月季的花藥離體培養(yǎng)

1、課題課題2 月季的花藥培養(yǎng)月季的花藥培養(yǎng)花的結(jié)構(gòu)花的結(jié)構(gòu)一、被子植物的花粉發(fā)育一、被子植物的花粉發(fā)育雄蕊雄蕊：花絲花絲花藥：囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉?；ㄋ帲耗覡罱Y(jié)構(gòu)，內(nèi)有很多花粉?；ǚ凼切℃咦幽讣?xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的單倍體的生花粉是小孢子母細(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的單倍體的生殖細(xì)胞。殖細(xì)胞。減數(shù)分裂減數(shù)分裂有絲分裂有絲分裂花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：四分體時(shí)期、單核花粉的發(fā)育要經(jīng)歷：四分體時(shí)期、單核期（單核居中期和單核靠邊期）、雙核期（單核居中期和單核靠邊期）、雙核期期注意注意：二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)二核花粉粒：成熟的花粉粒中，只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）胞核和生

2、殖細(xì)胞核。（精子在花粉管中形成）三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生三核花粉粒：有些植物的花粉，在成熟前，生殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣殖細(xì)胞進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個(gè)精子，這樣的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核和兩個(gè)精子。的花粉在成熟時(shí)，含有一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核和兩個(gè)精子。兩個(gè)精子和一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核的基因型相同。兩個(gè)精子和一個(gè)營(yíng)養(yǎng)核的基因型相同。1 1花粉母細(xì)胞花粉母細(xì)胞4 4個(gè)小孢子個(gè)小孢子減分減分有分有分4 4個(gè)花粉管細(xì)胞核個(gè)花粉管細(xì)胞核4 4個(gè)生殖細(xì)胞核個(gè)生殖細(xì)胞核有分有分8 8個(gè)精子個(gè)精子花粉花粉花粉花粉胚狀體胚狀體愈傷組織愈傷組織從芽從芽從芽從芽生根生根移栽移栽脫分化脫分化分化分化再

3、分再分化化誘導(dǎo)誘導(dǎo)三、影響花藥培養(yǎng)的因素三、影響花藥培養(yǎng)的因素1、材料的選擇、材料的選擇不同植物的誘導(dǎo)成功率很不相同不同植物的誘導(dǎo)成功率很不相同同一親本：同一親本：親本植株的生理狀況對(duì)誘導(dǎo)成功率也有直接影響親本植株的生理狀況對(duì)誘導(dǎo)成功率也有直接影響 （早期的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株）（早期的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株）選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功率的重要選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素因素（在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高培養(yǎng)成功率最高。）。）2 2、培養(yǎng)基的組成、培養(yǎng)基的組成（MS

4、培養(yǎng)基+不同比例的激素）3 3、親本植株的生長(zhǎng)條件、材料的低溫預(yù)處理以及、親本植株的生長(zhǎng)條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種密度接種密度等對(duì)誘導(dǎo)成功率都有一定影響一、材料的選擇：一、材料的選擇： 花期早期時(shí)的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株。花期早期時(shí)的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株。一般，月季的花藥培養(yǎng)時(shí)間選在五月初到五月中旬，即一般，月季的花藥培養(yǎng)時(shí)間選在五月初到五月中旬，即月季的初花期。月季的初花期。 選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功率的選擇合適的花粉發(fā)育時(shí)期也是提高誘導(dǎo)成功率的重要因素。一般來說，在重要因素。一般來說，在單核期單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時(shí)期，花

5、藥培養(yǎng)成功率最高。胞一側(cè)的時(shí)期，花藥培養(yǎng)成功率最高。 為了挑選到為了挑選到單核期單核期的花藥，通常選擇的花藥，通常選擇完全未開完全未開放的花蕾放的花蕾。 一、材料的選取二、材料的消毒三、接種和培養(yǎng) 選擇花藥時(shí)，一般通過鏡檢來確定其中的花選擇花藥時(shí)，一般通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。粉是否處于適宜的發(fā)育期。 最常用的方法有最常用的方法有醋酸洋紅法醋酸洋紅法。但是，某些植。但是，某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青焙花青- -鉻礬法鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色藍(lán)黑色。1 1、花蕾用、花蕾用V/VV/V為為70

6、%70%的酒精的酒精浸泡浸泡3030秒秒2 2、無菌水清洗、無菌水清洗3 3、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分、無菌吸水紙吸干花蕾表面的水分4 4、放入、放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%0.1%的氯化汞的氯化汞溶液中溶液中2424分鐘分鐘（也可（也可質(zhì)量分?jǐn)?shù)為質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1%1%的次氯酸鈣溶液或飽和漂的次氯酸鈣溶液或飽和漂白粉溶液白粉溶液）5 5、無菌水沖洗、無菌水沖洗3535次次 用于培養(yǎng)花藥，實(shí)際上多數(shù)未熟，由于它的用于培養(yǎng)花藥，實(shí)際上多數(shù)未熟，由于它的外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，通常處于無菌狀外面有花萼、花瓣或穎片保護(hù)，通常處于無菌狀態(tài)，所以只要將整個(gè)花蕾或幼穗消毒即可。態(tài)，所以只要將整個(gè)花蕾

