遺傳性耳聾檢測(cè)

1、遺傳性耳聾基因檢測(cè)的遺傳性耳聾基因檢測(cè)的臨床實(shí)踐臨床實(shí)踐右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院：韋葉生右江民族醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院：韋葉生醫(yī)學(xué)博士，教授，博士研究生導(dǎo)師醫(yī)學(xué)博士，教授，博士研究生導(dǎo)師 概概 述述什么是遺傳性耳什么是遺傳性耳聾聾 ？遺傳性耳聾遺傳性耳聾基因檢測(cè)內(nèi)容是基因檢測(cè)內(nèi)容是什么什么？如何檢測(cè)？如何檢測(cè)？ 遺傳性耳聾遺傳性耳聾指的是由于基因和染色體異常所致的耳聾。指的是由于基因和染色體異常所致的耳聾。這種疾病是由父母的遺傳物質(zhì)（包括染色體及位于其中的基這種疾病是由父母的遺傳物質(zhì)（包括染色體及位于其中的基因）發(fā)生了改變傳給后代而引起的耳聾，并且在于孫后代中因）發(fā)生了改變傳給后代而引起的耳聾，并且在于

2、孫后代中以一定數(shù)量出現(xiàn)。以一定數(shù)量出現(xiàn)。 遺傳性耳聾分為遺傳性耳聾分為綜合征性遺傳性聾及非綜合征性遺傳性綜合征性遺傳性聾及非綜合征性遺傳性聾聾兩大類。前者指除了耳聾以外，同時(shí)存在眼、骨、腎、皮兩大類。前者指除了耳聾以外，同時(shí)存在眼、骨、腎、皮膚等部位的病變，這類耳聾占遺傳性聾的膚等部位的病變，這類耳聾占遺傳性聾的30%；后者只出現(xiàn)；后者只出現(xiàn)耳聾的癥狀，在遺傳性聾中占耳聾的癥狀，在遺傳性聾中占70%。 遺傳性耳聾遺傳性耳聾我國聽力殘疾者 第二次全國殘疾人抽樣調(diào)查統(tǒng)計(jì)公報(bào) 0 -7歲聽障兒童 每年新生聾兒 （唐氏 2-3萬 ）4新生兒耳聾發(fā)病率為與唐氏綜合癥的發(fā)病率一樣高的聾孩子父母聽力正常聽力

3、正常人群中聾病基因攜帶者約占5 無藥可治，聽力損失不可逆 人工耳蝸植入價(jià)格昂貴 由聾至啞 存在再生育風(fēng)險(xiǎn)6 每出生一個(gè)先天性聾兒，國家及家庭要花費(fèi)人民幣（不包含人工耳蝸和語言康復(fù)訓(xùn)練）無法在產(chǎn)前預(yù)測(cè)遺傳性耳聾風(fēng)險(xiǎn)-家庭不幸 新生兒普通聽力篩查存在漏檢遲發(fā)性耳聾、藥物性耳聾-引發(fā)糾紛7我們的疑問？為什么聽力正常的夫婦會(huì)生育出一個(gè)聾孩子？為什么有的孩子，出生時(shí)聽力正常，幼年或成年的時(shí)候，聽力就迅速下降？為什么有的人打針吃藥都沒事，有的人，打了一針聾了？89 9流調(diào)單位：中國人民解放軍聾病分子診斷中心流調(diào)范圍：全國 28 個(gè)省市樣品規(guī)模：3552 例1011基因耳聾表現(xiàn)正常人所占比例聾人中所占比例先

4、天性聾啞基因（GJB2）先天性耳聾2-3%21%大前庭水管綜合征相關(guān)基因（PDS）先天性耳聾遲發(fā)性耳聾1-2%14.5%藥物敏感性耳聾基因（12S rRNA）藥物性耳聾0.3%4.4%耳聾基因突變攜帶者 7800萬人12 導(dǎo)致生下來就聾GJB2：先天性聾啞基因 對(duì)震蕩高度敏感PDS：大前庭水管綜合征 “一針致聾” 母系遺傳12SrRNA：藥物敏感性耳聾基因 后天高頻聽力損失GJB3：我國克隆的第一個(gè)遺傳病基因遺傳性耳聾基因21位點(diǎn)檢測(cè)項(xiàng)目13項(xiàng)目屬性項(xiàng)目名稱：遺傳性耳聾基因突變檢測(cè)（21位點(diǎn)）方法學(xué)： SNaPshot (單堿基延伸法)檢測(cè)基因：GJB2、GJB3、 SLC26A4、線粒體DN

