桑葉中多糖的提取與分析方法的研究

1、華中科技大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）紙打?。?dǎo)中科技大穿本科生畢業(yè)設(shè)計(jì)論文（華文中宋小初號(hào)加粗居中）（題目）（黑體2號(hào)加粗居中）桑葉中多糖的提取與分析方法的研究院系專業(yè)班級(jí)姓名學(xué)號(hào)指導(dǎo)教師年 月 日（華文中宋3號(hào)居中）學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明（黑體小2號(hào)加粗居中）本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究所取得的 研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包括任何其他個(gè)人或 集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。（宋體小4號(hào)）作者簽名：年 月 日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書（黑體小2號(hào)加粗居中）本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保障、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意

2、學(xué)校保 留并向有關(guān)學(xué)位論文管理部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查 閱和借閱。本人授權(quán)省級(jí)優(yōu)秀學(xué)士論文評(píng)選機(jī)構(gòu)將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容 編入有關(guān)數(shù)據(jù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué) 位論文。本學(xué)位論文屬于1、保密口，在年解密后適用本授權(quán)書2、不保密口 。（請(qǐng)?jiān)谝陨舷鄳?yīng)方框內(nèi)打“（宋體小4號(hào)）作者簽名：年 月日導(dǎo)師簽名：年 月日（注：此頁內(nèi)容裝訂在論文扉頁 ）摘要由于科技技術(shù)的不斷進(jìn)步以及人們生活水平的不斷改善，保健營(yíng)養(yǎng)品越來越受到人們的關(guān)注，尤其體現(xiàn)在原材料是否采用天然材料方面，而天生就具有美譽(yù)“神仙草”一一桑葉，便逐漸走入了人們的視野中，隨著其市場(chǎng)的

3、興起，不少 科學(xué)家、研究人員對(duì)桑葉進(jìn)行了多方面的研究。研究表明：桑葉作為一種天然保健營(yíng)養(yǎng)品，具有效成分較多，如黃酮、多糖、 DNJ等等。本文將多角度、深層次 的對(duì)桑葉中的多糖成分進(jìn)行剖析。筆者首先通過文獻(xiàn)資料查閱，熟悉了國(guó)內(nèi)外對(duì)桑葉中多糖的研究較為權(quán)威結(jié) 果，通過對(duì)比筆者 將選擇用苯酚-硫酸法進(jìn)行多糖含量的測(cè)定工作。關(guān)于采取何種 方面提取桑葉中的堆糖，通常使用的方法為熱水浸提法，也是經(jīng)常被提及的水提 法。根據(jù)之前查閱資 料顯示，水提法在桑葉提取多糖實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)的頻率最多。經(jīng) 過多出實(shí)驗(yàn)最終得到水提法的最佳條件，即提取溫度為 80C,持續(xù)兩小時(shí)，共提 取兩次，液周比為30:1,在上述假定情況下，提

4、取得到的粗糖約0.306g,占桑葉總重的6.12%;接下來開始實(shí)施超聲提取法，優(yōu)化組合超聲波功率、持續(xù)時(shí)間以及 液固比這三個(gè)指標(biāo)，進(jìn)而得到最佳的提取條件。經(jīng)過實(shí)驗(yàn)得到最優(yōu)的組合為：功 率采用300W,持續(xù)時(shí)間一刻鐘，液周比為20:1,最后得到粗糖物質(zhì)共0.446g,占 桑葉總重8.92%;接著筆者將對(duì)基于最佳的實(shí)驗(yàn)條件下提取的粗糖進(jìn)行去除雜質(zhì)、 提高純度，首先在粗糖中 加10%的三氯乙酸溶液用于去掉粗糖中的雜質(zhì)-蛋白質(zhì)， 然后通過過濾、濃縮等工序，最后加入95%的酒精后靜置一段時(shí)間，通過過濾、沉積、烘干最后得到多糖產(chǎn)物，緊接著再用活性炭對(duì)多糖產(chǎn)物進(jìn)行去色，之后再使用醇沉法提純，筆者通過多次使用

5、各不相同濃度的乙醇進(jìn)行沉淀，實(shí)驗(yàn)表明， 當(dāng)且僅當(dāng)乙醇濃度為80%時(shí)，沉淀的效果最佳，且能獲得質(zhì)量最多的多糖精品， 稱重得32.19mg,得率為10.52%;最后一步，將多糖精品溶解在 0.5L的蒸儲(chǔ)水中 相同條件下、相同處理流程得到的葡萄糖溶液在490nm處的吸光度為0.6201,然 后可以通過計(jì)算得到多糖物質(zhì)重量為12.5mg,經(jīng)過測(cè)定計(jì)算，其多糖含量為38.8%。 關(guān)鍵詞：桑葉，多糖，紫外分光光度計(jì)，超聲提取頁碼AbstractWith the rapid development of science and technology and the improvement of living

6、 standards, people are paying more and more attention to natural health nutrition products, and the “ Fairy Grass " that has a natural reputation, mulberry leaves, gradually enters people ' fseld of vision. With the rise of its market, many scientists and researchers have conducted various

7、researches on mulberry leaves. Studies have shown that: As a natural health nutrition product, mulberry leaves have many active ingredients, such as flavonoids, polysaccharides, DNJ, and so on. This article will be multi -angle, deep-level analysis of polysaccharides in mulberry leaves.temperature 8

8、0The author first consulted the literature and was familiar with the authoritative results of the research on polysaccharides in mulberry leaves at home and abroad. By comparison, the author selected the phenol-sulfuric acid method to detect the polysaccharide content. The extraction of polysacchari

9、des in mulberry leaves is performed by hot water extraction, which is often referred to as water extraction. According to the previous review, the water extraction method has appeared most frequently in the mulberry leaf polysaccharide extraction experiment. The optimum extraction conditions for wat

10、er extraction were determined as follows: extractionC, extraction time 2h, extraction times 2 times, -tousolid ratio 30:1during extraction, and crude sugar extracted under the above assumptions. About 0.306g, accounting for 6.12% of the total weight of mulberry leaves; after the ultrasonic extractio

11、n experiment, set the ultrasonic extraction power, ultrasonic extraction time and extraction liquid solid ratio of these three univariate variables to determine the best ultrasonic extraction process conditions The ultrasonic extraction power was 300W, the ultrasonic extraction time was 25 min, and

12、the liquid -solid ratio was 20:1. At this time, the crude sugar product was 0.446 g, accounting for 8.92% of the total mulberry leaf weight; The crude sugar extracted under the experimental conditions is used to remove impurities and increase the purity. First, 10% trichloroacetic acid solution is a

13、dded to the crude sugar to remove the protein from the product, and then is left standing to filter, and is concentrated under reduced pressure. After 95% ethanol is added, it is allowed to stand and filtered. After the precipitate is dried, the polysaccharide product is obtained, and then the activ