7、或幼穗消毒即可。 滅菌后花蕾，要在滅菌后花蕾，要在無菌條件無菌條件下除去萼片和花瓣，下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花藥時(shí)，要盡量并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花藥時(shí)，要盡量不損傷花藥不損傷花藥（否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體否則接種后，容易從受傷部位產(chǎn)生二倍體的愈傷組織的愈傷組織），同時(shí)還要徹底），同時(shí)還要徹底去除花絲去除花絲，因?yàn)榕c花絲相因?yàn)榕c花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成。 通常每瓶通常每瓶接種花藥接種花藥7-107-10個(gè)個(gè)，溫度控制在，溫度控制在2525左左右，右，不需要光照不需要光照。幼小植株形成后才。幼

8、小植株形成后才需要光照。需要光照。 一般經(jīng)過一般經(jīng)過20-3020-30天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開裂，天培養(yǎng)后，會(huì)發(fā)現(xiàn)花藥開裂，長(zhǎng)出長(zhǎng)出愈傷組織或釋放出胚狀體愈傷組織或釋放出胚狀體。將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到。將愈傷組織及時(shí)轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。 如果花藥開裂釋放出如果花藥開裂釋放出胚狀體胚狀體，則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植則一個(gè)花藥內(nèi)就會(huì)產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。上，否則這些植株將很難分開。 在花藥培養(yǎng)

9、中，特別是通過在花藥培養(yǎng)中，特別是通過愈傷組織形成的花粉植株，常常會(huì)愈傷組織形成的花粉植株，常常會(huì)出現(xiàn)染色體倍性的變化。（主要原出現(xiàn)染色體倍性的變化。（主要原因是因是營(yíng)養(yǎng)核和生殖核融合營(yíng)養(yǎng)核和生殖核融合造成的。）造成的。）植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的異同點(diǎn)項(xiàng)目項(xiàng)目相同點(diǎn)相同點(diǎn)不同點(diǎn)不同點(diǎn)植物組織培養(yǎng)技植物組織培養(yǎng)技術(shù)術(shù)離體的植物組織離體的植物組織經(jīng)脫分化形成愈經(jīng)脫分化形成愈傷組織，再分化傷組織，再分化成叢芽，誘導(dǎo)出成叢芽，誘導(dǎo)出根，然后進(jìn)行移根，然后進(jìn)行移栽。栽。外植體為體細(xì)胞，外植體為體細(xì)胞，染色體數(shù)無需加染色體數(shù)無需加倍。倍?；ㄋ幣囵B(yǎng)技術(shù)花藥培養(yǎng)技

10、術(shù)取材為花藥，培養(yǎng)取材為花藥，培養(yǎng)的為單倍體幼苗，的為單倍體幼苗，植株弱小，高度不植株弱小，高度不育，必須用秋水仙育，必須用秋水仙素處理，使染色體素處理，使染色體加倍，恢復(fù)正常植加倍，恢復(fù)正常植株的染色體數(shù)，而株的染色體數(shù)，而且為純種。且為純種。練習(xí)：小麥高桿（練習(xí)：小麥高桿（D）對(duì)矮桿（）對(duì)矮桿（d）為顯性，抗銹病（）為顯性，抗銹?。═）對(duì)不抗銹?。ǎ?duì)不抗銹?。╰）為）為顯性，現(xiàn)有高桿抗銹病和矮桿不抗病的兩種純合體，要獲得矮桿抗銹病的良種，顯性，現(xiàn)有高桿抗銹病和矮桿不抗病的兩種純合體，要獲得矮桿抗銹病的良種，可用雜交育種和單倍體育種法，步驟如下：可用雜交育種和單倍體育種法，步驟如下： 高桿抗銹病高桿抗銹病 矮稈不抗銹病矮稈不抗銹病 P DDTT ddtt (一一)F1的基因型表現(xiàn)型的基因型表現(xiàn)型 a各種配子的種類各種配子的種類 a （二）（二）符合要求的單倍體的基因型符合要求的單倍體的基因型 良種的基因型表現(xiàn)型良種的基因型表現(xiàn)型 （三）（三）（1）請(qǐng)?jiān)谏蠄D橫線上填寫上基因型、表現(xiàn)型內(nèi)容。）請(qǐng)?jiān)谏蠄D橫線上填寫上基因型、表現(xiàn)型內(nèi)容。（2）圖中（一）（二）（三）采用的處理方法分別是）圖中（一）（二）（三）采用的處理方法分別是 、 、