培養(yǎng)基的制作

1、第四章 培養(yǎng)基的制作第一節(jié)第一節(jié) 母種培養(yǎng)基制作母種培養(yǎng)基制作第二節(jié)第二節(jié) 原種、栽培種培養(yǎng)基制作原種、栽培種培養(yǎng)基制作第三節(jié)第三節(jié) 液體菌種制作技術(shù)液體菌種制作技術(shù) 教學(xué)目的：教學(xué)目的：熟練掌握各級(jí)培養(yǎng)基的制作方法 。教學(xué)重點(diǎn)：教學(xué)重點(diǎn)：培養(yǎng)基的制作方法 。第一節(jié)第一節(jié) 母種培養(yǎng)基的制作母種培養(yǎng)基的制作一、菌種培養(yǎng)基一、菌種培養(yǎng)基( (一一) )按營養(yǎng)物質(zhì)種類分類按營養(yǎng)物質(zhì)種類分類 l.l.天然培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基 常用的生物材料有馬鈴薯、胡蘿常用的生物材料有馬鈴薯、胡蘿卜、蠶蛹粉、豆芽汁、花生餅粉、玉米粉、酵母等。卜、蠶蛹粉、豆芽汁、花生餅粉、玉米粉、酵母等。適合于各類微生物的生長適合于各類微

2、生物的生長 2.2.合成培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基 是指用已知成分和數(shù)量的化合物配是指用已知成分和數(shù)量的化合物配制而成的培養(yǎng)基。適用研究制而成的培養(yǎng)基。適用研究 3.3.半合成培養(yǎng)基半合成培養(yǎng)基 利用天然物質(zhì)作為碳、氮源及維利用天然物質(zhì)作為碳、氮源及維生素的來源另加一些無機(jī)鹽類配制而成生素的來源另加一些無機(jī)鹽類配制而成( (二二) )按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分類按培養(yǎng)基的物理狀態(tài)分類 1.1.液體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基 不加瓊脂，多用于生理生化方面研究不加瓊脂，多用于生理生化方面研究, ,培養(yǎng)培養(yǎng)液體菌種等。液體菌種等。2.2.固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基 凝固劑的量凝固劑的量, ,瓊脂冬季為瓊脂冬季為1.5%-2.0%,

3、1.5%-2.0%,夏夏季季2.2%-2.3%2.2%-2.3%。 3.3.半固體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基 含有較少量瓊脂含有較少量瓊脂(0.2%-0.5%)(0.2%-0.5%)的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基, ,使培養(yǎng)基未達(dá)到固態(tài)而呈粘稠狀態(tài)。使培養(yǎng)基未達(dá)到固態(tài)而呈粘稠狀態(tài)。 二、母種培養(yǎng)基配方二、母種培養(yǎng)基配方： 1.1.土豆土豆200g200g、糖、糖20g20g、瓊脂、瓊脂18g18g、水、水1000ml1000ml2.2.去皮馬鈴薯去皮馬鈴薯200g200g、葡萄糖、葡萄糖20g20g、瓊脂、瓊脂18-20g18-20g、水、水1000ml1000ml、PHPH值自然，另外添加：麩皮值自然，另外添加：

4、麩皮20g20g、玉米面、玉米面5g5g、黃、黃豆粉豆粉5g5g、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鉀2g2g，硫酸鎂，硫酸鎂2g2g，V VB1B11 1片（片（10mg10mg）。此）。此配方適用于大多數(shù)菌種，金針菇、黑木耳、靈芝生長尤其配方適用于大多數(shù)菌種，金針菇、黑木耳、靈芝生長尤其茁壯?？勺骱谀径鷱?fù)壯培養(yǎng)基。茁壯?？勺骱谀径鷱?fù)壯培養(yǎng)基。3.3.去皮馬鈴薯去皮馬鈴薯200g200g、葡萄糖、葡萄糖20g20g、瓊脂、瓊脂18-20g18-20g、水、水1000ml1000ml、PHPH值自然，另外添加：麩皮值自然，另外添加：麩皮20g20g、玉米面、玉米面5g5g、黃、黃豆粉豆粉5g5g、磷酸二氫鉀