14、ated charcoal is used to decolorize the polysaccharide product, and then the alcohol is used to purify the solution. The author uses multiple different concentrations of ethanol to precipitate, and experiments are performed. Ming, if and only if the ethanol concentration is 80%, the best effect of p

15、recipitation, and can get the most quality polysaccharide boutique, weighed 32.19mg, the yield was 10.52%; the last step, dissolve the polysaccharide boutique in 0.5L In the distilled water, the absorbance at 490 nm was determined to be 0.6201 in the same procedure as the standard curve of glucose,

16、and the mass of the polysaccharide in the fine polysaccharide was calculated to be 12.5 mg. After calculation, the polysaccharide content was 38.8%. .Key Words : Mulberry leaf, polysaccharide, ultraviolet spectrophotometer, ultrasonic extraction目錄摘要L.Abstract L.1、緒論1.1.1 研究背景與意義 1.1.2 多糖的研究進(jìn)展3.1.3 多

17、糖的化學(xué)組成及結(jié)構(gòu) 4.1.4 研究?jī)?nèi)容5.1.4.1 多糖的提取方法研究5.1.4.2 多糖的分離與純化研究 6.1.4.3 多糖的分析與檢測(cè)研究 7.7.2、實(shí)驗(yàn)部分82.1 主要儀器與試劑 8.2.2 溶液的制備 8.2.2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備8.2.2.2 苯酚溶液的制備8.2.2.3 三氯乙酸溶液的配制9.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制9.2.4 桑葉中多糖的提取工藝流程9.2.4.1 水提法實(shí)驗(yàn)流程： 9.2.4.2 水提法實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì) 102.4.3 超聲提取法102.4.4 超聲提取實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)112.5 多糖粗產(chǎn)品的分析純化1.12.5.1 除蛋白質(zhì)112.5.2 活性炭脫色

18、.1.12.5.3 醇沉工藝112.6 多糖粗產(chǎn)品含量的檢測(cè)1.111.3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論1.23.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線1.2葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液在紫外可見分光光度計(jì)掃描圖 123.2 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理13正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果 .1320.4、結(jié)論2.1.21.參考文獻(xiàn)22.致謝24.1、緒論1.1 研究背景與意義1.2 研究的背景和意義由于現(xiàn)在人們的生活水平不斷得到改善，人們?cè)絹碓阶⒅刈约旱纳眢w健康 問題。這就使得當(dāng)下一些古老的醫(yī)療保健用品漸漸不能達(dá)到人們的要求，另外， 一些醫(yī)療保健品的加工過程繁瑣工藝復(fù)雜，往往被認(rèn)為在生產(chǎn)過程中雜質(zhì)過多， 人們通常不會(huì)考慮購(gòu)買。在一定程度上，人們?cè)絹碓狡珢鄄捎锰烊徊牧系纳a(chǎn)的 醫(yī)療

19、保健品，此時(shí)，自然界的動(dòng)物以及植物作為醫(yī)療保健品的原材料越發(fā)得到人 們的關(guān)注，越來越多的科研人員開始重視并且開展了許多研究分析工作。通過翻閱相關(guān)的科學(xué)技術(shù)文獻(xiàn)以及相關(guān)的研究報(bào)告，可以發(fā)現(xiàn)：在動(dòng)物以及植物中蘊(yùn)含 了相當(dāng)多的生物活性物質(zhì)，比如：一些生物堿、多糖類物質(zhì)、酶類等物質(zhì)，這些 物質(zhì)起到維持個(gè)體的正常的生命活動(dòng)， 使得個(gè)體飽含生命活力，因此上述的物質(zhì) 被人們視為人體必需的健康因子，在保持人體健康方面起到相當(dāng)大的作用。 在上 述的生物活性物質(zhì)中，人體最為需要以及最重要的就是多糖類物質(zhì)。 對(duì)于多糖而 言，其本質(zhì)上是一種由生物產(chǎn)生的高分子化合物，具能夠起到相當(dāng)多的生物活性作用并且還能夠起到一起保健

20、作用。 因此，對(duì)于當(dāng)前市面上在售的大部分藥物以 及保健品而言，多糖基本上是它們的主要組成物質(zhì)， 可見其功能作用較多并且地 位相當(dāng)高。除了起到預(yù)防和治療某些疾病的作用， 還可以在治療癌癥方面發(fā)揮一 定的效果。對(duì)此，不少科研機(jī)構(gòu)加大對(duì)多糖的研究并做了相應(yīng)的實(shí)驗(yàn)，多糖以其市場(chǎng)潛力以及價(jià)值越發(fā)吸引人們的注意力，研究以及留意該物質(zhì)的人士日益增 多。另外，生物利用糖類生成組織等身體機(jī)構(gòu)，同時(shí)也為日常的生命活動(dòng)供能， 是主要的供能原料。糖類物質(zhì)的生物學(xué)功能說明在生物的正常生命過程中糖類起 到相當(dāng)重要的作用，可以說是生物不可或缺的生命基礎(chǔ)。 在自然界，多糖的載體 相當(dāng)豐富，怎樣選擇檢測(cè)標(biāo)本進(jìn)而有利于檢測(cè)是一個(gè)

21、值得研究以及商榷的事情。 筆者在翻閱相關(guān)文獻(xiàn)資料的基礎(chǔ)上，了解到桑葉中多糖物質(zhì)的有待深入的研究分 析。中國(guó)種植桑樹的歷史相當(dāng)悠久， 桑樹的種植持續(xù)了上千年，到今天也得到了 廣泛的種植?？梢哉f桑葉的獲取相當(dāng)容易，來源十分豐富，種類也是相當(dāng)多。研 究產(chǎn)量豐富、材料易得的桑葉是一個(gè)比較好的課題， 經(jīng)過對(duì)其細(xì)胞中的多糖類物 質(zhì)的研究，并經(jīng)過提取提純處理后展開相關(guān)的實(shí)驗(yàn)，接下來一步一步確定該物質(zhì) 最有效的提取條件，這種提取工藝具有相當(dāng)高的價(jià)值。 所以，對(duì)桑葉細(xì)胞中的多 糖物質(zhì)進(jìn)行相關(guān)的研究并進(jìn)行提取處理具有相當(dāng)大的價(jià)值。多糖擁有的具體生物 活性有以下五點(diǎn)明顯作用：1、提高免疫力；世界各國(guó)都有相關(guān)的權(quán)威研