5、A 12S rRNA。 共檢測(cè)21個(gè)位點(diǎn)。覆蓋率： 21位點(diǎn)覆蓋80%非綜合征耳聾位點(diǎn)標(biāo)本類型：干濾紙血片（新生兒） 全血1-3mlEDTA-K/Na或枸櫞酸鈉抗凝（成人）報(bào)告時(shí)間：7工作日內(nèi)其他： 患者需簽署基因檢測(cè)知情同意書SNaPshot法該技術(shù)由美國應(yīng)用生物公司（ABI）開發(fā)，是基于熒光標(biāo)記單堿基延伸原理的分型技術(shù)，也稱小測(cè)序，主要針對(duì)中等通量的SNP分型項(xiàng)目。在一個(gè)含有測(cè)序酶、四種熒光標(biāo)記ddNTP、緊臨多態(tài)位點(diǎn)5-端的不同長(zhǎng)度延伸引物和PCR產(chǎn)物模板的反應(yīng)體系中，引物延伸一個(gè)堿基即終止，經(jīng)ABI測(cè)序儀檢測(cè)后，根據(jù)峰的移動(dòng)位置確定該延伸產(chǎn)物對(duì)應(yīng)的SNP位點(diǎn)，根據(jù)峰的顏色可得知摻入的堿

6、基種類，從而確定該樣本的基因型。對(duì)于PCR產(chǎn)物模板可通過多重PCR反應(yīng)體系來獲得。通常用于10-30個(gè)SNP位點(diǎn)分析。熱點(diǎn)基因21位點(diǎn)的攜帶率與檢出率16基因基因突變位點(diǎn)突變位點(diǎn)GJB2中中突變頻率突變頻率 檢出率檢出率GJB2(人群攜帶率2.6%，遺傳性耳聾患者突變率為14%41%）c.35delG or c.35dupG1%97.40%c.176_191del164%c.235delC75%c.299_300delAT10.70%c.508_511dupAACG16.70%c.167delTrare熱點(diǎn)基因21位點(diǎn)的攜帶率與檢出率17基因基因突變位點(diǎn)突變位點(diǎn)SLC26A4中中的突變頻率的突

7、變頻率檢出率檢出率SLC26A4(人群攜帶率約為1.9%，遺傳性耳聾患者突變率8.9514.54%，）c.919-2AG (常用名IVS7- 2AG)50.10%80.66%c.2168AG13.17%c.281CT0.86%c.589GA1.29%c.1174AT2.59%c.1707+5GA (常用名IVS15+5GA)1.51%c.1226GA3.88%c.1229CT2.80%c.1975GC3.02%c.2027TA1.51%c.2162CTrare基因基因突變位點(diǎn)突變位點(diǎn)突變頻率突變頻率檢出率檢出率12SrRNA（遺傳性耳聾突變率1.6715.5%）m.1555AG1.6715.5

8、%100%m.1494CT基因基因突變位點(diǎn)突變位點(diǎn)GJB3中的突中的突變頻率變頻率檢出率檢出率GJB3（人群攜帶率較?。ヽ.538CT0.86%未見報(bào)道c.547GA熱點(diǎn)基因21位點(diǎn)的攜帶率與檢出率19新生兒濾紙血片兒童、成人抗凝血（EDTA/枸櫞酸鈉抗凝）20丈夫婚齡女性孕婦21 孕早期、孕中期 最佳檢測(cè)時(shí)機(jī)：越早越好，孕婦建檔時(shí)（1212周）或做唐篩時(shí)（1616周）是合適的時(shí)機(jī) 檢測(cè)要求： 采集2-3ml靜脈血 采血者不需要空腹采血22女方或孕婦遺傳性耳聾發(fā)生率低產(chǎn)前咨詢，用藥及生活指導(dǎo)丈夫耳聾基因檢測(cè)（測(cè)序）胎兒產(chǎn)前診斷（如羊水，測(cè)序）產(chǎn)前咨詢，用藥及生活指導(dǎo)陰性陽性線粒體和GJB3基因

9、GJB2和PDS基因陰性陽性233000例孕婦耳聾易感基因突變攜帶者160例（5.3%）GJB2攜帶者105例（3.5%）夫婦同為GJB2攜帶者3對(duì)PDS攜帶者49例（1.6%）夫婦同為PDS攜帶者3對(duì)線粒體基因突變攜帶者6例（0.2%）通過2840例244對(duì)夫婦行產(chǎn)前診斷，1例胎兒確診為遺傳性耳聾，家庭選擇終止妊娠。檢測(cè)孕婦配偶檢測(cè)孕婦配偶2009.12-2010.43056例孕婦耳聾易感基因突變攜帶者163例（5.3%）GJB2攜帶者104例（3.4%）夫婦同為GJB2攜帶者3對(duì)PDS攜帶者42例（1.4%）夫婦同為PDS攜帶者6對(duì)線粒體基因突變攜帶者8例（0.3%）通過2893例25 5

