積大，細胞核居中，胞漿較均勻，胰島結(jié)構(gòu)趨于完整。提示POP能增加胰島內(nèi)細胞數(shù)目，對胰島的損傷有較好的改善作用。各組大鼠胰腺組織HE染色照片見圖3。平菇組模型組空白組 2.9 平菇多糖對肝臟組織中胰島素抵抗相關(guān)蛋白的影響與空白組比較，模型組肝臟 AKT 磷酸化水平降低，GSK3磷酸化水平增加；

16、與模型組比較，平菇組可增加小鼠肝臟 AKT 磷酸化，減少GSK3磷酸化水平，即通過激活 PI3K/AKT 信號轉(zhuǎn)導通路，減少GSK3對糖原生成的抑制作用，增加肝糖儲備，改善肝臟胰島素抵抗。2.11平菇多糖對肌肉組織中胰島素抵抗相關(guān)蛋白的影響與空白組比較，模型組肌肉AKT 磷酸化水平降低，GSK3磷酸化水平增加，GLUT4水平降低；與模型組比較，平菇組可明顯增加小鼠肝臟 AKT 磷酸化水平，減少GSK3磷酸化水平，增加GLUT4水平，即通過激活 PI3K/AKT 信號轉(zhuǎn)導通路，減少GSK3對糖原生成的抑制作用，增加GLUT4轉(zhuǎn)位，改善肌肉胰島素抵抗。3 實驗討論近年來國外學者提出的脂毒性理論認為

17、，脂代謝紊亂不單是糖尿病發(fā)生的結(jié)果，而是在糖尿病的發(fā)生、發(fā)展過程中一個相當重要的因素。血脂異常以TC、TG、LDL-c水平升高，且HDL-c水平降低為特征，控制血脂水平是防治糖尿病的一個重要環(huán)節(jié)。造模后，模型組甘油三酯、低密度脂蛋白含量與空白組比較，明顯升高；膽固醇、高密度脂蛋白含量明顯下降；平菇多糖給藥組與模型組比較，膽固醇、高密度脂蛋白含量明顯升高，甘油三酯、低密度脂蛋白含量均顯著降低，提示實驗性糖尿病大鼠存在著脂代謝異常，說明平菇及其親脂性部分、多糖部分對實驗性糖尿病大鼠的血脂均有一定的調(diào)節(jié)作用。隨著對糖代謝異常研究的深入，越來越多的研究表明糖代謝異常經(jīng)常合并脂代謝異常，不能將糖代謝異常孤立起來。而游離脂肪酸（FFA）正是一種可以將糖、脂代謝異常聯(lián)系起來的因素。通過灌胃給藥平菇多糖組，發(fā)現(xiàn)平菇多糖組能顯著降低實驗性糖尿病大鼠血清FFA水平，改善糖尿病大鼠脂代謝紊亂。PI3K為PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導途徑的關(guān)鍵因子，PI3K可促進AKT的活化，進而能促進GLUT4轉(zhuǎn)位到細胞膜上，攝取葡萄糖。盡管PI3K在GLUT4轉(zhuǎn)位過程中的作用極為關(guān)鍵，但在某些情況下，如高血糖使得大鼠肝臟中InsR、IRS酪氨酸磷酸化水平，以及PI3K激酶活性均顯著高于正常，但其下游AKT的磷酸化和激活卻嚴重降低，說明PI3K下游信號轉(zhuǎn)導障礙在IR形成中的作用也不容忽視。4 結(jié)論平菇多糖能明