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文檔簡(jiǎn)介
1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合第一頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合細(xì)細(xì)胞胞工工程程植物植物(zhw)組織培養(yǎng)組織培養(yǎng)植物體細(xì)胞植物體細(xì)胞(xbo)雜雜交交動(dòng)物動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培細(xì)胞培養(yǎng)養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合單克隆抗體技術(shù)單克隆抗體技術(shù)胚胎移植胚胎移植核移植核移植植物植物細(xì)胞細(xì)胞工程工程技術(shù)技術(shù)動(dòng)物動(dòng)物細(xì)胞細(xì)胞工程工程技術(shù)技術(shù)第二頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合所采用技術(shù)的理論(lln)基礎(chǔ) 植物(zhw)細(xì)胞工程通常(tngchng)采用的技術(shù)手段 植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng) 植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交植物細(xì)胞的全能性植物細(xì)胞的全能性植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)第三頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合第四頁(yè),共三
2、十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合 燒傷病人燒傷病人(bngrn)的治療通常是取燒傷病人的治療通常是取燒傷病人(bngrn)的的健康皮膚進(jìn)行自體移植,但對(duì)于大面積燒傷病人健康皮膚進(jìn)行自體移植,但對(duì)于大面積燒傷病人(bngrn)來(lái)講,健康皮膚很有限,請(qǐng)同學(xué)們想一想如何來(lái)講,健康皮膚很有限,請(qǐng)同學(xué)們想一想如何來(lái)治療該病人來(lái)治療該病人(bngrn)? 許多動(dòng)物的細(xì)胞能夠分泌蛋白質(zhì)許多動(dòng)物的細(xì)胞能夠分泌蛋白質(zhì),如抗體等如抗體等.但是但是(dnsh),單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)量是很少的單個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)量是很少的,怎樣才能獲怎樣才能獲得大量的分泌蛋白呢得大量的分泌蛋白呢?第五頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合一、動(dòng)物一、
3、動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)條件細(xì)胞培養(yǎng)條件 P461、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境 (添加一定量的抗生素,定期更換培養(yǎng)液)(添加一定量的抗生素,定期更換培養(yǎng)液)2、營(yíng)養(yǎng)、營(yíng)養(yǎng)(yngyng)(葡萄糖葡萄糖、氨基酸、微量元素、無(wú)機(jī)鹽、促生長(zhǎng)因子、動(dòng)物、氨基酸、微量元素、無(wú)機(jī)鹽、促生長(zhǎng)因子、動(dòng)物血清、血漿血清、血漿等。等。)3、溫度和、溫度和PH 4、氣體環(huán)境:、氣體環(huán)境: O2和和CO2(95%空氣和空氣和5% CO2 )保證細(xì)胞順利保證細(xì)胞順利(shnl)的生長(zhǎng)增殖的生長(zhǎng)增殖第六頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合二、動(dòng)物二、動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)概念細(xì)胞培養(yǎng)概念 P441、概念:2、目的(m
4、d):3、理論基礎(chǔ):細(xì)胞細(xì)胞(xbo)增值增值獲得細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)物獲得細(xì)胞和細(xì)胞產(chǎn)物 就是從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織,就是從動(dòng)物機(jī)體內(nèi)取出相關(guān)的組織,將它將它分散分散成單個(gè)細(xì)胞,然后,放在成單個(gè)細(xì)胞,然后,放在適宜的適宜的培養(yǎng)基培養(yǎng)基中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。中,讓這些細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖。三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程 P44-46第七頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合動(dòng)物動(dòng)物胚胎胚胎(piti)或或幼齡幼齡動(dòng)物的組織、器官動(dòng)物的組織、器官胰蛋白酶胰蛋白酶(y dn bi mi)剪碎剪碎單個(gè)細(xì)胞單個(gè)細(xì)胞(xbo)加培養(yǎng)液加培養(yǎng)液制成制成細(xì)胞細(xì)胞懸浮懸浮液液 原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖去掉