22、究證實(shí)，多糖能在一定程度上提高 機(jī)體的免疫能力，因?yàn)槎嗵堑慕Y(jié)構(gòu)會(huì)很大程度決定多糖的功能， 所以，架構(gòu)不一 樣的多糖存在很多 不一樣的免疫作用。在香菇多糖輔助淋巴 T細(xì)胞之下，如若 機(jī)體收到刺激，將更快的參與生理反應(yīng)。尤其是癌細(xì)胞產(chǎn)生或者入侵時(shí)，其還有 能力幫助機(jī)體更快的修復(fù)免疫功能。2-降低血糖、血脂：當(dāng)代人類的三大疾病之一一一糖尿病，其本質(zhì)是因?yàn)閮?nèi)分 泌物造成的。借助細(xì)致的分析后能知道，多糖是借助增強(qiáng)小鼠體內(nèi)胰島的分泌能 水平，是的胰島素產(chǎn)生的數(shù)量增加，從而提高或者減小有關(guān)酶的活性從而達(dá)到降 低血糖的功能；遺憾的是，當(dāng)前使用多糖進(jìn)行降血糖還只是在臨床試驗(yàn)階段，且部分工藝還有待提高，還未能達(dá)到

23、能正式使用的階段。3、抵抗月中瘤活性：有許多多糖物質(zhì)都具有一定的抗月中瘤活性，當(dāng)前，人們已經(jīng) 可以通過細(xì)菌、真菌等提取得到這類多糖，而且還有不少數(shù)具有高抗月中瘤活性的 多糖已經(jīng)進(jìn)入了臨床試用階段，我們有理由相信，多糖在抗月中瘤活性方面的研究 將迎來新的春天。4、抗輻射：部分多糖能或多或少的提升抗輻射水平。曾經(jīng)有人做過實(shí)驗(yàn)，設(shè)置 兩組小白鼠，A組不作要求，B組輸入茶葉多糖，將兩組放在相同實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn) 行輻射劑量大小一致的照射，結(jié)果表明 B組的小白鼠成活率比A組高33%。5、其他作用：由于對(duì)多糖的了解還有待深入，所以當(dāng)前人們也沒有對(duì)其知根知 底的了解，在其他作用方面，有比較顯著的效果有：海帶多糖能

24、起到減肥作用； 九里香多糖能對(duì)生物體的損傷進(jìn)行修復(fù)；等等?？偟膩碚f，多糖目前的研究已經(jīng)給人們帶來了諸多便利， 這也是為什么越來越多 的人加入到多糖的研究中，同時(shí)多糖也是人體維持正常生命活動(dòng)的必要物質(zhì)，而 且其對(duì)于一些頑疾也有著特殊醫(yī)療效果，無論從藥品角度，還是從保健品角度， 多糖的使用還有很大的發(fā)展空間。華中科技大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）1.3 多糖的研究進(jìn)展1. 2多糖的研究進(jìn)展多糖(polysaccharides)即多聚糖。從其微觀組織上來看，是由十個(gè)以上單糖連 接而成，其中起到連接作用的主要是甘鍵。 不過通常情況下，多糖所包含的單糖 基均在百個(gè)乃至千個(gè)以上、多糖雖然由單糖組成，但是與單糖相比，

25、多糖的性質(zhì) 有著極大的改變，而這種改變中最明顯的兩點(diǎn)便是單糖本身所含有的甜味以及強(qiáng) 還原性比較小。多糖有多種不同的分類方法，結(jié)合本文的研究，筆者從多糖在生 物體內(nèi)的功能出發(fā)，對(duì)多糖進(jìn)行分類，主要分為不可溶于水以及儲(chǔ)存養(yǎng)料兩種。 其中不溶于水的主要是動(dòng)物的支持組織， 從結(jié)構(gòu)上來看，這種支持組織以直鏈型 居多，而主要用于儲(chǔ)存養(yǎng)料的多糖多是可溶于水的，尤其是在熱水之中，其能夠迅速的溶于其中，并且發(fā)生反應(yīng)之后呈現(xiàn)出膠體溶液之態(tài)，在其呈該種狀態(tài)之下， 通過酶催化，能夠產(chǎn)生出淀粉等，這種多糖分析接夠可以促進(jìn)植物的生長(zhǎng)。均多糖(homosaccharide)是多糖的一種，也可以將其看成由單一一種單糖所 組成

26、的，如果是由多種類型的單糖所組成的， 那么這種類型的多糖便被稱為是雜 聚唐。多糖存在的范圍極廣，并且存在的地方不一',在動(dòng)物體內(nèi)，多糖多存在于 體細(xì)胞膜之內(nèi)，而在植物體內(nèi)則多糖存在于細(xì)胞壁之中。另外，因?yàn)闃?gòu)成多糖的結(jié)構(gòu)不一，所以種類極多，單從自然界不同動(dòng)植物中提取的多糖就有數(shù)百種，如鯊魚軟骨多糖、仙人掌多糖等。多糖出現(xiàn)在所有動(dòng)植物和微生物細(xì)胞壁中。一個(gè)多世紀(jì)前，德國(guó)化學(xué)家E. Fischer研究出糖類以及其復(fù)合分子在生物功能上是獨(dú)特性，為后來人們探索 糖類應(yīng)用奠定了重要基礎(chǔ)。在20世紀(jì)50年代，通過相關(guān)相關(guān)學(xué)者的探討，人們 發(fā)現(xiàn)了真菌多糖擁有令人驚喜的抗癌活性， 能夠起到一定程度的抗癌

27、效果，從此 人們對(duì)多糖化學(xué)特性領(lǐng)域的研究更加關(guān)注。緊接著，諸多表明糖類物質(zhì)的重要構(gòu) 成一一多糖類物質(zhì)具有與眾不同的生物活性功能的研究紛紛見諸于世。截止目 前，在多糖化學(xué)特性研究領(lǐng)域已經(jīng)取得了很多成果。GlombitzaKW等學(xué)者在探究中得出結(jié)論：分離酸棗仁丁醇提取物所得到的Christinin A能夠借助其所含有的皂花糖，使糖尿病鼠模型的糖水平與肝磷酸化酶活性降低、令清胰島素含量和 肝糖原量有所提高。TomodaM等學(xué)者的研究證明植物粘液具有降血糖的功能。 Isiguld K.以18名糖尿病患者作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，安排其在飯后飲用含茶多糖的飲料， 經(jīng)過4周的試驗(yàn)期，對(duì)其糖基化血紅蛋白值和血糖含量進(jìn)行

28、二次檢測(cè)， 得出糖基 化血紅蛋白值和血糖含量檢測(cè)有顯著降低。Konnoc等學(xué)者則在大量研究基礎(chǔ)上 從人參中分離出人參多糖，多達(dá) 21中，并在對(duì)其進(jìn)行作用測(cè)試后發(fā)現(xiàn)，人參多 糖能夠在很大程度上減少患有四氧喀噬糖尿病小鼠的血糖含量。隨著新世紀(jì)的到來，科技和生產(chǎn)力的發(fā)展促使了細(xì)胞學(xué)和生物學(xué)的發(fā)展，加上儀器的精密度提高和分析技術(shù)的更為地科學(xué)，我們對(duì)于糖類的研究也更為深入， 也逐步建立了關(guān)于糖類的研究學(xué)科， 對(duì)于多糖功能的了解也更為全面具體。 故而 可以說，我們已進(jìn)入了 多糖生命科學(xué)”的時(shí)代。1.3 多糖的化學(xué)組成及結(jié)構(gòu)我們常說的糖類實(shí)際上主要是碳水化合物組成的，碳水化合物是碳原子上附 帶了很多的多羥基