5、、磷酸二氫鉀2g2g，硫酸鎂，硫酸鎂2g2g，V VB1B11 1片（片（10mL10mL），平），平菇子實(shí)體菇子實(shí)體100g100g。此配方適用于大多數(shù)菌種生長。做平菇的。此配方適用于大多數(shù)菌種生長。做平菇的復(fù)壯培養(yǎng)基效果顯著。復(fù)壯培養(yǎng)基效果顯著。4.4.去皮馬鈴薯去皮馬鈴薯200g200g、葡萄糖、葡萄糖20g20g、瓊脂、瓊脂18-20g18-20g、水、水1000ml1000ml、PHPH值自然，另外添加：麩皮值自然，另外添加：麩皮20g20g、玉米面、玉米面5g5g、黃、黃豆粉豆粉5g5g、磷酸二氫鉀、磷酸二氫鉀2g2g，硫酸鎂，硫酸鎂2g2g，V VB1B11 1片（片（10mg1

6、0mg）1 1片片，香菇子實(shí)體，香菇子實(shí)體100g100g。此配方適用于大多數(shù)菌種生長，可做。此配方適用于大多數(shù)菌種生長，可做香菇的復(fù)壯培養(yǎng)基，效果顯著。香菇的復(fù)壯培養(yǎng)基，效果顯著。（一）營養(yǎng)液制作（一）營養(yǎng)液制作1.1.準(zhǔn)備工作準(zhǔn)備工作三、制作方法三、制作方法 2. 2.稱量、材料預(yù)處理稱量、材料預(yù)處理按配方準(zhǔn)確稱量各營養(yǎng)物質(zhì)。將馬鈴薯去皮、按配方準(zhǔn)確稱量各營養(yǎng)物質(zhì)。將馬鈴薯去皮、挖掉芽眼后稱量挖掉芽眼后稱量200g200g，切成，切成1cm1cm見方的小塊。瓊脂見方的小塊。瓊脂剪碎后用水浸泡。剪碎后用水浸泡。 3. 3.熬煮熬煮將切好的馬鈴薯塊加適量水后放入電飯鍋中，將切好的馬鈴薯塊加適量

7、水后放入電飯鍋中，煮至酥而不爛。煮至酥而不爛。 4. 4.過濾、加可溶藥物過濾、加可溶藥物 用雙層沙布過濾，取濾汁，放在電飯鍋中用雙層沙布過濾，取濾汁，放在電飯鍋中加加 入糖入糖 5. 5.熬瓊脂、定容熬瓊脂、定容 在沸騰狀態(tài)下加入瓊脂，直到瓊脂完全在沸騰狀態(tài)下加入瓊脂，直到瓊脂完全溶化為止，定容至溶化為止，定容至1000ml1000ml。 （二）營養(yǎng)液分裝（二）營養(yǎng)液分裝 1.1.用注射器分裝用注射器分裝 2.2.分裝標(biāo)準(zhǔn)分裝標(biāo)準(zhǔn): :分裝量為試管長度的分裝量為試管長度的1/41/41/51/5。注意培養(yǎng)基不能沾污試管口。注意培養(yǎng)基不能沾污試管口。3.3.塞棉塞塞棉塞棉塞松緊適度，棉塞松緊適

8、度，1/31/3在管外，在管外，2/32/3在管內(nèi)。在管內(nèi)。4.4.扎捆扎捆7-107-10支試管捆在一起，棉塞上包好防水紙，直支試管捆在一起，棉塞上包好防水紙，直立放入高壓滅菌鍋中。立放入高壓滅菌鍋中。 ( (四四) )擺斜面擺斜面滅菌結(jié)束后鍋蓋開滅菌結(jié)束后鍋蓋開1/51/5的小縫，用余熱烘干報(bào)紙和的小縫，用余熱烘干報(bào)紙和棉塞，然后擺斜面。斜面長是試管總長的棉塞，然后擺斜面。斜面長是試管總長的1/21/2 （三）滅菌處理（三）滅菌處理 在在1.01.5 kg/cm1.01.5 kg/cm2 2壓力下維持壓力下維持20-30min20-30min。 ( (四四) )擺斜面擺斜面滅菌結(jié)束后鍋蓋開

9、滅菌結(jié)束后鍋蓋開1/51/5的小縫，用余熱烘干報(bào)紙和的小縫，用余熱烘干報(bào)紙和棉塞，然后擺斜面。斜面長是試管總長的棉塞，然后擺斜面。斜面長是試管總長的1/21/2 第二節(jié)第二節(jié) 原種、栽培種培養(yǎng)基制作原種、栽培種培養(yǎng)基制作一、常見原種配方一、常見原種配方木屑培養(yǎng)基配方木屑培養(yǎng)基配方細(xì)木屑細(xì)木屑80%80%，麩皮，麩皮12%12%，玉米面，玉米面1%1%，黃豆粉，黃豆粉2%2%，過磷酸鈣，過磷酸鈣1.5%1.5%，紅糖，紅糖0.5%0.5%，尿素，尿素0.4%0.4%，硫酸鎂，硫酸鎂0.1%0.1%，石灰，石灰1%1%，石膏，石膏2%2%，料：水，料：水=1=1：1.0-1.21.0-1.2。此配

