保健食品中摻加西藥及類緣物成分之檢驗(yàn)

1、1保健食品中摻加保健食品中摻加西藥及類緣物成分之檢驗(yàn)西藥及類緣物成分之檢驗(yàn)林哲輝林哲輝20102010年年5 5月月1414、1717日日2報報 告告 大大 綱綱壹、前言壹、前言貳、材料與方法貳、材料與方法參、未知類緣物之探討參、未知類緣物之探討肆、經(jīng)驗(yàn)分享肆、經(jīng)驗(yàn)分享- -優(yōu)質(zhì)管理優(yōu)質(zhì)管理伍、伍、結(jié)果結(jié)果3n 近年來 保健觀念 深植人心，國際市場上保健食品盛行，其安全性也備受各國重視。n 一般消費(fèi)者認(rèn)定食品是安全無副作用。n 或有業(yè)者 為求速效 ，於保健食品中摻加西藥。n 由於對使用之西藥劑量、藥物間相互作用不瞭解，消費(fèi)者於不知情下長期服用，危害堪慮。n 為保障消費(fèi)者健康， 未許可於保健食品

2、中摻西藥。壹、前壹、前 言言4貳、貳、材料與方法材料與方法一、檢體來源一、檢體來源衛(wèi)生機(jī)關(guān)抽(稽)查、衛(wèi)生機(jī)關(guān)之消費(fèi)者服務(wù)中心、司法檢警調(diào)機(jī)關(guān)、關(guān)稅局、其他5二二、選定檢驗(yàn)類別、選定檢驗(yàn)類別 因檢體來源甚為複雜，潛在性基質(zhì)干擾未知，且申請檢驗(yàn)者 常未標(biāo)明處方組成，摻加之西藥 標(biāo)的成分 亦未知，且常摻加與治療效能無關(guān)未知成分，檢驗(yàn)頗為困難。 為求 系統(tǒng)化快速檢驗(yàn)，就治療效能、副作用或指定檢驗(yàn)項(xiàng)目，選定(40)檢驗(yàn)類別，推測可能摻加的西藥。61.治感冒鎮(zhèn)咳、過敏性鼻炎類治感冒鎮(zhèn)咳、過敏性鼻炎類11.健胃類健胃類2.治氣喘類治氣喘類12.調(diào)經(jīng)理帶類調(diào)經(jīng)理帶類3.治風(fēng)濕鎮(zhèn)痛類治風(fēng)濕鎮(zhèn)痛類13.治腎臟病

3、類治腎臟病類4.類固醇類類固醇類14.蛋白同化賀爾蒙類蛋白同化賀爾蒙類5.精神神經(jīng)安定類精神神經(jīng)安定類15.抗癲癇及鎮(zhèn)痙類抗癲癇及鎮(zhèn)痙類6.小兒驚風(fēng)類小兒驚風(fēng)類16.止痛類止痛類7.解毒抗過敏類解毒抗過敏類17.治糖尿病類治糖尿病類8.降壓利尿類降壓利尿類18.痔瘡類痔瘡類9.補(bǔ)腎滋養(yǎng)類補(bǔ)腎滋養(yǎng)類19.治尿酸及痛風(fēng)類治尿酸及痛風(fēng)類10.減肥類減肥類20.治心臟病類治心臟病類檢檢 驗(yàn)驗(yàn) 類類 別別 721.跌打損傷類跌打損傷類31.保眼類保眼類22.養(yǎng)肝類養(yǎng)肝類 32.婦科外用洗劑婦科外用洗劑23.瀉劑類瀉劑類 33.治血管硬化類治血管硬化類24.利尿類利尿類34.動情激素類動情激素類25.治狐