29、醛或者多羥基酮，具也可以稱為利用水解生成多羥基酮（或醛） 的類化合物。以糖類的組成結(jié)構(gòu)和性質(zhì) 能夠?qū)⑵浞诸?，主要有以下幾類：第一?是單糖，第二類是二糖，第三類是寡聚糖，最后一類是多糖。對(duì)糖分子加以分析， 我們不難發(fā)現(xiàn)，一個(gè)糖分子當(dāng)中還含有若干個(gè)原子，這些原子的特點(diǎn)是非對(duì)稱， 這也是導(dǎo)致大多數(shù)的糖分子具有旋光性特點(diǎn)的原因。如圖1-1和1-2所示，其為單糖D葡萄糖以及D葡萄糖醛酸的結(jié)構(gòu)示意圖。圖1-3則是多糖纖維素的結(jié) 構(gòu)示意圖?？梢?，多糖纖維素的鏈接是有眾多直鏈葡萄糖作為媒介進(jìn)而形成的。因此，關(guān)于多糖我們可以得出這樣的結(jié)論：由多個(gè)單糖彼此之間依靠昔鍵連接起 來相互組成了多糖。而這些單糖連接的方

30、式是不一樣的， 不同的連接方式會(huì)導(dǎo)致 形成的多糖也不一樣，多糖根據(jù)單糖的連接方式可以分為三類，主要的類型有：直鏈多糖、叉鏈多糖以及環(huán)狀多糖圖1-3纖維素多糖的不同類型還取決于構(gòu)成其單糖的種類、 單糖的比例，而一個(gè)糖分子上 面所含有的原子的基團(tuán)與數(shù)量位置等也會(huì)影響最后形成的多糖的種類。當(dāng)然也會(huì)因?yàn)槠渌翩I類型、比例以及其支鏈大小而異，多糖在結(jié)構(gòu)上比蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu) 更為復(fù)雜多樣，究其原因主要是能夠組成多糖的那些單糖具有很多的種類，哪拍是只有一種單糖，不同的連接方式也可能會(huì)致使其產(chǎn)生分支，當(dāng)然，蛋白質(zhì)是沒有分支的。正因?yàn)橐陨显?，多糖有很多種結(jié)構(gòu)，對(duì)這些結(jié)構(gòu)進(jìn)行歸類劃分的話， 可以劃分出四種，分別是

31、：首先是第一種類型，一級(jí)結(jié)構(gòu)：對(duì)于糖基而言，它一般是構(gòu)建在一級(jí)結(jié)構(gòu)上面的， 當(dāng)處于一級(jí)結(jié)構(gòu)的時(shí)候，糖基的排列順序是由特定序列的，判斷是否為一級(jí)結(jié)構(gòu) 的時(shí)候要觀察相鄰的糖基之間連接的方式特點(diǎn)，如果連接方式有分枝的話，分枝 在什么位置以及該分支的長(zhǎng)短特點(diǎn)是什么。 如果拿蛋白質(zhì)與其比較的話，蛋白質(zhì) 的結(jié)構(gòu)相對(duì)來說都算是簡(jiǎn)單的?？梢娞堑囊患?jí)結(jié)構(gòu)是多么的復(fù)雜。接著是第二種類型，二級(jí)結(jié)構(gòu)：多糖的二級(jí)結(jié)構(gòu)實(shí)際上是一種聚合體， 主要是由 多糖的骨架彼此連接而成，這種連接是通過氫鍵的方式連接起來的。與一級(jí)結(jié)構(gòu) 的連接方式不同，二級(jí)結(jié)構(gòu)的主要是多糖分子中主鏈的構(gòu)象，與側(cè)練無關(guān)，因?yàn)閭?cè)鏈沒有參與到二級(jí)結(jié)構(gòu)的空間排布

32、中。 而在結(jié)構(gòu)排列中。一級(jí)結(jié)構(gòu)是二級(jí)結(jié)構(gòu) 的基礎(chǔ)。其次是第三種，三級(jí)結(jié)構(gòu)：三級(jí)結(jié)構(gòu)也可以理解為非共同價(jià)作用的產(chǎn)物， 這種共 同價(jià)是因?yàn)橐患?jí)結(jié)構(gòu)中唐單位的竣基、氨基或硫酸基相互作用產(chǎn)生的。因此導(dǎo)致 了原本有序的二級(jí)結(jié)構(gòu)出現(xiàn)了有規(guī)則而粗大的改變所形成的構(gòu)象。最后是第四種，四級(jí)結(jié)構(gòu)：四級(jí)結(jié)構(gòu)也是為供價(jià)作用形成的， 而這種是多種聚集 體的集合，是由于多個(gè)多聚鏈通過非共價(jià)產(chǎn)生的。 這種多糖鏈并不是只存在于相 同的分子之間，不同的分子之間也可可能會(huì)形成聚集作用。 單糖殘基如果是按照 單一的個(gè)體來觀察的話，可以發(fā)現(xiàn)在空間上面主要呈現(xiàn)多糖的結(jié)構(gòu)形態(tài)特點(diǎn)。進(jìn) 一步研究觀察這些空間等位置特點(diǎn)，對(duì)于研究多糖生物是有

33、著重要的意義的。1.4 研究?jī)?nèi)容1.4.1 多糖的提取方法研究多糖的提取方法眾多，也各有特點(diǎn)，最具代表性和實(shí)操性的有以下五種：1）熱水浸提法：上個(gè)世紀(jì)多用此類方法提取多糖，是一種傳統(tǒng)方法。其原理是：可提取物質(zhì)易溶于水，通過過濾或離心將其與不溶物分離。優(yōu)點(diǎn)：設(shè)備易獲得，易操作，環(huán)?？煽?。缺點(diǎn)：熱水浸取法的過程需要數(shù)噸水， 而且也要大量的使用乙醇進(jìn)行醇沉淀， 最 后由于時(shí)間和溫度也會(huì)對(duì)多糖產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)有或多或少的影響。2）超聲波提取法：對(duì)于超聲波而言，它在對(duì)多糖進(jìn)行提取的時(shí)候，一般是按照是空化效應(yīng)來得到的。如果液體里有特別小的核心，那么就會(huì)因?yàn)槌暡ǖ拇碳ざ粩嗟乇患せ睿?從而 導(dǎo)致收縮等現(xiàn)象，由此