10、方適合香菇、黑木耳、平。此配方適合香菇、黑木耳、平菇原種生長，菌絲粗壯潔白。菇原種生長，菌絲粗壯潔白。玉米芯培養(yǎng)基配方玉米芯培養(yǎng)基配方玉米芯玉米芯80%80%，麩皮，麩皮14%14%，糖，糖0.5%0.5%，過磷酸鈣，過磷酸鈣1%1%，石灰，石灰2%2%，尿素尿素0.5%0.5%，玉米面，玉米面2%2%，料：水，料：水=1=1：1.4-1.51.4-1.5。此配方適合。此配方適合于培養(yǎng)平菇原種，菌絲生長速度快，且菌絲粗狀。于培養(yǎng)平菇原種，菌絲生長速度快，且菌絲粗狀。玉米芯、木屑混合培養(yǎng)基配方玉米芯、木屑混合培養(yǎng)基配方玉米芯玉米芯42%42%，木屑，木屑20%20%，豆秸，豆秸20%20%，麩皮

11、，麩皮10%10%，過磷酸鈣，過磷酸鈣1.5%1.5%，石灰，石灰2%2%，石膏，石膏1%1%，糖，糖0.5%0.5%，玉米面，玉米面3%3%，料：水，料：水1=11=1：1.4-1.51.4-1.5。此配方適合于培養(yǎng)平菇原種。生長健壯，也可。此配方適合于培養(yǎng)平菇原種。生長健壯，也可培養(yǎng)金針菇，滑子蘑原種。培養(yǎng)金針菇，滑子蘑原種。軟質(zhì)木屑配方軟質(zhì)木屑配方椴木屑椴木屑75%75%（木線廠下腳料，顆粒較大），麩皮（木線廠下腳料，顆粒較大），麩皮15%15%，玉，玉米面米面5%5%，石膏，石膏1.5%1.5%，石灰，石灰1%1%，糖，糖0.5%0.5%，過磷酸鈣，過磷酸鈣1.5%1.5%，尿，尿素素

12、0.5%0.5%，料，水，料，水=1=1：1.21.2左右。適用于金針菇，滑子蘑等左右。適用于金針菇，滑子蘑等分解基質(zhì)能力較弱的品種使用。分解基質(zhì)能力較弱的品種使用。麥粒、木屑培養(yǎng)基配方麥粒、木屑培養(yǎng)基配方新鮮、優(yōu)質(zhì)小麥新鮮、優(yōu)質(zhì)小麥80%80%，闊葉樹木屑，闊葉樹木屑20%20%，木屑：水，木屑：水=1=1：1 1左右，拌木屑用煮小麥水，或在此基礎(chǔ)上，加入總量左右，拌木屑用煮小麥水，或在此基礎(chǔ)上，加入總量0.5%0.5%的過磷酸鈣，的過磷酸鈣，0.5%0.5%的蔗糖的蔗糖,1%,1%的石灰，在麥粒煮好后連同的石灰，在麥粒煮好后連同木屑拌入。木屑拌入。玉米粒培養(yǎng)基配方玉米粒培養(yǎng)基配方優(yōu)質(zhì)新鮮玉

13、米優(yōu)質(zhì)新鮮玉米100%100%，或后期加入，或后期加入0.5%0.5%過磷酸鈣，過磷酸鈣，0.5%0.5%的的糖糖,1%,1%的石灰。的石灰。玉米粒培養(yǎng)基制作的原種，具備麥粒原種的優(yōu)點(diǎn)，后勁玉米粒培養(yǎng)基制作的原種，具備麥粒原種的優(yōu)點(diǎn)，后勁更足，接種擴(kuò)繁量更大。更足，接種擴(kuò)繁量更大。二、原種培養(yǎng)基的制作方法二、原種培養(yǎng)基的制作方法一、谷粒培養(yǎng)基制作一、谷粒培養(yǎng)基制作1.1.按配方稱量各營養(yǎng)物質(zhì)按配方稱量各營養(yǎng)物質(zhì) 配方一：優(yōu)質(zhì)新鮮小麥配方一：優(yōu)質(zhì)新鮮小麥65%65%，木屑，木屑15%15%，棉籽，棉籽殼殼15%15%，麩皮，麩皮5%5%，石膏，石膏1%1%，過磷酸鈣，過磷酸鈣0.5%0.5%，糖

