高壓提取香菇多糖詳細(xì)方案

1、高壓提取香菇多糖的詳細(xì)方案高壓提取技術(shù)是在常溫條件下，提取香菇原料中的有效成份的新技術(shù)。這里說(shuō)的高壓是指壓力在lOOMPa以上，乃至高達(dá)lOOOMPa以上的流體靜壓力。全稱為“超高冷等靜壓”(Ultrahighisostatichydrostaticpressureatroomtemperature),簡(jiǎn)稱為高壓(Highhydrostaticpressure,HHP),或高壓(Ultrahighpressure,UHP)。高壓技術(shù)應(yīng)用在工業(yè)領(lǐng)域已有連年的歷史，19世紀(jì)末被應(yīng)用到食品領(lǐng)域。最近幾年來(lái)張守勤38等將高壓技術(shù)應(yīng)用于中藥有效成份的提取，在國(guó)內(nèi)外尚屬第一次，這一技術(shù)的發(fā)明與研究，加速了

2、我國(guó)中藥現(xiàn)代化的步伐。高壓提取技術(shù)是在常溫條件下，提取生物原料中的有效成份的新技術(shù)。能夠提取的有效成份有：生物堿、活性多糖和低聚糖、芳香油、脂質(zhì)類、黃酮、或類等水溶性、醉溶性、脂溶性和溶于其它有機(jī)溶劑中的小分子成份。與煎煮法、回流法、索氏提取等傳統(tǒng)提取技術(shù)相較較，高壓提取技術(shù)能夠大大縮短提取時(shí)刻、降低能耗、減少雜質(zhì)成份的溶出，提高有效成份的收率，而且高壓提取是在常溫下進(jìn)行，避免了因熱效應(yīng)引發(fā)的有效成份結(jié)構(gòu)高壓提取工作原理圖1、活塞2、壓力容器3、傳壓介質(zhì) 4、撓性包裝容器5、香菇原料轉(zhuǎn)變、損失和生理活性的降低，同時(shí)高壓提取是在一個(gè)密閉的環(huán)境下進(jìn)行的，沒(méi)有溶劑的揮發(fā),因此該技術(shù)加倍符合“綠色”環(huán)

3、保的要求。高壓在提取進(jìn)程中的作用進(jìn)程：在升壓時(shí)，通過(guò)滲透作用，溶劑進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部，在此進(jìn)程中細(xì)胞的結(jié)構(gòu)在高壓下受到不同程度的破壞。保壓時(shí)，細(xì)胞內(nèi)容物與進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)部的溶劑接觸，有效成份溶于這些溶劑中。在泄壓進(jìn)程中，細(xì)胞外部的壓力減小為零,細(xì)胞內(nèi)部的壓力仍然維持平衡時(shí)的壓力，即現(xiàn)在壓力差與施加壓力時(shí)方向相反。由于施加的是高壓，因此這種反方向的壓力差仍然是專門大的，因此細(xì)胞壁變形而破壞，溶解了有效成份的溶劑泄出。若是在反方向壓力作用下細(xì)胞壁的變形沒(méi)有超過(guò)其反向變形極限，細(xì)胞內(nèi)部己經(jīng)溶解了有效成份的溶劑在高滲透壓差下快速轉(zhuǎn)移到細(xì)胞外，達(dá)到提取的目的。高壓加工設(shè)備壓力簡(jiǎn)圖1、活塞頂蓋2、壓力容器3機(jī)架4、

