HPLC法測定黃芪中的黃芪甲苷含量

1、HPLC法測定黃芪中的黃芪甲苷含量第17卷第1期2000年1月沈陽藥科大學JournalofShenyangPharmaceuticalUniversity一一HPLC法測定黃芪中的黃芪甲苷含量里圭2?摘要用HPLC法測定了黃芪甲苷含量.樣品從東北黃芪中提取,用色譜純甲醇溶解并稀釋,采好的線性關(guān)系.關(guān)詞唧Lc;蝴盤鰱黃芪為常用中藥,素有"補藥之長"之稱,具有益氣固表,利尿托毒等功效.黃芪藥用價值很高,臨床上常用來治療非特異性免疫功能低下,乙肝和心血管系統(tǒng)疾病.黃芪甲苷作為黃芪成分之一,其化學結(jié)構(gòu)如圖1所示,它具有降壓,抗炎,穩(wěn)定紅細胞膜,提高血漿cAMP含量,促進小鼠再生肝

2、DNA合成和增強免疫功能等多種作用u】.因此在研究黃芪過程中,我們對其成分黃芪甲苷進層掃描法和香草醛.硫酸比色法,前者操作繁圍在0.010.2mg?mL之間與峰面積呈線性,該苷的含量.H收稿日期:19990ll6,1儀器與方法儀器:Warers高效液相色譜儀,510型泵,490E紫外檢測儀.對照品黃芪甲苷購自中國藥品生物制品檢定所.樣品黃芪飲片(生品),購自沈陽京盛藥店,本校許春泉教授鑒定為東北黃芪.試劑乙腈(色譜純,天津四友生物醫(yī)學公司),甲醇(色譜純,天津四友),正丁醇(分析純),乙醚(分析純),水,重蒸餾水,去離子水,中性氧化鋁(層析用),輕質(zhì)氧化鎂(AR).2方法與結(jié)果色譜柱:YWCn

3、,柱2504.6mm11l止,大連依利特科學儀器;流動相:甲醇(色譜純);流速:0.8ml/min;檢測波長:205nln;靈敏度:0.1AUFS.精密稱取l0.03mg黃芪甲苷標準品,置于別精密吸取0.5,1.5,2.5,5,10mL用甲醇稀釋譴,進樣20LI按上述色譜條件測定.在tu=3.375左右有唯一吸收峰.以峰面積為縱坐標,進A=0.1717C+0.4657,r=0.9996,線性范圍0.010.2mg/mL一1,如表1所示.沈陽藥科大學第17卷pkC/(g-mL一)×10Peakarea/xt06溶解并定容于1OmL容量瓶中,精密吸取2OL進樣.連續(xù)5次,測定峰面積,其R

4、SD為2.14%.取5g已測定黃芪甲苷含量的生藥提取水煎液平均分成10份.取5份,再分別準確加入1,447mg/mL的黃芪甲苷對照品溶液0.5mL,按"樣品測定"項下方法操作,結(jié)果見表2.Tab-2Theruilaofrecovery=96.1%.RSD=2.15%樣品溶液在室溫下放置.每隔3h測定1次,12h內(nèi)共測5次.含量分別是1.350,1.347,1.352,1.349mg/g.RSD為2.45%,證明黃芪甲苷含量至少12h內(nèi)穩(wěn)定.將黃芪水提取液50mL(相當于含生藥5O)蒸發(fā)器回收甲醇至干,殘渣加少量H2O制成水溶液,用100mL乙醚振搖萃取脫脂3次,取水層加水飽

5、和正丁醇的上層液萃取數(shù)次,合并正丁醇液,減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)正丁醇至干,殘渣加少量95%乙醇溶解,然后均勻灘灑在裝有干燥03:MgO(36g:9g)混合物的漏斗中,并用75%洗脫3h,洗脫液回收乙醇后得殘渣用95%乙醇溶解.得乙醇液加大量乙醚.抽濾,棄去濾液,濾渣附于濾紙上使其自然揮干乙醚,將濾紙浸于甲醇中使濾渣充分溶解.棄去濾紙.定容至50mL,備用,精密吸取1mL置5OmL容量瓶中,用色譜純甲醇定容至刻度,振搖,過微孔濾膜,進樣20L,按上述色譜條件測定,并由回收方程計算含量,得圖譜(圖2,3),結(jié)果如表3.FIg.2TheehromatagrmofthesMapleFIg.3Theehromat

6、ogramofeawolTab.3ThemeMuremeatalrellsofthemplecontentn=5,RSD=0.694%,Ai=0.511682x106.Ci=0.027nag?mL一第1期田豐等:HPLC法摜l定黃芪中的黃芪甲苷含量則50g藥中黃苠甲苷為67.5mg,相當于每克生藥中含黃芪甲苷1.35mg.3討論蛋白質(zhì),乙醚除脂類物質(zhì),過A1203:MgO濾層除黃酮,最后制得甲醇浸液的工藝,結(jié)果表明,此方法提取完全,損失少,分離度良好.h.日本的原田正敏I報道了用乙腈一水(1:2)作為流動相測定黃芪皂苷(即黃苠甲苷),我們經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)在此流動相下出現(xiàn)倒峰,峰形不好,且受流動相影響

7、大,不易把握保留時間,我們也考察了(甲醇:水)不同比例作為流動相的實驗結(jié)果,最終選擇甲醇為流動相能得到最佳效果.c.鑒于黃芪皂苷種類較多,結(jié)構(gòu)相近,紫外掃描只在200nm有末端吸收1.原田正敏因此定在200nm處檢測4.我們實驗表明,波長越長,噪音越小,但靈敏度越低;越靠近200nm,靈敏度越高,但噪音越大.綜合考察這兩個因素,本實驗選擇205Fu-12為測定波長.d.黃苠中甲苷的含量很低,而且受產(chǎn)地,生長時間,采收季節(jié)等因素影響,具體差異有待于進一步研究.參考文獻雜志.1993,8(3):1631662魯靜,壬寶琴.黃芪甲苷的薄層掃描法測定中成藥,1992.14(6):34-35定.中藥通報

8、,1986,11(9):38-39藥分冊.1990,5(5):201-202High-performanceLiquidChromatographicDeter-minationofAstragalosideinAstragalusmem-branaceus(Fisch.)Bunge.TianFeng,DengYingjieDepartmentofPharmacy,ShenyangPharmaceuticalUniversity,Shenyang110015AbstractAsensitivemethodwasdevdopedtodetermineastragalosidebyhigh-per

9、formanceliquidchro205nm.TKsassaydemonstratedthatastraalosidehadadequatesensitivityandselectivitytomeasuretheconcentrationsofastragalosideinAstragalusmembranaceus(Fisch.)Bunge.Keywordshighp口0皿aI1celiquidchromatography;astragalosideAstragalusritleTJq.branoAT$(Fisch.)Btmge.書訊沈陽藥科大學中藥系顧茂書工程師與原山西中藥廠廠長楊巨奎主任藥師,四平市衛(wèi)生學校講師魏冉,沈陽陸軍總院高成副主任藥師等人合編中藥專業(yè)系列專著,為中醫(yī)藥教學,科研,中藥制藥,藥檢和中醫(yī)I臨床用藥等方面提供了重要參考書籍.中國中藥炮制技術(shù)匯編,山西科學技術(shù)出版社,25.00元;傳統(tǒng)中藥材別名錄,天津科學技術(shù)出版社,