14、，糖0.5%0.5%，尿素尿素0.5%0.5%2.2.谷粒浸泡吸水谷粒浸泡吸水冬季浸泡冬季浸泡24-4824-48小時(shí)，夏季加小時(shí)，夏季加1%1%石灰（以防變石灰（以防變酸）浸泡酸）浸泡2424小時(shí)，隔夜換水。小時(shí)，隔夜換水。3.3.煮沸、瀝干撈出煮沸、瀝干撈出泡好后，漂洗干凈（去雜），煮至飽脹泡好后，漂洗干凈（去雜），煮至飽脹無白心，切忌煮開花，瀝干水分后撈出。無白心，切忌煮開花，瀝干水分后撈出。4. 4. 拌料拌料 用煮小麥水拌木屑、棉籽殼、麩皮，最用煮小麥水拌木屑、棉籽殼、麩皮，最后再一起與麥粒拌勻。后再一起與麥粒拌勻。5.5.裝瓶裝瓶(1)(1)裝料量應(yīng)為裝料量應(yīng)為1/31/3或或1/

15、21/2罐頭瓶，便于培養(yǎng)罐頭瓶，便于培養(yǎng)時(shí)搖動(dòng)基料促進(jìn)絲均勻生長。時(shí)搖動(dòng)基料促進(jìn)絲均勻生長。(2)(2)擦凈并封瓶口擦凈并封瓶口封口塑料袋采用規(guī)格為封口塑料袋采用規(guī)格為13cm13cm13cm13cm0.004cm0.004cm高壓聚丙稀袋，二層，里層在中央剪一高壓聚丙稀袋，二層，里層在中央剪一3cm3cm寬寬菱形口。至少二個(gè)皮套。菱形口。至少二個(gè)皮套。6.6.裝鍋滅菌裝鍋滅菌 高壓滅菌于高壓滅菌于126126左右維持左右維持2 2小時(shí)；常小時(shí)；常壓滅菌于壓滅菌于100100維持維持10-1210-12小時(shí)，夏季時(shí)間小時(shí)，夏季時(shí)間可酌情延長?？勺们檠娱L。7.7.出鍋出鍋 、冷卻、冷卻 冷卻至冷

16、卻至3030以下待接種。以下待接種。二、二、. .木屑、玉米芯料培養(yǎng)基制作方法木屑、玉米芯料培養(yǎng)基制作方法 1.1.按配方稱料。按配方稱料。2.2.拌料：干混（將石膏和不溶于水的主料和拌料：干混（將石膏和不溶于水的主料和輔料混勻）；濕混（將石灰和溶于水的輔料輔料混勻）；濕混（將石灰和溶于水的輔料制成母液，加入所需水量稀釋后拌料）。制成母液，加入所需水量稀釋后拌料）。 裝瓶：悶裝瓶：悶1-21-2個(gè)小時(shí)（夏季時(shí)間不宜過長）個(gè)小時(shí)（夏季時(shí)間不宜過長）待料充分吸足水后裝瓶，裝料至瓶肩，上緊下松待料充分吸足水后裝瓶，裝料至瓶肩，上緊下松壓平料面，擦凈瓶口，打壓平料面，擦凈瓶口，打1.5cm1.5cm粗

17、接種孔至瓶底粗接種孔至瓶底封口。封口。 滅菌：同谷料培養(yǎng)基制作滅菌：同谷料培養(yǎng)基制作 出鍋、冷卻：同谷粒培養(yǎng)基制作出鍋、冷卻：同谷粒培養(yǎng)基制作三、栽培種制作三、栽培種制作 制作方法基本同于原種制作。需要注意制作方法基本同于原種制作。需要注意的是栽培種培養(yǎng)基制作一般選用加富的培養(yǎng)的是栽培種培養(yǎng)基制作一般選用加富的培養(yǎng)料，而且含水量要較原種加大，更利于菌種料，而且含水量要較原種加大，更利于菌種快速吃料。容器可以用快速吃料。容器可以用500ml500ml罐頭瓶，也可罐頭瓶，也可以用（以用（17-1817-18）X X（30-3530-35）X X（0.04-0.050.04-0.05）cmcm低壓聚