4、樂(lè)媒槽5、增壓泵6、換向閥7、壓力泵8、油槽9、香菇原高壓系統(tǒng)包括高壓容器及其封頭，壓力發(fā)生系統(tǒng)，溫度控制裝置和物料裝卸系統(tǒng)。加料并封鎖后，傳樂(lè)介質(zhì)慢慢充滿容器，高等靜壓就可以夠產(chǎn)生了。高壓能夠直接或間接產(chǎn)生，也能夠通過(guò)加熱傳壓介質(zhì)產(chǎn)生。直接緊縮利用小直徑的活塞對(duì)傳壓介質(zhì)施壓，而大活塞用低壓泵來(lái)驅(qū)動(dòng)，直接緊縮方式只能用于直徑較小的實(shí)驗(yàn)設(shè)備。加熱傳壓介質(zhì)能夠使傳壓介質(zhì)膨脹，在提高溫度的同時(shí)產(chǎn)生高壓，因此通常常利用在需要高溫和高壓聯(lián)合作用，而且整個(gè)壓力容器內(nèi)部的溫度需要精準(zhǔn)控制的場(chǎng)合。大多數(shù)工業(yè)等緊縮系統(tǒng)均采用間接緊縮方式，間接緊縮利用增壓器把傳壓介質(zhì)泵入封鎖的高壓容器，直抵達(dá)到要求的壓力為止。杳

5、壓水 ! 3'、,，,，,，,一， r-間歇式高壓加工設(shè)備間歇式高壓加工設(shè)備結(jié)構(gòu)圖連續(xù)式高壓加壓系統(tǒng)1、原料入口2、原料罐3、低壓泵4、高壓泵5、高壓加工裝置6、緩沖罐7、灌裝線8、產(chǎn)品高壓提取香菇多糖的工藝流程將干燥的香菇子實(shí)體粉碎；稱取要求量的香菇粉未，別離加入水、不同濃度的酒精溶液，混合成懸濁液；高壓處置懸濁液；過(guò)濾，去除固體顆粒，得提取液。高壓提取的工藝流程如下圖所示：試劑：蒸儲(chǔ)水，苯酚，鋁片，NaHC03固體，濃硫酸，福萄糖設(shè)備和儀器：100ml容量瓶，玻璃棒，蒸儲(chǔ)裝置（溫度計(jì)、沸石、三口燒瓶、冷凝管），電子天平，紫外分光光度計(jì)，一、二、5.10ml吸液管，水浴鍋，X超高壓等

6、靜壓機(jī)（上海大隆高壓設(shè)備廠），真空泵，抽慮瓶。實(shí)驗(yàn)前工作：一、標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液的配制精密稱取105干燥至恒重的葡萄糖，加蒸譚水溶解并定容于100ml容量瓶中，搖勻，配成濃度為lmg/ml標(biāo)準(zhǔn)前萄糖溶液備用。二、5%苯酚試劑的配制苯酚水浴加熱溶解后稱取100g，加鋁片（先用1：6的鹽酸除去鋁片表面氧化鋁后，再稱量利用），加入碳酸氫鈉30g,蒸僧，搜集178-182的儲(chǔ)分，取儲(chǔ)出液，加入蒸馀水150mL,得的苯酚溶液，置于棕色瓶中備用。3、標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制以前萄糖作為標(biāo)準(zhǔn)品，采用苯酚一硫酸比色法，用紫外分光光度計(jì)測(cè)定多糖含量。精密吸取已配制的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品溶液，1,2,3ml置于6個(gè)50ml容量瓶中，加蒸

7、儲(chǔ)水至刻度線，搖勻。精密吸取2mL別離加入5%苯酚溶液1mL搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min,置滾水浴上加熱15min,然后置冷水浴中冷卻30min,以溶劑蒸儲(chǔ)水為空白作對(duì)照，在400600mB內(nèi)掃描，最大吸收波長(zhǎng)為490nme在490nm處，測(cè)吸光值，以濃度為縱坐標(biāo)，吸光值為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得出葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)品濃度Y（ug/ml）與吸光值X的回歸方程：Y=,R2=o在ug/ml范用內(nèi)呈線性關(guān)系。預(yù)處置：將新鮮香菇清洗干凈，除去其根部，將剩下的菌傘擠壓，切小塊放入真空干燥箱干燥,待香菇恒質(zhì)量，放入粉碎機(jī)中粉碎，將粉碎后的香菇粉依次通過(guò)40,60,80,100目的篩子,過(guò)篩以后把各級(jí)香

