穿心蓮內(nèi)酯的提取

1、穿心蓮內(nèi)酯的提取、分離、鑒定及亞硫酸氫鈉加成物的制備 穿心蓮為爵床科植物穿心蓮(Andjrographis panicalata (Burmf)Ness)的全草或葉。具清熱解毒，涼血消腫作用，用于治療急性菌痢、胃腸炎、咽喉炎、尿路感染等。穿心蓮中含有多種苦味素，屬二萜類化合物，主要為穿心蓮內(nèi)酯、脫氧穿心蓮內(nèi)酯、高穿心蓮內(nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯、穿心蓮?fù)?、穿心蓮?fù)取Ｆ渲写┬纳弮?nèi)酯、新穿心蓮內(nèi)酯是穿心蓮抗菌消炎的主要有效成分。 鑒于穿心蓮內(nèi)酯在水中的難溶性，將穿心蓮內(nèi)酯進(jìn)行磺化、亞硫酸氫鈉加成和琥珀酸酐酯化等水溶性衍生物合成研究，克服了穿心蓮內(nèi)酯不溶于水的特性。穿心蓮中主要成分的結(jié)構(gòu)及其性質(zhì) 1穿心蓮

2、內(nèi)酯(andrographolide)：C20H30O6，又稱穿心蓮乙素，為無色方型或長方型結(jié)晶，mp 230232，aD20 -126。味極苦，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶，微溶于氯仿、乙醚，難溶于水及石油醚。 2脫氧穿心蓮內(nèi)酯(14-deoxy-andrographolide)：C20H30O4，又稱穿心蓮甲素，為無色片狀或長方型結(jié)晶， mp l75176.5，aD -36(1，氯仿)。味稍苦，可溶于甲醇、乙醇，丙酮、吡啶、氯仿、乙醚、苯、微溶水。 3新穿心蓮內(nèi)酯（neo-andrographolide )：C26H40O8，又稱穿心蓮丙素、穿心蓮新苷，為無色柱狀結(jié)晶，mp l67168。

3、無苦味，可溶于甲醇、乙醇、丙酮、吡啶，微溶于氯仿和水，不溶于石油醚。 穿心蓮內(nèi)酯 脫氧穿心蓮內(nèi)酯 新穿心蓮內(nèi)酯一、實驗?zāi)康?. 掌握穿心蓮內(nèi)酯類二萜化合物的理化性質(zhì)和提取分離方法。2. 學(xué)習(xí)氧化鋁柱色譜的原理和操作方法。3. 通過穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成，掌握使脂溶性產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為水溶性產(chǎn)物的一種方法。二、實驗原理（綜合性實驗）穿心蓮中的內(nèi)酯類化合物易溶于甲醇、乙醇丙酮等溶劑，故利用此性質(zhì)選用乙醇提取之，穿心蓮中含有大量葉綠素，可用活性炭脫色法除去葉綠素類雜質(zhì)；利用穿心蓮內(nèi)酯與脫氧穿心蓮內(nèi)酯在氯仿中溶解度不同，初步將二者分離；利用穿心蓮內(nèi)酯與脫氧穿心蓮內(nèi)酯結(jié)構(gòu)上的差異，用氧化鋁柱分離二者，將穿心蓮

4、內(nèi)酯制成亞硫酸氫鈉加成物以增加其在水中的溶解性。三、實驗內(nèi)容1儀器和試劑玻璃色譜柱（2×30cm）及配套分液漏斗，濾紙，50ml三角瓶數(shù)個， 恒溫水浴鍋，蒸發(fā)皿，玻璃板（5×20cm），色譜缸，玻璃漏斗，鐵架臺，500ml園底燒瓶，抽濾瓶，布氏漏斗，冷凝器，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，硅膠薄層板，顯色試劑噴瓶，電吹風(fēng)，錐形瓶(50m1)等。穿心蓮粗粉，95乙醇，活性炭，丙酮，氯仿，甲醇，正丁醇，亞硫酸氫鈉，無水乙醇，0.3亞硝酰鐵氰化鈉，10的正丁醇?xì)溲趸c溶液，3，5-二硝基苯甲酸堿性溶液，50氫氧化鉀甲醇試液。2. 實驗方法 (一)內(nèi)酯類成分的提取1）提取：稱取穿心蓮粗粉100g，置圓