34、造成液體里出現(xiàn)高壓等情況。 按照“先扭曲，再中斷，最 后釋放”包裹物的順序來減少提取時(shí)間。優(yōu)點(diǎn)：操作實(shí)驗(yàn)過程段，效率很高。缺點(diǎn)：此法只能在實(shí)驗(yàn)室中實(shí)現(xiàn)，大量的工業(yè)生產(chǎn)不可行。3）微波提取法：顧名思義，此法需要微波輻射來完成，微波能夠?qū)θ軇┊a(chǎn)生作用，它能夠通過細(xì) 胞壁從而滲透到細(xì)胞內(nèi)部。細(xì)胞液以及溶劑會(huì)能量進(jìn)行有效的吸收， 而且如果當(dāng) 壓力大于了細(xì)胞壁容積能力的時(shí)候， 細(xì)胞壁就會(huì)撐破，會(huì)形成諸多小孔，而活性 物質(zhì)就會(huì)通過小孔釋放出來。4）酶解提取法：此法是通過酶具有專一性、高效性來實(shí)現(xiàn)的。酶解提取法可以無視細(xì)胞壁對(duì) 多糖的阻擋，從而能夠得到快速的釋放，如此可以將成分提取出來。在所有的反 應(yīng)過程里

35、，它都存在特別溫和的條件，能夠最大程度地對(duì)生物活性進(jìn)行保障， 具 備特別大的潛力。按照提取階段里酶的使用情況能夠知道，一般都包含了下列兩 類不同的方法：?jiǎn)蚊柑崛》ㄒ约皬?fù)合酶提取法。隨著生物工程和技術(shù)的快速發(fā)展，有關(guān)酶工程技術(shù)的研究也成為生物研究領(lǐng) 域的一個(gè)新出發(fā)點(diǎn)。優(yōu)點(diǎn)：多糖產(chǎn)率是這幾類方法中最高的，實(shí)驗(yàn)條件容易達(dá)成。缺點(diǎn)：制作成本過高，性價(jià)比較低，且酶的引入可能會(huì)帶紙多糖的純度受到影響。5）超高壓提取法：這種方法是在常溫下作為有效對(duì)植物成分進(jìn)行提取的一個(gè)有別于以前的技 術(shù)。它色工作原理對(duì)物質(zhì)展開持續(xù)的壓力降低，并且這是通過加壓裝置實(shí)現(xiàn)的， 與此同時(shí)，還會(huì)進(jìn)行降壓操作，如此能夠讓細(xì)胞里的壓力產(chǎn)

36、生較大的變化， 如此 能夠讓細(xì)胞壁因?yàn)閴毫Φ挠绊懚霈F(xiàn)破裂的情況， 其中的內(nèi)含物就能夠最大程度 地進(jìn)行釋放。該方法的優(yōu)點(diǎn)是提取時(shí)間短、雜質(zhì)少、能耗低、提取率高，是一種有較大潛 力的提取方法。但和超聲波提取一樣，這種方法目前只適用于實(shí)驗(yàn)室，工業(yè)化生 產(chǎn)桑葉多糖還不能實(shí)現(xiàn)。總結(jié)：根據(jù)筆者能開展的實(shí)驗(yàn)條件以及工藝方法和流程，通過上述對(duì)比，最后決定使用水提法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，同時(shí)以超聲法輔助提取。1.4.2 多糖的分離與純化研究經(jīng)過水提取的方法后獲得桑葉多糖粗提液， 其液體呈現(xiàn)不透明的掩飾，這是因?yàn)?溶液中含有許多雜質(zhì)造成的，其中的雜質(zhì)包括蛋白質(zhì)、葉綠素、葉黃素、生物堿 之類的物質(zhì)，因此如果想得到純度較高的多

37、糖溶液， 那么必須最大程度上過濾到 上述的雜質(zhì)。實(shí)驗(yàn)方法如下：1）除蛋白對(duì)于桑葉多糖粗提液而言，在其所有的雜質(zhì)以蛋白質(zhì)為主。通過相關(guān)的生物技術(shù)， 例如鹽析法、蛋白酶法等技術(shù)可以有效去除溶液中大部分蛋白質(zhì)。然而，僅適用等電點(diǎn)沉淀法以及加熱變性法無法百分百除掉溶液中的蛋白質(zhì)。止匕外，對(duì)于等電點(diǎn)沉淀法而言，其對(duì)操作人員的要求較高，并且該方法的成本極高，但是桑葉中 多糖的回收率卻不高。經(jīng)過對(duì)比研究國(guó)內(nèi)外的祥光資料，發(fā)現(xiàn)當(dāng)前時(shí)期Sevag法 和三氯乙酸法優(yōu)勢(shì)明顯。其中，Sevag法的原理為通過三氯甲烷-正丁醇混合溶液 可以凝固蛋白質(zhì)的作用將粗提液中溶解的蛋白質(zhì)凝固后沉淀，再用萃取法除去桑葉多糖中的蛋白質(zhì)

38、。通過實(shí)踐發(fā)現(xiàn)，這種方法優(yōu)勢(shì)明顯，然而效率不高。對(duì)于三 氯乙酸法而言，其原理為在酸性溶液中由于蛋白質(zhì)與三氯乙酸的酸根可以結(jié)合產(chǎn) 生沉淀，進(jìn)而可以去除粗提液中的蛋白質(zhì)雜質(zhì)。2）脫色另外，桑葉多糖粗提液中有許多葉綠素、葉黃素等色素雜質(zhì)，能夠采取多糖與色素理化特性的區(qū)別進(jìn)行去雜質(zhì)處理。對(duì)于這種雜質(zhì)的去除方法常用的有以及幾種：大孔樹脂吸附法、澄清劑法、活性炭法。第一種方法才做簡(jiǎn)便，不僅能保護(hù)環(huán)境，而且性價(jià)比高，能滿足大規(guī)模生產(chǎn) 的需要。脫色后再用乙醇進(jìn)行沉淀， 從而得到多糖的純化物。1.4.3 多糖的分析與檢測(cè)研究通常使用苯酚一硫酸法量化商業(yè)中多糖的含量， 其原理為糖類在濃硫酸中可以產(chǎn) 生水解，進(jìn)而出

