淺談血小板功能檢測方法

1、    淺談血小板功能檢測方法彭 鈞 黑龍江省哈爾濱市南崗區(qū)婦產(chǎn)醫(yī)院(150080)關(guān)鍵詞：血小板;功能;檢測;中醫(yī)實驗醫(yī)學(xué)血小板功能檢測對早期發(fā)現(xiàn)是否有血栓形成的危險以及血小板相關(guān)疾病的診斷和治療有著重要的意義。本文就血小板功能檢測方法的研究進展作如下綜述。1 血小板功能檢查1.1 血塊收縮試驗(CRT) 血塊收縮時有相應(yīng)的血清析出，計算占原有血量的百分數(shù)。1.2 血小板粘附試驗 一定量血液與一定表面積的異物接觸后，即有相當(dāng)數(shù)目的血小板粘附于異物表面上，測定接觸面后血小板數(shù)之差，可求出占血小板總數(shù)的百分率。1.3 血小板聚集試驗 血小板聚集是血小板的主

2、要功能之一，主要有比濁法、剪切誘導(dǎo)血小板聚集測定法、散射性粒子檢測法、全血電阻抗法、血小板計數(shù)法、微量反應(yīng)板法等。1.4 血小板釋放功能的測定 血小板胞漿內(nèi)含有顆粒、致密顆粒及溶酶體顆粒，當(dāng)加入誘聚劑后會引起這些顆粒內(nèi)容物的釋放，即血小板的釋放。顆粒的釋放主要通過血小板球蛋白(TG)和血小板4因子(PF4)來測定。用商品化的放射性免疫法和ELISA法試劑盒對其進行定量測定已被推廣使用，其結(jié)果對樣品的處理過程高度敏感，但是結(jié)果易受機體代謝功能和血小板破壞的影響。研究發(fā)現(xiàn)P選擇素即血小板顆粒膜蛋白140(GMP140)，表達在靜息血小板膜上。當(dāng)血小板活化后，P選擇素在血小板膜表面表達，并同時釋放顆

3、粒的內(nèi)容物，P選擇素可作為血小板活化的分子標(biāo)志物。在血栓性血小板減少性紫癜(TTP)、子癇等血栓性疾病及糖尿病病人的P選擇素增加。因此，檢測P選擇素陽性血小板數(shù)量是活化血小板最為客觀、直接、特異的檢測方法。致密顆粒的釋放可以通過5-羥色胺(5HT)或腺苷酸的測定加以判斷。5HT測定應(yīng)用熒光光度法測定，與同樣處理的標(biāo)準(zhǔn)物比較，求得血小板或血漿中5HT含量，用于篩選血小板貯存池缺陷導(dǎo)致膠原誘導(dǎo)的血小板致密顆粒釋放障礙、先天性或后天性TXA2合成障礙、ADP受體缺陷等疾病。應(yīng)用熒光聚集儀可同時測定血小板聚集和ATP的釋放反應(yīng)。1.5 血小板其他功能檢測 血小板其他功能的檢測包括血小板凝血活性檢測、血

4、小板鈣流檢測以及血小板膜糖蛋白的檢測等。血小板第3因子利用試驗用于檢測血小板凝血活性，使用正常人和病人富含血小板血漿(PRP)和乏血小板血漿(PPP)相互交叉配合，以白陶土作活化劑促使PF3形成來測定血漿凝固時間，通過比較各組時差，從而得出PF3是否有缺陷，臨床上用于診斷先天性PF3缺乏癥、血小板無力癥、骨髓增生異常綜合征等。大部分血小板內(nèi)游離的Ca2+貯存在致密管道系統(tǒng)內(nèi)，血小板活化后，Ca2+從致密管道系統(tǒng)釋放至胞質(zhì)內(nèi)，細胞質(zhì)內(nèi)Ca2+水平增加。利用熒光探針標(biāo)記血小板內(nèi)鈣離子，在誘導(dǎo)劑作用下，血小板的鈣離子通道打開，使用共聚焦顯微鏡觀察血小板熒光的強弱變化并經(jīng)計算機控制系統(tǒng)及圖像分析系統(tǒng)觀

5、察血小板濃度和鈣流的變化。測定胞內(nèi)Ca2+的方法可用于臨床診斷與Ca2+代謝有關(guān)的血小板疾病。血小板膜含有多種糖蛋白，通過SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)可以將血小板溶液中的糖蛋白按分子量大小進行分離。血小板膜GPIb和GPIIb IIIa復(fù)合物的測定用于巨大血小板綜合癥和血小板無力癥的診斷。2 血小板抗體血小板抗體可以引起多種臨床疾病或癥狀，如同種或自身免疫性血小板減少癥，輸血后紫癜，血小板輸注無效等。血小板抗體的檢測方法，已報道有多種，如血小板免疫熒光試驗、固相紅細胞粘附試驗(SPRCA)、單克隆抗體特異性血小板抗原固定術(shù)(MAIPA)、改進的抗原捕獲酶聯(lián)免疫吸附試驗(MACE)、流式

6、細胞術(shù)法等。血小板相關(guān)抗體主要是PAIgG，還有PAIgM和PAIgA，有資料證明，IgM具有較高的結(jié)合價和凝集能力，只需一個分子IgM抗體即足以激活補體，在決定血小板壽命中很重要。造成血小板輸注無效的主要原因之一是血小板表面上眾多復(fù)雜相關(guān)抗原及自身特有抗原與相應(yīng)抗體的同種免疫作用。采用SPISA法(供者血小板與受者血清反應(yīng))可為患者選擇配合性血小板輸注，可提高療效，也可選擇最不配合的血小板輸注在特殊治療上。3 網(wǎng)織血小板檢測網(wǎng)織血小板代表由骨髓巨核細胞釋放入外周血最新生成的血小板。在失血或血小板破壞的情況下，網(wǎng)織血小板水平明顯增高，它與網(wǎng)織紅細胞一樣是反應(yīng)骨髓血小板狀態(tài)極有價值的指標(biāo)之一。外

7、周血中網(wǎng)織血小板的比例和數(shù)量是反映體內(nèi)血小板生成能力極有價值的指標(biāo)。隨著流式細胞儀的使用，通過CD41單抗的特異性標(biāo)記以及流動計數(shù)10000個血小板準(zhǔn)確而又快速地檢測出含RNA的血小板。網(wǎng)織血小板檢測的精確度也大大提高。4 血小板血型血小板表面具有復(fù)雜的血型抗原，這些抗原是由遺傳決定的，通常同種異體抗原分為兩類。血小板和其它細胞共有的抗原：ABO系統(tǒng)的抗HLA類的抗原。血小板同種異體抗原主要能引起五種臨床綜合癥：胎兒及新生兒同種免疫血小板減少癥、輸血后紫癜、血小板輸血無能癥、被動免疫血小板減少癥及移植相關(guān)的同種免疫血小板減少癥。血小板同種異體抗原定型技術(shù)主要有：血清學(xué)定型、基因定型，分子基因方法便于同種異體抗原多態(tài)性的定型。綜上所述，出凝血疾病的病因檢測，除應(yīng)注意常規(guī)的血小板計數(shù)及功能檢測外還應(yīng)重視新指標(biāo)的檢查，某些新的檢測指標(biāo)更有利于