8、菇粉別離裝到清潔干燥的燒杯中,編號(hào)貼上標(biāo)簽，置于真空干燥箱中待用。單因素對(duì)提取率的影響：對(duì)比實(shí)驗(yàn)：準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉一份1g,放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號(hào)貼上標(biāo)簽，別離加入40ml蒸馀水混合均勻，放入塑料袋中并封口，密封，室溫浸泡24h,然后將樣品放入高壓容器內(nèi)，啟動(dòng)高壓油泵，升高到所需的壓力，并在此壓力下維持一按時(shí)刻（壓力:200MPa：保壓時(shí)刻:2min）：然后快速打開(kāi)控制高壓油路的閥門，在2秒鐘之內(nèi)卸除壓力,掏出高壓加工后的樣品，去除包裝后，抽濾去除濾渣，取得香菇多糖的提取液，將濾液稀釋必然的倍數(shù)（3倍），取2ml溶液別離加入5%苯酚溶液1ml,搖勻,迅速加入5ml濃硫酸，振搖5

9、min,置滾水浴上加熱15min,然后置冷水浴中冷卻30min,即以溶劑蒸儲(chǔ)水為空白作對(duì)照，在490nm處用分光光度計(jì)測(cè)吸光值，計(jì)算多糖提取率，取得選擇的溶劑與提取率的關(guān)系。一、溶劑的選擇實(shí)驗(yàn)提取溶劑對(duì)有效成份的提取得率、分離純化都有直接關(guān)系，包括溶出、澄清、濃縮、層析結(jié)晶與凍干等許多的單元操作。研究表明，影響提取的主要因素是欲提取物質(zhì)在所利用溶劑中的溶解度大小和該物質(zhì)向溶劑擴(kuò)散的難易程度。準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉5份，每份1g,放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號(hào)貼上標(biāo)簽，別離加入40ml蒸儲(chǔ)水混合均勻，放入塑料袋中并封口，密封，室溫浸泡24h,然后將樣品放入高壓容器內(nèi)，啟動(dòng)高壓油泵，升高到所需的

10、壓力，并在此壓力下維持一按時(shí)亥IJ（壓力:500MPa：保壓時(shí)刻:5min）：然后快速打開(kāi)控制高壓油路的閥門，在2秒鐘之內(nèi)卸除壓力,掏出高壓加工后的樣品，去除包裝后，抽濾去除濾渣，取得香菇多糖的提取液，將濾液稀釋必然的倍數(shù)（3倍），取2ml溶液別離加入5%苯酚溶液1mL搖勻，迅速加入5n】l濃硫酸，振搖5min,置滾水浴上加熱15min,然后置冷水浴中冷卻30min,即以溶劑蒸儲(chǔ)水為空白作對(duì)照，在490nm處用分光光度計(jì)測(cè)吸光值，計(jì)算多糖提取率，取得選擇的溶劑與提取率的關(guān)系。二、浸泡時(shí)刻的選擇實(shí)驗(yàn)中藥浸泡實(shí)質(zhì)上是使有效成份（即溶質(zhì)）從固相向液相轉(zhuǎn)移的傳質(zhì)進(jìn)程。從傳質(zhì)原理講，其浸泡進(jìn)程一般可分3

11、步：藥材的潤(rùn)濕和溶劑由外向藥材內(nèi)部的滲透、細(xì)胞組織的滲透:藥材內(nèi)部溶質(zhì)的溶解：溶質(zhì)從藥材內(nèi)部向藥材表面和由藥材表面向溶液主體的擴(kuò)散。中藥浸泡有利于有效成份的充分溶出，因此，浸泡時(shí)刻的長(zhǎng)短對(duì)有效成份的提取率有著重要的影響。準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉9份，每份1g放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號(hào)貼上標(biāo)簽，別離加入40ml蒸僧水，混合均勻，放入塑料袋中并封口，密封，室溫浸泡時(shí)刻別離為0,1,2,3,4,6,8,12,24h,然后別離將樣品放入高壓容器內(nèi)，啟動(dòng)高壓油泵，升高到所需的壓力，并在此壓力下維持一按時(shí)刻（壓力：200MPa：保壓時(shí)刻:2min）；然后快速打開(kāi)控制高壓油路的閥門，在2秒鐘之內(nèi)卸除壓力