39、現(xiàn)脫水反應(yīng)產(chǎn)生糠醛及其衍生物， 可以通過苯酚進(jìn)行染色進(jìn)行檢 測(cè)。在苯酚-硫酸法中多糖在硫酸的中可以發(fā)生水解就形成單糖，然后在脫水的 作用下產(chǎn)生糖醛衍生物，接著用苯酚進(jìn)行著色，用比色法測(cè)定多糖的含量。使用 紫外分光光度計(jì)，波長(zhǎng)為490納米，待測(cè)物會(huì)在該波長(zhǎng)處顯示出最大吸收峰。 接 著再配置葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液，空白對(duì)照組為經(jīng)過相同處理之后的蒸儲(chǔ)水， 經(jīng)過測(cè)試 后得到在490nm處葡萄糖溶液的吸光度值，然后繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。圖中橫坐標(biāo) 為葡萄糖的濃度值，縱坐標(biāo)為吸光度。2、實(shí)驗(yàn)部分2.1 主要儀器與試劑表2-1主要儀器實(shí)驗(yàn)儀器規(guī)格生產(chǎn)公司電子分析天平臺(tái)式醫(yī)用高速離心機(jī)手提式粉碎機(jī)恒溫水浴鍋真空冷凍干燥箱超

40、出波清洗儀超聲波細(xì)胞粉砰機(jī)循環(huán)水式真空泵紫外可見分光光度比JA1203TG18MHK-04 AHI1 S2VID-1000KQ-100EB1LON-6504S11Z-DUV-1800PC上海天平儀器廠 長(zhǎng)沙平凡儀器儀表有限公司 廣州市旭朗機(jī)械設(shè)備有限公司 武漢奧普森試驗(yàn)殳備有限公司 上海比朗儀器有限公司 明和超聲波工業(yè)股份有限公司 上海比朗儀器有限公司 鞏義市英峪予華儀器廠 上海美譜達(dá)儀器有限公司表2-2主要試劑試劑規(guī)格生產(chǎn)公司液硫酸分析純國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司苯酚分析純國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司三氯乙酸分析純國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司乙醉分析純國(guó)藥集團(tuán)記學(xué)試劑有限公司葡糖糖分析純國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試

41、劑有限公司桑葉市售四川蒸儲(chǔ)水自制2.2 溶液的制備2.2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)試液的配制在燒杯里面放入葡萄糖，它的總量是 10.00毫克，并且是通過天平獲取的， 然后在燒杯里面倒入一定量的蒸儲(chǔ)水進(jìn)行攪拌（玻璃棒攪拌）溶解。再利用玻璃棒將配置好的溶液轉(zhuǎn)移到100毫升的容量瓶里面去，為了防止溶液的浪費(fèi)記得用 蒸儲(chǔ)水將燒杯進(jìn)行多次清洗，最后向容量瓶里面繼續(xù)添加蒸儲(chǔ)水直至達(dá)到標(biāo)記刻 度，將容量瓶蓋好以后上下左右搖擺均勻，0.1g/mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)試液就配制好 了。2.2.2 苯酚的配制準(zhǔn)確稱量2.5克苯酚晶體，放入燒杯中，記住要一邊加蒸儲(chǔ)水一邊用玻璃板 攪拌，等到蒸儲(chǔ)水加入完成以后，如 2.2.1中玻璃棒引

42、流的作用，再次利用這個(gè) 原理將燒杯中的溶液轉(zhuǎn)移到容量瓶中（50ML的棕色容量瓶），然后同樣用蒸儲(chǔ) 水做清洗并定容到規(guī)定的刻度處，將容量瓶蓋好以后上下左右搖擺均勻，5%的苯酚溶液就配制好了。2.2.3 三氯乙酸溶液的制備選取實(shí)驗(yàn)室中的天平（電子）稱取三氯乙酸5克，并將其放到燒杯里面隨后 倒入一定量的蒸儲(chǔ)水?dāng)嚢枞芙?，接著同樣利用玻璃棒的引流作用將燒杯中的溶?轉(zhuǎn)移到容量瓶中去（50ML的棕色容量瓶），但是與2.2.2中不同的是，這里要立 刻將燒杯中的溶液進(jìn)行轉(zhuǎn)移，不能進(jìn)行停留，然后同樣用蒸儲(chǔ)水做清洗并定容到 規(guī)定的刻度處，將容量瓶蓋好以后上下左右搖擺均勻，10%的三氯乙酸溶液就配制好了。2.3 標(biāo)

43、準(zhǔn)曲線的描繪1、分別用滴定管汲取 1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL 已經(jīng)制備 好的葡萄糖溶液放到不同的容量瓶（10mL）中去，同樣的繼續(xù)取蒸儲(chǔ)水加到容 量瓶中定容到規(guī)定的刻度線；2、取6個(gè)錐形瓶，分別加入2mL的溶液，然后再加入1mL的苯酚試液；3、振蕩錐形瓶使溶液混合均勻，快速將量取好的5ml濃硫酸溶液滴入錐形瓶，持續(xù)振蕩錐形瓶2分鐘，然后利用恒溫水浴加熱鍋對(duì)錐形瓶進(jìn)行沸水浴加熱，加熱持續(xù)15min后停止；4、停止加熱后將錐形瓶取下并靜置冷卻直到室溫，采用紫外分光光度計(jì)測(cè)量錐 形瓶中溶液在490nm時(shí)的吸光度；5、依次對(duì)不同濃度相應(yīng)的吸光值進(jìn)行記錄，并且

44、根據(jù)記錄結(jié)果繪制曲線圖。2.4 桑葉中多糖的提取工藝 步驟2.4.1 水提法工藝步驟：1、在機(jī)器中加入適量的桑葉研磨，完成后收集起來置于通風(fēng)干燥處等待取用；2、稱取5g步驟1中研磨好的粉末置于容器里面， 隨后加入適量的蒸儲(chǔ)水，加熱 到相應(yīng)的溫度提取多糖；3、靜置一定的時(shí)間以后，收取步驟 2中獲得的提取液置于錐形瓶中；4、采用離心機(jī)對(duì)經(jīng)過乙醇溶液沉淀析出的提取液進(jìn)行離心過濾，最終得到粗多糖物質(zhì)；5、將上述的粗多糖產(chǎn)品進(jìn)行烘干處理，一段時(shí)間后測(cè)量其重量。2.4.2 水提法實(shí)驗(yàn)環(huán)境的設(shè)定通過相關(guān)文獻(xiàn)了解到，利用水提法對(duì)桑葉中的多糖進(jìn)行提取時(shí)， 具體提取過程中 的溫度、時(shí)間、次數(shù)以及液固比都是影響提取

45、結(jié)果的重要因素， 所以針對(duì)這四個(gè) 因素進(jìn)行了單變量對(duì)照試驗(yàn)的設(shè)計(jì)；水提法最佳提取環(huán)境的確定步驟：分別在 50、60、70、80攝氏度的溫度條件下 進(jìn)行提?。粫r(shí)間每個(gè)一個(gè)小時(shí)，分別是 1小時(shí)、2小時(shí)、3小時(shí)、4小時(shí)；提取 液的周比分別為10:1,20:1,30:1,40:1。2.4.3 超聲提取法實(shí)驗(yàn) 步驟1、在機(jī)器中放入數(shù)量干燥的桑葉，完成碾碎研磨后將桑葉拿出置于干燥通風(fēng)的 環(huán)境中；2、將稱量好的5克桑葉粉末放入超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，關(guān)閉裝置門，對(duì)需要的超 聲功率及時(shí)間進(jìn)行設(shè)置；3、經(jīng)過一定的時(shí)間就可以將不同條件下產(chǎn)生的多糖提取液收集到錐形瓶中；4、將適量的乙醇加入到在錐形瓶中使溶液沉淀，再由離心