4、臭類治狐臭類35.治甲狀腺機(jī)能缺陷類治甲狀腺機(jī)能缺陷類26.外用膏粉類外用膏粉類36.春藥麻醉藥類春藥麻醉藥類27.治禿頭類治禿頭類 37.興奮劑類興奮劑類28.收澀小便類收澀小便類38.外用春藥類外用春藥類29.治鼻子過敏類治鼻子過敏類( (外用外用) ) 39.利膽類利膽類30.強(qiáng)心類強(qiáng)心類40.鎮(zhèn)吐類鎮(zhèn)吐類8三三、檢驗(yàn)方法檢驗(yàn)方法 取約一日服用量檢體，經(jīng)處理後加適量95乙醇浸泡，以超音波於室溫振盪萃取30分鐘，靜置，取上清液過濾供作檢液。取適量檢液，點(diǎn)注於TLC板 (Merck silica gel 60 F254)，以五種各為酸性、鹼性及不同極性之中性溶媒，於展開槽展開分離。93. T

5、LC板取出風(fēng)乾後，4. 以紫外燈254 nm及366 nm檢視，5. 刮取層析板上可疑斑點(diǎn)，加95% 乙醇，超 音波振盪溶解，6. 置離心機(jī)離心。7. 所得濾液再以紫外光分光光度計測其吸收圖譜。10展開溶媒系展開溶媒系體積比體積比正丁醇：水：冰醋酸正丁醇：水：冰醋酸7：2：1乙酸乙酯：甲醇：氨水乙酸乙酯：甲醇：氨水8：1：1氯仿：氯仿：95%乙醇乙醇9：1氯仿：乙酸乙酯氯仿：乙酸乙酯1：1乙酸乙酯：乙醚乙酸乙酯：乙醚4：1118. 並與西藥標(biāo)準(zhǔn)品圖譜比對。篩選出摻加之可疑成分，再次與西藥對照標(biāo)準(zhǔn)品比對展開分離，9. 視成分特性，噴上適當(dāng)之呈色劑，10. 觀察呈色後斑點(diǎn)顏色及Rf值，是否與對照標(biāo)

6、準(zhǔn)品一致。11.另配合以GC/MS、HPLC或LC/MS/MS進(jìn)行追查確認(rèn)。12呈呈 色色 劑劑 nDragendorffs spray reagentn50%Sulfuric Acid-Ethanol spray reagent nIodine vapor nTetrazolium blue spray reagentn p-Dimethylaminobenzaldehyde spray reagent nNinhydrin spray reagent nAnisaldehyde-Sulfuric Acid spray reagent n2,4-Dinitrophenylhydrazine

7、spray reagent 13np-Dimethylaminocinnamaldehyde spray reagent n5% Ferric Chloride spray reagent nIodoplatinate spray reagent nIodoplatinate （acidified）spray reagent n1% Mercurous Nitrate spray reagent nPotassium Permanganate spray reagent nPotassium Permanganate（acidified）spray reagent n1%Vanillin-Su

8、lfuric Acid spray reagent14資資 料料 庫庫n 合成藥物UV圖 : 419 種n 藥材成分UV圖 : 61種n GC/MS : 519 種(實(shí)驗(yàn)室自行建置) ， 275000 種(Wiley) ， 6000種 (PMW) ，n LC/MS/MS : 367種(實(shí)驗(yàn)室自行建置)15 摻西藥檢驗(yàn)，因不斷改進(jìn)方法，收集標(biāo)準(zhǔn)品，建立檔案，使檢驗(yàn)工作 得以迅速精準(zhǔn)的進(jìn)行。 近來保健食品盛行，經(jīng)檢驗(yàn) 除部分添加許可上市藥品外，尚有未經(jīng)許可之類緣物成分。 類緣物因首次出現(xiàn)，無法先行價購標(biāo)準(zhǔn)品建立數(shù)據(jù)比對，且標(biāo)的成分物化性、其他添加成分 及 基質(zhì)潛在干擾不明，異於例行鑑別檢驗(yàn)； 需以