12、，別離掏出高壓加工后的樣品，去除包裝后，抽濾去除濾渣，取得香菇多糖的提取液，將濾液稀釋必然的倍數(shù)（3倍），取2ml溶液別離加入5%苯酚溶液1ml,搖勻,迅速加入5ml濃硫酸,振搖5min,置滾水浴上加熱15min,然后置冷水浴中冷卻30min,即以溶劑蒸儲(chǔ)水為空白作對(duì)照，在490nm處用分光光度計(jì)測(cè)吸光值，計(jì)算多糖提取率，取得浸泡時(shí)刻與提取率的關(guān)系。3、壓力的選擇實(shí)驗(yàn)壓力作為熱力學(xué)的一個(gè)主要參數(shù)，它也像溫度一樣影響反映的速度和程度.改變壓力能影響物質(zhì)的內(nèi)在滲透壓，進(jìn)一步改變物質(zhì)的溶解性.滲透壓力升高，會(huì)引發(fā)分子間的束縛水的減少，外在壓力能夠減弱滲透壓的影響，所之外在壓力的存在，能夠使分子更易的

13、從藥物中分離出來(lái)，這是高壓法的主要影響因素。準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉8份，每份1g放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號(hào)貼上標(biāo)簽，別離加入40ml蒸僧水，混合均勻，放入塑料袋中并封口，密封，室溫浸泡4h,然后別離將樣品放入高壓容器內(nèi)，啟動(dòng)高壓油泵，升高到所需的壓力，壓力別離為0,50,100,200,300,400,500,600Mpa,保壓時(shí)刻為2min,然后快速打開(kāi)控制高壓油路的閥門，在2秒鐘之內(nèi)卸除壓力，別離掏出高壓加工后的樣品，去除包裝后，抽濾去除濾渣，取得香菇多糖的提取液，將濾液稀釋必然的倍數(shù)（3倍），取2ml溶液別離加入5%苯酚溶液1ml,搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min,置滾水浴

14、上加熱15min,然后置冷水浴中冷卻30min,即以溶劑蒸恨水為空白作對(duì)照，在490nm處用分光光度計(jì)測(cè)吸光值，計(jì)算多糖提取率，取得壓力與提取率的關(guān)系。4、料液比例的選擇實(shí)驗(yàn)溶劑（皿）與固體原料（g）比例（）也是超高壓提取進(jìn)程中的一個(gè)重要因素，從傳質(zhì)速度的角度看，主要表此刻影響固相主體和液相主體之間的濃度差，濃度差則是一種重要的傳質(zhì)推動(dòng)力。溶劑物料比的大小還會(huì)影響兩相的混合情形。尤其在攪拌不充分的情形下，會(huì)改變表觀傳質(zhì)系數(shù)，從而影響傳質(zhì)速度。增大溶劑和固體原料的比例能夠改善提取的產(chǎn)物從固相表而擴(kuò)散進(jìn)入液相主體進(jìn)程的兩相傳質(zhì)，即能夠減小外擴(kuò)散阻力的影響，提高提取率。溶劑物料比小，兩相間的濃度差小