46、機(jī)對(duì)沉淀進(jìn)行離心過 濾操作后得到多糖的粗產(chǎn)品；5、對(duì)多糖粗產(chǎn)品進(jìn)行烘干操作后，將其靜置一會(huì)兒 ，用電子天平進(jìn)行稱重。2.4.4 超聲法實(shí)驗(yàn)條件設(shè)計(jì)根據(jù)相關(guān)記載了解到，利用超聲法對(duì)桑葉中的多糖進(jìn)行提取時(shí)，具體提取過程中超聲提取的功率、時(shí)間、液固比都是影響提取結(jié)果的重要因素，所以針對(duì)這三個(gè)因素進(jìn)行了單變量對(duì)照試驗(yàn)的設(shè)計(jì)；這里設(shè)定三個(gè)超聲功率分別為200、300、400瓦，然后是設(shè)定提取的時(shí)間，這里分別把三個(gè)時(shí)間設(shè)定為15、20、25分鐘，還有液體固體物質(zhì)的比例，這里分別取其為10、20、30。以此三種參數(shù)分別做對(duì)照試驗(yàn)，我們就能逐步逼近這種方法的最佳實(shí)驗(yàn)條件。2.5 對(duì)純度低的多產(chǎn)產(chǎn)品進(jìn)行純化2.

47、5.1 首先去除蛋白質(zhì)使用合適的蒸儲(chǔ)水來溶解上面獲得的多糖產(chǎn)物，隨后把10%的三氯乙酸溶液添加到其中，借用PH試紙來測(cè)定知道PH在3上下，之后把該溶液放在2c的冰 箱里冷卻24h,隨后把該溶解做離心過濾，對(duì)濾液進(jìn)行減壓使得其達(dá)到濃縮的效 果，隨之我們要使其沉淀，這里加入乙醇即可，乙醇的濃度在 95%左右；之后 需要在低溫下對(duì)溶液進(jìn)行靜置處理， 這里放到冰箱里36小時(shí)即可，最后把該溶 液取出來，把獲得的沉淀物質(zhì)在低溫條件下晾干，就能夠得到高質(zhì)量的桑葉多糖。 2.5.2然后對(duì)活性炭進(jìn)行脫色處理前面制備了多糖成品，下一步要將之溶解在蒸儲(chǔ)水里，溶解完畢之后，便要 加入活性炭粉做回流脫色25min ,得

48、到10%活性炭含量，過濾需要熱環(huán)境，冷 卻待以后使用。2.5.3 使用乙醇進(jìn)行沉淀純化使用合適的蒸儲(chǔ)水來溶解脫色后的多糖成品，在把乙醇溶液加入其中，這里選取的乙醇濃度分別為 50、60、70、80%,在這幾種不同的乙醇濃度下 進(jìn)行過濾，就可以得到不同的沉淀物了，然后進(jìn)行烘干后就能夠獲得質(zhì)量很高的 多糖，待其冷卻以后稱量。2.6 多糖粗產(chǎn)品含量的檢測(cè)稱量完畢之后，取其中最重的多糖成品，取 1mg即可足夠使用，然后像前面的 操作一樣，加入蒸儲(chǔ)水配成標(biāo)準(zhǔn)溶液，標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為0.1mg/mL,然后取出標(biāo)準(zhǔn)溶液2ml,滴入錐形瓶中，加入苯酚，1ml,濃度為5%;然后手搖進(jìn)行震蕩， 等待其震蕩均勻之后，

49、加入濃硫酸，這里要迅速的加入約5mL;然后再次進(jìn)行反復(fù)的振蕩，等待振蕩兩分鐘之后，將其置入恒溫水浴箱中進(jìn)行進(jìn)行持續(xù)加熱， 等待其加熱大約15分鐘后，取出進(jìn)行降溫處理，等待其降低至室溫，然后就可 以測(cè)定樣品的吸光度了，再之后使用吸光度來計(jì)算其含糖量。3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論3.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線桑葉中含有的多糖屬于混合物，不可以直接加以測(cè)量，因此就必須找到其它 的能夠替代三爺里多糖含量的物質(zhì)當(dāng)作合格品， 采用紫外可見分光光度計(jì)檢測(cè)合 格品葡萄糖溶液在430 530之內(nèi)的數(shù)據(jù)，可以把吸光度的光譜圖表示如下：葡萄糖的標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度曲線波長(zhǎng)/RE葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液在紫外可見分光光度計(jì)掃描圖上圖葡萄糖合格品在紫外可見分

50、光光度計(jì)的照射下，形成的掃描圖清晰的表明了其最大吸光度的峰值波長(zhǎng)，即在葡萄糖合格品中添加苯酚-硫酸試劑的情況下，通過紫外光照射，在 490nm波長(zhǎng)位置獲得最大吸光度，因此該波長(zhǎng)位置可 以選作樣品的特征吸收峰。通過對(duì)不同濃度的樣品溶液在選定波長(zhǎng)處的吸光度檢測(cè)值進(jìn)行平均值計(jì)算，將檢測(cè)到的吸光度值定義成縱坐標(biāo)， 葡萄糖溶液濃度定義成橫坐標(biāo)，得到的標(biāo)準(zhǔn) 曲線如下所示：葡萄糖溶液的標(biāo)準(zhǔn)曲線得到回歸方程是：y 14.225x 0.2668, R 0.9471 ,說明在 0.01mg 0.06mg的區(qū)域內(nèi)葡萄糖的溶液濃度與吸光度之間有明顯地線性關(guān)系。3.2 水提法的最佳提取條件的確定3.2.1 最佳提取溫度

51、的確定葡萄糖粗產(chǎn)物質(zhì)量與提取溫度的關(guān)系圖由上圖可知，當(dāng)另外的三個(gè)因子不變時(shí)，提取時(shí)溶液溫度越高，獲得的多糖產(chǎn)物 的量就越大，造成這種結(jié)果的原因是：多糖溶解度隨溫度的上升而提高， 也在一 定程度上使得多糖的傳質(zhì)速度變快，另外桑葉的細(xì)胞壁經(jīng)受不了高溫，容易被破 壞，從而使得多糖更容易析出，在溫度為80c的時(shí)侯，最多可獲得0.105g多糖, 2.10%的提取率；同時(shí)溫度越高提取工藝越高端的現(xiàn)象也是不存在的， 細(xì)胞壁內(nèi) 別的物質(zhì)也被同時(shí)分離出來，也會(huì)影響多糖的含量。整體考慮，在明確最佳提取 溫度的時(shí)候，將其設(shè) 定成80C3.2.2 最佳提取時(shí)間的確定葡萄糖粗產(chǎn)物質(zhì)量與提取時(shí)間的關(guān)系圖頁碼0 30.25