5、組織去掉組織間蛋白間蛋白 傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)胰蛋白酶胰蛋白酶10代細(xì)胞代細(xì)胞50代細(xì)胞代細(xì)胞50代以后代以后核型不變核型不變核型改變核型改變遺傳物質(zhì)遺傳物質(zhì)改變改變?nèi)?、?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程:三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程:第八頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合四、動(dòng)物四、動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用 P47v大規(guī)模生產(chǎn)有重要價(jià)值的生物制品,如病毒大規(guī)模生產(chǎn)有重要價(jià)值的生物制品,如病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等疫苗、干擾素、單克隆抗體等v為基因工程提供受體細(xì)胞為基因工程提供受體細(xì)胞v用于檢測(cè)有毒物質(zhì),判斷某種物質(zhì)的毒性用于檢測(cè)有毒物質(zhì),判斷某種物質(zhì)的毒性v科學(xué)家培養(yǎng)正?;蚋鞣N病變的細(xì)胞科學(xué)家
6、培養(yǎng)正?;蚋鞣N病變的細(xì)胞(xbo),用于,用于生理、病理、藥理等方面的研究。生理、病理、藥理等方面的研究。第九頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合獲得獲得(hud)(hud)細(xì)細(xì)胞胞或細(xì)胞產(chǎn)物或細(xì)胞產(chǎn)物細(xì)胞細(xì)胞(xbo)(xbo)的全的全能性能性植物體植物體培養(yǎng)培養(yǎng)(piyng)(piyng)結(jié)果結(jié)果快速繁殖、培育快速繁殖、培育無(wú)病毒植株等無(wú)病毒植株等培養(yǎng)目的培養(yǎng)目的葡萄糖、葡萄糖、動(dòng)物動(dòng)物血清血清蔗糖、蔗糖、植物激植物激素素培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)基特有成分液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基性質(zhì)細(xì)胞增殖細(xì)胞增殖原理原理動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目
7、植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較細(xì)胞群體細(xì)胞群體第十頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合1、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的正確(zhngqu)過(guò)程是 A原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株細(xì)胞系細(xì)胞系B原代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞系細(xì)胞系細(xì)胞株細(xì)胞株C傳代培養(yǎng)細(xì)胞系細(xì)胞系原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株D原代培養(yǎng)細(xì)胞系細(xì)胞系傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)細(xì)胞株細(xì)胞株2、動(dòng)物(dngw)細(xì)胞培養(yǎng)與植物細(xì)胞培養(yǎng)的重要區(qū)別在于A 培養(yǎng)基不同B 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)不需要在與菌條件下進(jìn)行C 動(dòng)物細(xì)胞可以傳代培養(yǎng),而植物細(xì)胞不能D 動(dòng)物細(xì)胞能大量培養(yǎng),而植物細(xì)胞只能培養(yǎng)成植株第十一頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合3、下列有關(guān)動(dòng)物
8、細(xì)胞培養(yǎng)的敘述,正確的是A 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的目的是獲得大量的細(xì)胞分泌蛋白B 細(xì)胞遺傳物質(zhì)的改變發(fā)生于原代培養(yǎng)過(guò)程中C 在培養(yǎng)瓶中要定期(dngq)用胰蛋白酶使細(xì)胞從瓶壁上脫離,制成懸浮液D 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)液中通常含有葡萄糖、氨基酸、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)素和動(dòng)物血清等 4、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的用途有 生產(chǎn)有價(jià)值的生物制品,如病毒疫苗、干擾素等 生產(chǎn)基因工程技術(shù)中所用的受體細(xì)胞可以用于檢測(cè)有毒物質(zhì)培養(yǎng)的各種細(xì)胞可直接(zhji)用于生理、病理、藥理等方面的研究 A B C D 第十二頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合 (1)容器A中放置的是動(dòng)物器官或組織。它一般取自 (2)容器A中的動(dòng)物器官或組織首先要進(jìn)行的處理是