9、基礎(chǔ)化學(xué)手法探討，檢體經(jīng)純化、分離後 ，所得標(biāo)的成分純化物，再測定各種儀器圖 譜，反覆推斷，方能確認(rèn)結(jié)構(gòu)。參參、未知類緣物之探討、未知類緣物之探討一、緣一、緣 起起161. Acetildenafil （威而鋼 sildenafil analogue ）2. Piperidenafil （樂威壯 vardenafil analogue ）3. Hydroxyhomosildenafil （威而鋼 sildenafil analogue ）4. N-Desmethylsibutramine （諾美婷 sibutramine analogue ）二、類緣物二、類緣物 檢出實(shí)例檢出實(shí)例17Std20

10、0210220230240250260270280290300310320330340350nm0100%Sildenafil-0730 266 (4.437) Cm (262:275)3: Diode Array 1.28e5226.43210.43292.430531200210220230240250260270280290300310320330340350nm0100%9309000-r 363 (6.065) Cm (361:398)6: Diode Array 3.80e5279.43233.43 UV spectra of sildenafil and acetildenafi

11、l (1) sildenafilacetildenafil (1) 18Std100120140160180200220240260280300320340360380400420440460480500m/z0100%Sildenafil-0730 117 (4.462) Cm (114:122)2: Daughters of 475ES+ 8.02e6475.39100.28311.21283.17163.21269.21377.31313.370531100125150175200225250275300325350375400425450475500m/z0100%9309000-r

12、67 (6.062) Cm (65:70-47:62)3: Daughters of 467ES+ 2.29e7111.3297.29467.68127.35127.54325.43297.26166.34296.38353.42396.62355.62449.63420.45467.99sildenafil acetildenafil (1) The LC/MS/MS ES+ daughter ion scan of sildenafil and acetildenafil (1) 19100/5/33003103203303403503603703803904004104204304404

13、50460470480490500m/z0100%GJ6-4G-1P-ES-1 1 (0.225)Scan ES- 1.60e9465.4336.3437.4466.4467.4479.4100/5/3300310320330340350360370380390400410420430440450460470480490500m/z0100%GJ6-4G-1P-ES+1 1 (0.308)Scan ES+ 1.61e9467.3468.3489.2M-1: 465 m/zM+1: 467 m/z The LC/MS/MS ES+ / ES- mass scan of acetildenafil

14、 (1) Whats this compound ?20Conc. Partition with CH2Cl2 / H2OAlkalify : ammonia water pH = 89MeOH extracted, filtrated 1 : Partiton SampleMeOH ext. residuePartitioned with CH2Cl2 / H2O Acidify : 2 % HCl pH = 56 CH2Cl2 Layer H2O LayerConc. CH2Cl2 Layer H2O Layer Conc. Filtrated, Recrystalized by CH2C

15、l2 TLC checkedWashed by H2Oacetildenafil (1) , white powder CH2Cl2 Layer H2O Layer 212003.10.14100150200250300350400450500m/z0100%0100%Vadenafil-2 204 (5.159) Cm (188:227-144:181)1: Daughters of 489ES+ 2.27e7151.2113.3312.2299.2284.1169.2489.2376.1329.2HH-7-1-LCa 245 (4.129) Cm (224:307-98:181)1: Da

16、ughters of 460ES+ 4.92e7151.2169.2312.3284.2256.2460.4329.3The LC/MS/MS ES+ daughter ion scan of vardenafil and piperidenafil (2) piperidenafil (2) vardenafil M+1: 460 m/z22UV spectra of vardenafil and piperidenafil (2)(2)232 : Column chromatography EtOH ext. residueSampleSi-gel column CHCl3 MeOH95%

17、EtOH extracted filtrated Conc.Piperidenafil (2), white crystalTLC, Conc. Recrystallized by MeOH 24Std100120140160180200220240260280300320340360380400420440460480500m/z0100%Sildenafil-0730 117 (4.462) Cm (114:122)2: Daughters of 475ES+ 8.02e6475.39100.28311.21283.17163.21269.21377.31313.37sildenafil