52、2 5 1必0,10忙寒稈0,1240.1220120.1100.1160.1140.1120110.1080.1060.1040511522533.5時(shí)間/h從該圖能夠了解到，如果選取最合適的溫度是80c時(shí)，當(dāng)把液固比和提取次數(shù)當(dāng) 作定量來考慮時(shí)，則得到的多糖產(chǎn)物在開始時(shí)是增加的隨著時(shí)間的推移會(huì)慢慢的減小，2h是它的最合理提取時(shí)間，得到0.122g粗糖產(chǎn)物，2.44%的提取率；得出的結(jié)論是因?yàn)樘崛〉臅r(shí)間太長(zhǎng)了， 細(xì)胞壁內(nèi)別的物質(zhì)也被同時(shí)分離出來，再加上多糖的成分也可能改變了，進(jìn)而影響了它的提取率。掌握時(shí)間不但能降低提取 的時(shí)間，還能夠獲得更高的粗糖提取率，所以這里最合理的時(shí)間定在2h。2.2

53、.3 最佳提取次數(shù)的確定葡萄糖粗產(chǎn)物質(zhì)量與提取次數(shù)的關(guān)系圖0.0500.511.522533m445提取次數(shù)從該圖能夠了解到，如果選取最合適的 提取溫度80c和最佳提取時(shí)間2h時(shí)，周定液固比，通過給實(shí)驗(yàn)得到的多糖在開始時(shí)增加的很快，隨著時(shí)間的推移就會(huì)慢慢的走向平穩(wěn)；2次提取獲得的粗糖產(chǎn)物是0.238g , 4.76%的提取率；4次提取獲得的粗糖產(chǎn)物是0.243g, 4.86%的提取率，和整體的提取率來比較，這增加了0.1% ;在一定的環(huán)境下對(duì)此可能的因素做剖析，細(xì)胞壁內(nèi)分離出來的多糖隨著 時(shí)間的增加慢慢的趨于飽和，必要要增加其他條件或者是改變外界的環(huán)境也許會(huì) 都它的分離物有影響；受工藝的限制影

54、響，2次提取以后就可以縮短時(shí)間，同時(shí) 還可以得到更多的粗糖提取物，所以經(jīng)過實(shí)驗(yàn)吧2定位最合理的提取次數(shù)。2.2.4 最佳提取液固比的確定葡萄糖粗產(chǎn)物質(zhì)量與提取液固比的關(guān)系圖從上圖中能夠了解到，如果另外三個(gè)使用最合理的提取條件時(shí)，則其取得的粗糖產(chǎn)量和液固比成正向關(guān)系，30:1的液固比，能夠得到0.306g粗糖產(chǎn)物，就可以 算出提取率是6.12%; 40:1的液固比，能夠得到0.332g粗糖產(chǎn)物，算出提取率 是6.64%,通過比較能夠知道，這兩個(gè)的提取率都是比較高的；同時(shí)它們的液固 比也是比較大的，另外還要主要實(shí)驗(yàn)操作的實(shí)施性和材料的浪費(fèi)原則，經(jīng)過整體考慮得出，其最合理的液固比應(yīng)該是 30:1 o

55、2.2.5 法最佳提取條件的確定1.1.1 最佳超聲功率的確定葡萄糖粗產(chǎn)物質(zhì)量與超聲功率的關(guān)系圖0.2 ISO 200250300350400450功率/W0.353 O.52U由上圖可知，在其他兩個(gè)工藝條件一定時(shí)，功率逐漸增加時(shí)使用超聲法提取的粗 糖產(chǎn)物的質(zhì)量先增加后減少，當(dāng)功率為300w時(shí)得到的粗糖產(chǎn)物質(zhì)量最多，達(dá)到0.382g,多糖提取率為7.64%;產(chǎn)生上述現(xiàn)象的原因可能是超聲的功率過大時(shí)會(huì) 導(dǎo)致桑葉細(xì)胞壁內(nèi)側(cè)部分成分損壞甚至導(dǎo)致多糖的流失變性，所以應(yīng)該選擇一個(gè)最佳的超聲功率來提取葡萄糖粗產(chǎn)物，根據(jù)實(shí)驗(yàn)可知當(dāng)功率為300w時(shí)得到的粗糖產(chǎn)物最多。1.1.2 最佳超聲時(shí)間的確定葡萄糖粗產(chǎn)物

56、質(zhì)量與超聲時(shí)間的關(guān)系圖華中科技大學(xué)畢業(yè)設(shè)計(jì)（論文）忙想耍由上圖可知，在使用了最佳的超聲波功率后，在提取的液固比一定時(shí)隨著提取時(shí) 間的增長(zhǎng)粗糖產(chǎn)物的質(zhì)量逐漸增加，在此條件下粗糖產(chǎn)物最佳的超聲時(shí)間為25min,此時(shí)超聲波法提取的粗糖產(chǎn)物為 0.414g,提取率達(dá)到8.28%;然而并不 是隨著超聲波照射時(shí)間的增加提取物就會(huì)增加，當(dāng)照射時(shí)間達(dá)到一定限度時(shí)就會(huì)出現(xiàn)和功率過大一樣的問題，一是導(dǎo)致細(xì)胞壁中的某些成分被破壞， 部分雜質(zhì)流 失；導(dǎo)致一些雜志的析出；二是導(dǎo)致多糖變性變質(zhì)；根據(jù)上述現(xiàn)象可知，利用超 聲波法提取多糖的最佳時(shí)間為25min1.1.3 最佳液固比的確定：葡萄糖粗產(chǎn)物質(zhì)量與超聲時(shí)間的關(guān)系圖由上圖可知，在使用了最佳的超聲功率和超聲時(shí)間提取多糖后， 發(fā)現(xiàn)當(dāng)固液比增加時(shí)提取物增多，但是當(dāng)固液比達(dá)到一定值時(shí)提取物的質(zhì)量的增加速度變慢， 當(dāng) 液周比為20:1時(shí)，粗糖產(chǎn)物質(zhì)量為0.446g,提取率為8.92%;當(dāng)液周比為30:1 時(shí)，粗糖產(chǎn)物為0.452g,提取率為9.04%,總提取率提高了約0.1%,鑒于操作 流程、成本和繁瑣性等原因，最后得出的最合適的提取液固比為 20:1根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)，我們得出了以下結(jié)論：在使用超聲法提取桑葉中多糖時(shí) 最佳提取 工藝為：超聲提取功率為 300w,超聲提取時(shí)間為25min,提取所用的液