15、，從而傳質(zhì)推動(dòng)力小。準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉5份，每份1g放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號(hào)貼上標(biāo)簽，別離加入10,30,50,70,100ml蒸鏘水，混合均勻，放入塑料袋中并封口，密封，室溫浸泡4h,然后別離將樣品放入高壓容器內(nèi)，啟動(dòng)高壓油泵，升高到所需的壓力，并在此壓力下維持一按時(shí)刻（壓力：200MPa；保壓時(shí)刻:2min）；然后快速打開(kāi)控制高壓油路的閥門，在2秒鐘之內(nèi)卸除壓力，別離掏出高壓加工后的樣品，去除包裝后，抽濾去除濾渣，取得香菇多糖的提取液，將濾液稀釋必然的倍數(shù)（3倍），取2n】l溶液別離加入5%苯酚溶液1ml,搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min,置滾水浴上加熱15min,然后

16、置冷水浴中冷卻30min,即以溶劑蒸譚水為空白作對(duì)照，在490nm處用分光光度計(jì)測(cè)吸光值，計(jì)算多糖提取率，取得料液比與提取率的關(guān)系。5、保壓時(shí)刻選擇實(shí)驗(yàn)在超高壓提取進(jìn)程中，提取時(shí)刻也是一個(gè)重要參數(shù)1：由于提取進(jìn)程中壓力較高，溶劑能夠在極短的時(shí)刻滲透到細(xì)胞內(nèi)部，且香菇多糖能夠快速達(dá)到溶解平衡，時(shí)刻太長(zhǎng)容易使香菇多糖在高溫高壓下被破壞，因此提取時(shí)刻較短（幾分鐘）。準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉5份，每份1g放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號(hào)貼上標(biāo)簽，別離加入50ml蒸懦水，混合均勻，放入塑料袋中并封口，密封，室溫浸泡4h,然后別離將樣品放入高壓容器內(nèi)，啟動(dòng)高壓油泵，升高到所需的壓力，別離做壓力為200Mpa

17、、300Mpa的實(shí)驗(yàn)，保壓時(shí)刻別離為2,5,10,15,20min：然后快速打開(kāi)控制高壓油路的閥門，在2秒鐘之內(nèi)卸除壓力，別離掏出高壓加工后的樣品，去除包裝后，抽濾去除濾渣，取得香菇多糖的提取液，將濾液稀釋必然的倍數(shù)（3倍），取2n】l溶液別離加入5%苯酚溶液1ml,搖勻，迅速加入5ml濃硫酸，振搖5min,置滾水浴上加熱15min,然后置冷水浴中冷卻30min,即以溶劑蒸儲(chǔ)水為空白作對(duì)照，在490nm處用分光光度計(jì)測(cè)吸光值，計(jì)算多糖提取率，取得保壓時(shí)刻與提取率的關(guān)系。六、浸泡溫度高壓提取條件下，因?yàn)榇嬖趬毫ψ饔孟路肿拥倪\(yùn)動(dòng)，溫度不需要和傳統(tǒng)工藝進(jìn)程中的一樣高，加上時(shí)刻縮短，如此能夠降低藥物成

18、份受熱破壞的因素，也能夠行省能耗。在壓力條件相同的情形下，溫度在必然范圍內(nèi)升高，是有利于加速提取速度的。這在小規(guī)模提取實(shí)驗(yàn)時(shí)效果并非是特別明顯，但在提取規(guī)模大時(shí)，提取速度就超級(jí)重要，所以溫度的影響也是超級(jí)重要的。準(zhǔn)確稱取100目的香菇粉5份，每份1g放入到200mL的燒杯中，標(biāo)號(hào)貼上標(biāo)簽，別離加入40ml蒸僧水，混合均勻，放入塑料袋中并封口，密封，將五個(gè)密封袋別離放在10、1五、20、2五、3五、45的水浴鍋內(nèi)恒溫4h,然后別離將樣品放入高壓容器內(nèi)，啟動(dòng)高壓油泵，升高到所需的壓力，壓力為200MPa,保壓時(shí)刻為2min：然后快速打開(kāi)控制高壓油路的閥門，在2秒鐘之內(nèi)卸除壓力，別離掏出高壓加工后的樣品，去除包裝后，