18、Hydroxyhomosildenafil (3) The LC/MS/MS ES+ daughter ion scan of sildenafil and hydroxyhomosildenafil (3) 9308388-100 x100125150175200225250275300325350375400425450475500525550m/z0100%519-9308388-1 50 (5.460) Cn (Top,4, Ht); Sm (Mn, 2x0.75); Sb (1,40.00 ); Cm (49:62-(64:69+35:45)6: Daughters of 505ES

19、+ 5.16e699.397.4112.4487.4129.3311.4283.4130.3282.2226.4193.1168.1256.3299.3377.4313.4331.3461.4418.4392.4444.4505.4533.0543.7M+1: 505 m/z25Std200210220230240250260270280290300310320330340350nm0100%Sildenafil-0730 266 (4.437) Cm (262:275)3: Diode Array 1.28e5226.43210.43292.43 UV spectrum of sildena

20、fil and hydroxyhomosildenafil (3) sildenafilhydroxyhomosildenafil (3) 9308389-100 x200210220230240250260270280290300310320330340350nm0100%519-9308389-1 371 (6.190)7: Diode Array 6.87e5226.4293.4UV 相似？相似？263 : Crystallization powder sample extracted with 95% ethanol ultrasonic shaking at room temp. f

21、or 30 minutes filtrated sample extract was stored at 4C overnight Hydroxyhomosildenafil (3), (white crystal )274060801001201401601802002202402602800100020003000400050006000700080009000m/z-Abundance#412: sibutramine11472581251011372221581941788420623646250264278406080100120140160180200220240260050010

22、0015002000250030003500400045005000550060006500700075008000850090009500m/z-Abundance#518: Sibutramine analogue (N-1-1-(4-chlorophenyl)cyclob10058441371151257520816518090151266192222236250 The GC/MS fragmentation of sibutramine and N-Desmethylsibutramine(4)sibutramineN-Desmethylsibutramine(4)-14 m/z11

23、41007258- 42 m/z28N-Desmethylsibutramine(4)sibutramineUV spectrum of sibutramine and N-Desmethylsibutramine (4)294 :Partiton Evaporated to dryness in vacuum oven N-Desmethylsibutramine (4), pale yellow liquidPowder sampleSolved in H2OWashed by H2OPassed over anhydrous MgSO4Alkalized with NaOH to pH

24、8 9Filtrate, partitioned with CH2Cl2H2O layer CH2Cl2 layerH2O layer CH2Cl2 layer30未知 標(biāo)的成分 經(jīng)分離純化測定物化性核磁共振儀（1H-NMR, 13C-NMR, COSY, DEPT, HMQC, HMBC）紅外線吸收光譜儀（IR ）質(zhì)譜（HRMS, FAB） X-ray, EA等圖譜判讀 確定構(gòu)造三、結(jié)三、結(jié) 構(gòu)構(gòu) 鑑鑑 定定( (案例案例) ) 31 The EIMS fragmentation of acetildenafil (1)M.W.466Ex : 132 1H NMR spectrum of a

25、cetildenafil (1)N-CH2-(H-23)N-CH2-(H-30)-CH3(H-31)10113129252722191520145648931ONNONNNHNO33 13C NMR spectrum of acetildenafil (1)C=O(C-22)2O C10113129252722191520145648931ONNONNNHNOC-23C-3019564 5134 HMQC spectrum of acetildenafil (1)10113129252722191520145648931ONNONNNHNO64 512.33.72O Cmet

26、hylene35 COSY spectrum of acetildenafil (1)10113129252722191520145648931ONNONNNHNON-CH2- (H-30)-CH3 (H-31) 2.30.9ethyl-CH3 (H-31) N-CH2- (H-30)36 HMBC spectrum of acetildenafil (1)10113129252722191520145648931ONNONNNHNOCOSYethylC=O195N-CH2-N-CH2-Ar-H37Acetildenafil (1)C25H34O3N6 M.W. 466 ONNNNNH NOS