5、底燒瓶中，加95乙醇以浸過藥粉2cm為度，回流1小時，過濾，藥渣再加適量乙醇回流2次，每次1小時，過濾，合并三次濾液，回收乙醇至總體積的1/5量，放冷，即為內(nèi)酯類成分總提取物。2）脫色：將上述內(nèi)酯類成分總提取物加入原料量的1530活性炭，加熱回流30分鐘，脫色后的溶液再濃縮至152ml左右，放置析晶。 (二)分離、精制 1）穿心蓮內(nèi)酯的分離 結(jié)晶法，將活性炭脫色后的濃縮液放置析晶，濾取結(jié)晶，并用少量水洗滌即得穿心蓮內(nèi)酯粗品(含少量脫氧穿心蓮內(nèi)酯)。母液待分離脫氧穿心蓮內(nèi)酯。 2）穿心蓮內(nèi)酯的精制 將粗品穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶加40倍量丙酮，加熱回流l0分鐘，過濾不溶物再加20倍量丙酮，加熱回流l0分鐘

6、，過濾，合并二次丙酮液，回收丙酮至三分之一量，放置析晶，濾取白色顆粒狀結(jié)晶，即為穿心蓮內(nèi)酯精品。做薄層鑒定。 3）脫氧穿心蓮內(nèi)酯分離將結(jié)晶法析出的穿心蓮內(nèi)酯母液水浴蒸發(fā)至稠膏狀，再加氯仿70ml，盡力攪拌后濾出氯仿層，殘渣再加氯仿10ml同法處理。合并二次濾液，水浴回收至5ml，將此濃縮液上氧化鋁柱(2×30cm)。用中性氧化鋁約3035g，氯仿濕法裝柱，用氯仿洗脫，控制流速為23ml/分，每份10ml，約收1215份。各流份濃縮后簿層鑒定，合并相同流份，蒸干氯仿，用丙酮結(jié)晶二次，得白色結(jié)晶即為脫氧穿心蓮內(nèi)酯，做薄層鑒定。(三)穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成物的制備取穿心蓮內(nèi)酯精制品0.5

7、g置50ml圓底燒瓶中，加95乙醇5ml及計算量的4的亞硫酸氫鈉水溶液，加熱回流30分鐘，反應(yīng)液蒸出乙醇，再加5mJ水溶解，冷卻后過濾，濾液用少量氯仿洗滌三次，水液濃縮至干。殘留物加乙醇l020ml溶解，濾除不溶物，乙醇溶液濃縮放置或抽松，得白色粉末。粗品用乙醇-氯仿重結(jié)晶得到穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成產(chǎn)物。 (四)鑒定 1）穿心蓮內(nèi)酯的鑒定： (1) 物理常數(shù)：mp 230232。(2) 薄層色譜： 吸附劑：硅膠G-CMC。展開劑：氯仿-無水乙醇(20:1)。顯色劑：碘蒸氣。結(jié)果：穿心蓮內(nèi)酯在常量下為一個斑點。(3) 顯色反應(yīng)： 亞硝酰鐵氰化鈉堿液反應(yīng)(Legal 反應(yīng))：取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許

8、放在比色板上，加乙醇0.2ml溶解，加0.3亞硝酰鐵氰化鈉溶液2滴10的氫氧化鈉溶液2滴。3，5-二硝基苯甲酸堿液反應(yīng)(Kedde 反應(yīng))： 取穿心蓮內(nèi)酯結(jié)晶少許，于比色板上，加乙醇0.2ml溶解，加3，5-二硝基苯甲酸堿性溶液2滴，呈紫色。50氫氧化鉀甲醇試液反應(yīng)：穿心蓮內(nèi)酯遇氫氧化鉀甲醇溶液呈紫色。2）脫氧穿心蓮內(nèi)酯的鑒定： (1) 測熔點：mp l75 176.5 。 (2) 薄層鑒定：條件同穿心蓮內(nèi)酯。3）穿心蓮內(nèi)酯亞硫酸氫鈉加成物的鑒定： (1) 測熔點：mp 226227。 (2) 薄層鑒定：吸附劑，硅膠G-CMC板。 展開刑：A.氯仿-甲醇(9:1)，B.氯仿-正丁醇-甲醇(2:1:2)，C.氯仿-丙酮-乙醇-水(5:5:5:1)。顯色劑：3、5-二硝基苯甲酸堿性溶液 。 樣品：穿心蓮內(nèi)酯乙醇液