9、,然后用酶處理,這是為了使細(xì)胞分散開(kāi)來(lái)。這樣做的目的是 (3)培養(yǎng)首先在B瓶中進(jìn)行,這時(shí)的細(xì)胞培養(yǎng)稱為。 (4)為了把B瓶中的細(xì)胞分裝到C瓶中,用處理,然后配置成,再分裝。 (5)有少數(shù)的細(xì)胞能存活下來(lái),繼續(xù)傳下去,一般能傳到4050 代,這種傳代細(xì)胞叫做。這種細(xì)胞的遺傳物質(zhì)與前面的細(xì)胞(相同,不同)。(6)這種細(xì)胞傳至50代后一般不能再傳,但有少數(shù)細(xì)胞遺傳物質(zhì)發(fā)生改變,帶有 細(xì)胞的特征,有可能(knng)在培養(yǎng)條件下無(wú)限制的傳下去。 胚胚胎或幼齡胎或幼齡(yu ln)動(dòng)物組織器官動(dòng)物組織器官剪碎剪碎胰蛋白胰蛋白(dnbi)使每個(gè)細(xì)胞都能與培養(yǎng)液接觸使每個(gè)細(xì)胞都能與培養(yǎng)液接觸原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)胰
10、蛋白酶胰蛋白酶懸浮液懸浮液細(xì)胞株細(xì)胞株相同相同癌癌第十三頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合第十四頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合動(dòng)物動(dòng)物(dngw)(dngw)體細(xì)胞核移植概念體細(xì)胞核移植概念: :將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)將動(dòng)物的一個(gè)細(xì)胞的細(xì)胞核,移入一個(gè)已經(jīng)(y jing)去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中,使其重組并發(fā)育成去掉細(xì)胞核的卵母細(xì)胞中,使其重組并發(fā)育成一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)一個(gè)新的胚胎,這個(gè)新胚胎最終發(fā)育成動(dòng)物個(gè)體。體。用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為用核移植的方法得到的動(dòng)物稱為克隆動(dòng)物克隆動(dòng)物核移植核移植胚胎胚胎(piti)細(xì)胞核移植細(xì)胞核移植體細(xì)胞核移植(體細(xì)胞核移
11、植(難度難度高高)受體細(xì)胞:受體細(xì)胞:M期期的卵母細(xì)胞的卵母細(xì)胞第十五頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合不不第十六頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合第十七頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合思考題思考題、核在進(jìn)行、核在進(jìn)行(jnxng)體細(xì)胞核移植之前,為何要去掉受體卵母體細(xì)胞核移植之前,為何要去掉受體卵母細(xì)胞的核?細(xì)胞的核?為使核移植動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來(lái)自有利用為使核移植動(dòng)物的遺傳物質(zhì)全部來(lái)自有利用(lyng)價(jià)值的動(dòng)物價(jià)值的動(dòng)物提供的細(xì)胞。提供的細(xì)胞。、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用、用于核移植的供體細(xì)胞一般都選用(xunyng)傳代傳代10代以內(nèi)的細(xì)代以內(nèi)的細(xì)胞,為什么?胞,為什么?10代以內(nèi)的細(xì)胞保
12、持一般保持正常二倍體的核型,未突變代以內(nèi)的細(xì)胞保持一般保持正常二倍體的核型,未突變3、細(xì)胞核移植生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了、細(xì)胞核移植生產(chǎn)的克隆動(dòng)物是對(duì)體細(xì)胞供體動(dòng)物進(jìn)行了100%的復(fù)制嗎?為什么?的復(fù)制嗎?為什么?不是,克隆動(dòng)物絕大部分不是,克隆動(dòng)物絕大部分DNA來(lái)自供體細(xì)胞核,但核外還有來(lái)自供體細(xì)胞核,但核外還有少部分少部分DNA(如線粒體(如線粒體DNA)來(lái)自受體卵母細(xì)胞)來(lái)自受體卵母細(xì)胞第十八頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合克隆動(dòng)物克隆動(dòng)物(dngw)的研究意義的研究意義1.克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器,生產(chǎn)醫(yī)用蛋白克隆動(dòng)物作為生物反應(yīng)器,生產(chǎn)醫(yī)用蛋白2.改良動(dòng)物品種改良動(dòng)物品種
13、3.治療人類(lèi)治療人類(lèi)(rnli)疾病,作為供體疾病,作為供體4.保護(hù)瀕危動(dòng)物保護(hù)瀕危動(dòng)物體細(xì)胞核移植技術(shù)存在體細(xì)胞核移植技術(shù)存在(cnzi)的問(wèn)題:的問(wèn)題:許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷,許多克隆動(dòng)物表現(xiàn)出遺傳和生理缺陷,如體型過(guò)大,異常肥胖,發(fā)育困難,臟如體型過(guò)大,異常肥胖,發(fā)育困難,臟器缺陷,免疫失調(diào)等器缺陷,免疫失調(diào)等。第十九頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合第二十頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合如果將牛的細(xì)胞與植物如果將牛的細(xì)胞與植物(zhw)細(xì)胞雜交,得到綠色細(xì)胞雜交,得到綠色的小奶牛,那豈不是只要曬曬太陽(yáng)就可以擠出的小奶牛,那豈不是只要曬曬太陽(yáng)就可以擠出牛奶啦!牛奶啦!動(dòng)物細(xì)胞也能融合