27、OOSildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474四、類四、類 緣緣 物物 結(jié)結(jié) 構(gòu)構(gòu) 38Hydroxyacetildenafil C25H34N6O4 M.W. 482 ONNNNNH NOSOOSildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474ONNHOONHNNNO39HomosildenafilC23H32N6O4S M.W. 488 ONNNNNH NOSOOSildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 47440Hydroxyhomosildenafil (3)C23H3

28、2O5N6S M.W. 504 ONNNNNH NOSOOSildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 47441GendenafilC19H22N4O3 M.W. 354HNNNNCH3CH3CH3OOCH3O ONNNNNH NOSOOSildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 47442ThiosildenafilC22H30N6O3S2 M.W. 490 ONNNNNHNOSOOSildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474SNNSNNNNOOOH43Thiohomosilde

29、nafilC23H32N6O3S2 M.W. 504 ONNNNNHNOSOOSildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474SNNSNNNNOOOH44Hydroxythiohomosildenafil ONNNNNHNOSOOSildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474ONHNNNSNNOOSHOC23H32N6O4S2 M.W. 52045Thioaildenafil ONNNNNHNOSOOSildenafil（Viagra 威而鋼） C22H30N6O4S M.W. 474SNNSNNNNOOOHC23H

30、32N6O3S2 M.W. 50446Piperidenafil (2)Vardenafil（Levitra 樂威壯） C23H32N6O4S M.W. 488C22H29O4N5S M.W. 459 NNSONNNNOOHO47Vardenafil（Levitra 樂威壯） C23H32N6O4S M.W. 488C17H20N4O2 M.W. 312 NNSONNNNOOHOVardenafil 類緣物類緣物ONNNNOH48Vardenafil（Levitra 樂威壯） C23H32N6O4S M.W. 488C24H31N5O3 M.W. 437NNSONNNNOOHOVardenaf

31、il 類緣物類緣物HNNNNOCH3CH3NOOCH349AminotadalafilC21H18N4O4 M.W. 390 Tadalafil (犀利士)C22H19N3O4 M.W. 38950N-Desmethylsibutramine (4)NCl Sibutramine 諾美婷C17H26NCl M.W. 279.5C16H24NCl M.W. 265.5NClH51N-didesmethylsibutramineNCl Sibutramine 諾美婷C17H26NCl M.W. 279.5C15H22NCl M.W. 251.5ClNH252 業(yè)者之產(chǎn)品生產(chǎn)，歷經(jīng)研發(fā)過程，其原料品

32、質(zhì)及規(guī)格均能掌握，鼓勵於生產(chǎn)源頭自主管理，以達(dá)產(chǎn)品之優(yōu)質(zhì)； 本局開發(fā)之薄層層析法(TLC)，詳中藥檢驗(yàn)方法專輯四、七及十，可作為 原料購入 之品管參考； TLC斑點(diǎn)可雙向確認(rèn)： 是該有的處方成分？ 或原料污染，不該有的添加西藥成分？ 肆、肆、經(jīng)驗(yàn)分享經(jīng)驗(yàn)分享- -優(yōu)質(zhì)管理優(yōu)質(zhì)管理簡便概略53為替民眾健康安全把關(guān)，強(qiáng)化檢驗(yàn)技術(shù)，以基礎(chǔ)科學(xué)方法抽絲剝繭、追根究底。摻西藥情形，多年來未有明顯改善；由檢體來源，顯示部分國人仍有接受非法管道及聽從非醫(yī)藥專業(yè)指示服藥之習(xí)慣；宜由源頭管理面把關(guān)為主，檢驗(yàn)面為輔，加強(qiáng)宣導(dǎo)勿服用來源不明或標(biāo)示不清的產(chǎn)品。檢出類緣物案例，以宣稱具減肥及壯陽作用最多。由種類多樣又新