18、乙烯袋。低壓聚乙烯袋。 第三節(jié)第三節(jié) 液體菌種制作技術(shù)液體菌種制作技術(shù) 一、液體菌種制作的原理一、液體菌種制作的原理食用菌液體菌種制作是在發(fā)酵罐中，采用液食用菌液體菌種制作是在發(fā)酵罐中，采用液體培養(yǎng)基通入無菌空氣并加以攪拌，增加培體培養(yǎng)基通入無菌空氣并加以攪拌，增加培養(yǎng)基中溶氧含量，提供食用菌菌體呼吸代謝養(yǎng)基中溶氧含量，提供食用菌菌體呼吸代謝所需要的氧氣，并控制適宜的外界條件，獲所需要的氧氣，并控制適宜的外界條件，獲得大量的菌絲體或代謝產(chǎn)物。得大量的菌絲體或代謝產(chǎn)物。 二、液體菌種制作的特點(diǎn)二、液體菌種制作的特點(diǎn)1.1.原料來源廣泛原料來源廣泛2.2.菌絲體生長快速菌絲體生長快速3.3.生產(chǎn)周

19、期短生產(chǎn)周期短食用菌深層發(fā)酵一般僅需食用菌深層發(fā)酵一般僅需2-7d2-7d就可獲得大量的菌絲體，就可獲得大量的菌絲體，而固體培養(yǎng)則需而固體培養(yǎng)則需30-60d30-60d。4.4.工廠化生產(chǎn)、無季節(jié)性工廠化生產(chǎn)、無季節(jié)性食用菌深層發(fā)酵是在發(fā)酵罐內(nèi)、控制最佳條件來培養(yǎng)菌食用菌深層發(fā)酵是在發(fā)酵罐內(nèi)、控制最佳條件來培養(yǎng)菌體的，不受季節(jié)性限制。體的，不受季節(jié)性限制。三、液體菌種制作的用途三、液體菌種制作的用途1.1.生產(chǎn)液體菌種生產(chǎn)液體菌種食用菌經(jīng)深層發(fā)酵食用菌經(jīng)深層發(fā)酵2-7d的幼嫩菌絲體，可以用來作為食用的幼嫩菌絲體，可以用來作為食用菌栽培用的原種和栽培種。菌栽培用的原種和栽培種。 2.2.制備藥

20、物或提取生化制品制備藥物或提取生化制品許多食用菌種類，其深層發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體可作為提取藥許多食用菌種類，其深層發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體可作為提取藥物成分或生化制品的材料。物成分或生化制品的材料。 3. 3.制作食品或畜禽飼料制作食品或畜禽飼料 四、液體菌種制作的主要設(shè)備四、液體菌種制作的主要設(shè)備 1.1.搖床搖床往復(fù)式播床：振蕩方式為來回振蕩往復(fù)式播床：振蕩方式為來回振蕩旋轉(zhuǎn)式搖床：振蕩方式為旋轉(zhuǎn)旋轉(zhuǎn)式搖床：振蕩方式為旋轉(zhuǎn)四、液體菌種制作的主要設(shè)備四、液體菌種制作的主要設(shè)備 2.2.種子罐和發(fā)酵罐種子罐和發(fā)酵罐許多食用菌種類，其深層發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體可作為提取藥許多食用菌種類，其深層發(fā)酵培養(yǎng)的菌絲體可作

21、為提取藥物成分或生化制品的材料。物成分或生化制品的材料。 四、液體菌種制作的主要設(shè)備四、液體菌種制作的主要設(shè)備 3. 3.空氣凈化設(shè)備空氣凈化設(shè)備 4.4.培養(yǎng)基連續(xù)滅菌設(shè)備培養(yǎng)基連續(xù)滅菌設(shè)備 包括配料罐、連消塔、維持塔、噴淋冷卻器等。包括配料罐、連消塔、維持塔、噴淋冷卻器等。5 5供氣設(shè)備供氣設(shè)備 主要是蒸氣鍋爐及附屬設(shè)備主要是蒸氣鍋爐及附屬設(shè)備 五、液體菌種制作的主要工藝五、液體菌種制作的主要工藝 1.1.種子制備種子制備種子制備的目的是大量繁殖足夠數(shù)量的、健壯的、高純度種子制備的目的是大量繁殖足夠數(shù)量的、健壯的、高純度的種子的種子斜面菌種制備斜面菌種制備 。 搖瓶種子制備搖瓶種子制備一級(jí)、二級(jí)種子制備一級(jí)、二級(jí)種子制備一級(jí)種子罐通常為一級(jí)種子罐通常為50-100L50-100L，二級(jí)種子罐為，二級(jí)種子罐為500-1000L500-1000L。六、液體菌種制作的主要參數(shù)六、液體菌種制作的主要參數(shù)1.1.菌齡菌齡菌齡與種子的活力密切相關(guān)。通常，搖瓶種子菌齡控制在菌齡與種子的活力密切相