14、動(dòng)物細(xì)胞也能融合(rngh)嗎?嗎?第二十一頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合動(dòng)物細(xì)胞融合1.定義(dngy):2.原理:3.融合方法:4.意義:5.應(yīng)用:細(xì)胞膜具有細(xì)胞膜具有(jyu)流動(dòng)性流動(dòng)性生產(chǎn)生產(chǎn)(shngchn)單克隆抗體單克隆抗體第二十二頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合1、動(dòng)物(dngw)細(xì)胞融合過(guò)程不同不同DNA的兩個(gè)的兩個(gè)(lin )細(xì)胞細(xì)胞滅活病毒滅活病毒(bngd)誘導(dǎo)細(xì)誘導(dǎo)細(xì)胞融合胞融合融合后的細(xì)胞進(jìn)行融合后的細(xì)胞進(jìn)行有絲分裂有絲分裂第二十三頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合主要主要(zhyo)(zhyo)用于制備用于制備單克隆抗體單克隆抗體(kngt)(kngt)獲得獲得(hu
15、d)(hud)雜種植株雜種植株用途用途物理、化學(xué)方法物理、化學(xué)方法(同左)(同左)滅活的病毒滅活的病毒物理(離心、振動(dòng)、物理(離心、振動(dòng)、電刺激)電刺激)化學(xué)(聚乙二醇)化學(xué)(聚乙二醇)誘導(dǎo)方法誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的方法細(xì)胞融合的方法細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性植物細(xì)胞全能性原理原理動(dòng)物細(xì)胞融合動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目比較項(xiàng)目植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較植物、動(dòng)物細(xì)胞融合的比較第二十四頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合設(shè)計(jì)方案:設(shè)計(jì)方
16、案:一個(gè)一個(gè)B B淋巴細(xì)胞只分泌淋巴細(xì)胞只分泌(fnm)(fnm)一種特異性抗體一種特異性抗體小鼠骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖小鼠骨髓瘤細(xì)胞能無(wú)限增殖如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一如何獲得化學(xué)性質(zhì)單一(dny)(dny)、特異性強(qiáng)的抗體?、特異性強(qiáng)的抗體?雜種雜種(zzhng)細(xì)胞細(xì)胞二、單克隆抗體二、單克隆抗體1.傳統(tǒng)獲取抗體方法:傳統(tǒng)獲取抗體方法: 缺點(diǎn):缺點(diǎn):反復(fù)注射,血清中獲取反復(fù)注射,血清中獲取第二十五頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合動(dòng)物動(dòng)物(dngw)細(xì)胞融合技細(xì)胞融合技術(shù)術(shù)B 、BB 、B瘤瘤 、瘤瘤、瘤瘤 、瘤、瘤只有只有(zhyu)雜雜交細(xì)胞才能活交細(xì)胞才能活動(dòng)物動(dòng)物(dngw)細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)
17、單克隆抗體制備單克隆抗體制備過(guò)程過(guò)程獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的的B淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞第二十六頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合2.制備過(guò)程:制備過(guò)程:獲取效應(yīng)獲取效應(yīng)B細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞細(xì)胞,骨髓瘤細(xì)胞 通過(guò)什么方法獲得效應(yīng)通過(guò)什么方法獲得效應(yīng)B細(xì)胞?怎樣能得到足細(xì)胞?怎樣能得到足夠多的骨髓瘤細(xì)胞?夠多的骨髓瘤細(xì)胞?人工誘導(dǎo)融合:關(guān)鍵:人工誘導(dǎo)融合:關(guān)鍵: 方法:方法: 結(jié)果:結(jié)果:用特定的用特定的選擇選擇(xunz)培養(yǎng)基培養(yǎng)基篩選篩選出雜交瘤細(xì)胞出雜交瘤細(xì)胞此細(xì)胞特點(diǎn):此細(xì)胞特點(diǎn):體外進(jìn)行體外進(jìn)行(jnxng)細(xì)胞培養(yǎng)細(xì)胞培養(yǎng)膜的融合膜的融合(rngh)BB B B瘤瘤 瘤瘤瘤瘤 瘤瘤迅速
18、大量增值迅速大量增值產(chǎn)生專(zhuān)一抗體產(chǎn)生專(zhuān)一抗體第二十七頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合 克隆雜交細(xì)胞克隆雜交細(xì)胞(xbo),再篩選,再篩選, 目的:目的: 體外或體內(nèi)克隆體外或體內(nèi)克隆 提取單克隆抗體提取單克隆抗體3.單克隆抗體優(yōu)點(diǎn):?jiǎn)慰寺】贵w優(yōu)點(diǎn):篩選篩選(shixun)出能產(chǎn)生所需抗體的雜出能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞交瘤細(xì)胞特異性強(qiáng)特異性強(qiáng)靈敏度高靈敏度高可以可以(ky)大量制備大量制備第二十八頁(yè),共三十頁(yè)。動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)綜合4.單克隆抗體(kngt)的應(yīng)用: 在基礎(chǔ)理論研究中具有在基礎(chǔ)理論研究中具有(jyu)(jyu)重要意義重要意義 在疾病診斷、治療在疾病診斷、治療(zhlio)(zhlio)和預(yù)防方面
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