33、穎化的趨勢，顯示產(chǎn)製類似已上市藥品主結(jié)構(gòu)之類緣物成分，以規(guī)避檢驗(yàn)之心態(tài)。確定的新(類緣物)成分，建立各圖譜檔案，如 TLC, UV, GC/MS, LC/MS/MS 等，作為摻西藥例行檢查比對用。為兼顧 消費(fèi)者保護(hù)及交流學(xué)習(xí)，結(jié)果發(fā)表於學(xué)術(shù)期刊、撰寫檢驗(yàn)叢書及建置本局網(wǎng)站。伍、結(jié)伍、結(jié) 果果54一、藥檢局網(wǎng)頁一、藥檢局網(wǎng)頁.tw.tw二、藥物食品叢書二、藥物食品叢書 中藥檢驗(yàn)方法專輯中藥檢驗(yàn)方法專輯四、七、十四、七、十 ( (摻西藥檢驗(yàn)摻西藥檢驗(yàn)) )三、藥檢局三、藥檢局 調(diào)查研究年報刊登調(diào)查研究年報刊登四、藥物食品分析期

34、刊四、藥物食品分析期刊(SCI)(SCI)發(fā)表發(fā)表壯陽藥檢驗(yàn)資訊壯陽藥檢驗(yàn)資訊55表：表：藥物食品檢驗(yàn)局藥物食品檢驗(yàn)局 調(diào)查研究年報調(diào)查研究年報 例年摻西藥分析例年摻西藥分析年份題 目號數(shù)：頁數(shù)96九十五年度保健食品檢出西藥成分之分析25：90-9796九十五年度調(diào)製劑中藥檢出西藥成分之分析25：80-8995九十三及九十四年度調(diào)製劑中藥檢出西藥成分之分析24：166-17995九十四年度調(diào)製劑中藥檢出西藥成分之分析24：121-13694九十三年度調(diào)製劑中藥檢出西藥成分之分析23：64-7993九十二年度中藥製劑檢出西藥情形之分析22：50-6892九十一年度調(diào)製劑中藥檢出西藥情形之分析21

35、：122-13691九十年度調(diào)製劑中藥檢出西藥情形之分析20：178-19490八十八下半年及八十九年度調(diào)製劑中藥檢出西藥情形之分析19：182-19589八十八年度調(diào)製劑中藥檢出西藥情形之分析18：54-6488八十七年度調(diào)製劑中藥檢出西藥情形之分析17：114-12287八十六年度調(diào)製劑中藥檢出西藥情形之分析16：43-5086八十五年度調(diào)製劑中藥檢出西藥情形之分析15：90-9885歷年來中藥檢出西藥成分及來源變遷分析14：223-232561Lai, K. C., Liu, Y.C., Tseng, M. C. and Lin, J. H. 2006. Isolation and Id

36、entification of a Sildenafil Analogue Illegally Added in Dietary Supplements. J. Food Drug Anal.14: 19-23.2Lai, K. C., Liu, Y.C., Tseng, M. C., Lin, Y. L. and Lin, J. H. 2007. Isolation and identification of a vardenafil analogue in a functional food marketed for penile erectile dysfunction J. Food

37、Drug Anal.15: 133-138.3Lai, K. C., Liu, Y.C., Tseng, M. C., Lin, Y. L. and Lin, J. H. 2007. Isolation and identification of a sibutramine analogue in a healthy food for weight loss J. Food Drug Anal.15: 20-24.4Lai, K. C., Liu, Y.C., Tseng, M. C., Lin, Y. L. and Lin, J. H. 2007. Isolation and Identification of a Vardenafil Analogue In a Dietary Supplement J. Food Drug Anal.15: 220-227.5Lin, M.C., Liu, Y.C. and Lin, J. H. 2006. Identification of a sildenafil analo