10、對(duì)夫婦行產(chǎn)前診斷，1例胎兒為GJB2基因235delG及V37I復(fù)合雜合。檢測(cè)孕婦配偶檢測(cè)孕婦配偶2010.7-2011.626 在301醫(yī)院，一對(duì)第一胎生育聾兒的聽力健康夫婦，懷孕第二胎時(shí)進(jìn)行了孕期耳聾基因診斷，最后確定胎兒是雜合突變，出生后孩子聽力正常。（該夫婦為加拿大籍華人）GJB2 235 雜合235野生探針235突變探針2627 熊X的父母是GJB2基因突變攜帶者，由于未進(jìn)行產(chǎn)前診斷，先后育有兩個(gè)聾兒，此次懷孕，經(jīng)301醫(yī)院進(jìn)行孕期耳聾基因診斷，胎兒確定為雜合突變，出生后聽力應(yīng)正常。熊X9歲，GJB2基因235delC純合突變導(dǎo)致的遺傳性耳聾。熊X的媽媽，GJB2基因突變攜帶者并懷孕

11、5個(gè)月。陜西漢中熊XX一家正常人群常見耳聾基因攜帶率約6%(GJB2：3%,SLC26A4：2-3%,mtDNA：0.3%)依賴聾人的篩查和干預(yù)尚不足以從根本上阻斷遺傳性耳聾在整個(gè)人群中的傳遞和發(fā)病。及早地發(fā)現(xiàn)藥物性耳聾敏感個(gè)體，通過指導(dǎo)用藥避免耳聾。實(shí)現(xiàn)常見遺傳性耳聾的預(yù)防對(duì)耳聾基因攜帶孕婦的家人具有警示作用2829我國每年有3萬以上患嚴(yán)重耳聾殘疾的寶寶出生，新生兒耳聾發(fā)病率為現(xiàn)有常規(guī)新生兒物理聽力篩查方法無法檢出遲發(fā)性耳聾、藥物性耳聾加上每年新增的遲發(fā)性耳聾和藥物性耳聾患者，每年實(shí)際新增聾人30常規(guī)聽篩 ? ?新生兒聽力聯(lián)合篩查耳聾基因芯片檢測(cè)早發(fā)現(xiàn)、早預(yù)防后天遲發(fā)聾、藥物聾耳聾基因篩查是

12、對(duì)常規(guī)聽篩最有效的互補(bǔ)篩查手段聯(lián)合篩查提高聽力異常新生兒的篩出率31新生兒聽力篩查常規(guī)聽篩+耳聾基因篩查聽篩通過基因未通過聽篩通過基因攜帶聽篩通過基因通過聽篩未通過基因未通過聽篩未通過基因攜帶聽篩未通過基因通過高度預(yù)警，提示遲發(fā)聾和藥物聾風(fēng)險(xiǎn)遺傳咨詢聽力隨訪聽力隨訪確診為聽力障礙患兒聽力檢查基因檢測(cè)遺傳咨詢聽力檢查3233高危新生兒先天性聾兒及早安裝助聽器或人工耳蝸植入，避免孩子由聾致啞遲發(fā)性聾兒（EVA）通過生活指導(dǎo)，避免或延緩耳聾發(fā)生藥物性耳聾高危個(gè)體終身禁用耳毒性藥物，并預(yù)防家族成員發(fā)生藥物性耳聾采集新生兒足跟血3滴篩查對(duì)象所有新生兒樣本要求3435 在沈陽202醫(yī)院，一對(duì)夫婦帶新生兒就

13、診，父母聽力正常，孩子出生后3天聽力初篩未通過，在一個(gè)月時(shí)帶孩子到202醫(yī)院新生兒科就診。經(jīng)耳聾基因芯片檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)GJB2純合突變，及早確診先天性耳聾，及早干預(yù)（正常情況下3-6個(gè)月干預(yù)）。GJB2 235 純合235野生探針235突變探針35王王父親父親29歲歲聽力正常聽力正常IVS7-2AG雜合突變雜合突變宋宋母親母親29歲歲聽力正常聽力正常IVS7-2AG雜合突變雜合突變王王女兒女兒5歲歲雙側(cè)感音神經(jīng)性聾雙側(cè)感音神經(jīng)性聾IVS7-2AG純合純合突變突變因說話不清，5歲才被發(fā)現(xiàn)IVS7-2AG雜合IVS7-2AG雜合IVS7-2AG純合3637 在中國聾兒康復(fù)中心，照片中的小女孩被檢測(cè)出藥物性耳聾，在專家的建議下，小女孩的母親、阿姨、舅舅都進(jìn)行了耳聾基因檢測(cè)，都被診斷為藥物性耳聾易感基因攜帶者，他們將終身禁用所有氨基糖甙類藥物。1555突變探針線粒體A1555G 均質(zhì)突變37邰麗華：湖北宜昌人，2歲時(shí)因