生化檢測中的影響因素

1、生化檢測中的影響因素 一、檢測前因素 二、檢測中因素 三、檢測后因素 檢測前的影響因素 一、 標(biāo)本的因素 1. 生理因素對生化檢驗結(jié)果的影響 影響檢驗結(jié)果的生理因素可分為可控因素和不可控因素兩種類型。主要有年齡、性別、運動、情緒、體位改變、生活方式、妊娠、季節(jié)變化、海拔高度、生理性波動等. 2.飲食對生化檢驗結(jié)果的影響 3.藥物對生化檢驗結(jié)果的影響 藥物引起生化檢驗結(jié)果出現(xiàn)誤差的原因可分為物理干擾和化學(xué)干擾，物理干擾是由于藥物進入體內(nèi)后使血清的物理性質(zhì)如顏色等發(fā)生變化進而影響某些項目的檢測，而化學(xué)干擾是由于藥物本身的化學(xué)性質(zhì)如藥物的強還原性等對體內(nèi)某些物質(zhì)測定的影響。此外，許多藥物的副作用使肝

2、、腎功能發(fā)生改變而引起檢驗結(jié)果異常。值得注意的是長期靜脈點滴的病人留取標(biāo)本時可使標(biāo)本稀釋，造成某些項目結(jié)果偏低，又因靜點時高濃度的藥物進入標(biāo)本中，使許多檢驗結(jié)果發(fā)生巨大變化。因此護理人員應(yīng)避免在靜點時和用藥4h以內(nèi)采取檢驗標(biāo)本，必要時停藥后再查，以防藥物的干擾作用。 4.標(biāo)本采集對生化檢驗結(jié)果的影響 5.標(biāo)本處理、儲存對生化檢驗結(jié)果的影響 標(biāo)本的離心速度、時間,離心前放置的時間、以及標(biāo)本貯存的溫度、時間等都會對生化檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。 6.標(biāo)本狀態(tài)對生化檢驗結(jié)果的影響6.1 溶血 溶血是臨床生化檢驗中最常見的一種影響因素，它能引起很多指標(biāo)明顯異常。溶血的干擾機理有以下三種：一是血細胞中高濃度組分

3、逸出，使測定結(jié)果增高,血細胞內(nèi)濃度比血漿中濃度明顯高的物質(zhì)有LDH、ACP、AST、K+，只要輕微溶血就可以對這些項目產(chǎn)生很大影響。另外若某些物質(zhì)的血細胞內(nèi)濃度低于血清濃度時，則溶血相當(dāng)于血清被稀釋，因而使這些血清成分特別是發(fā)生重度溶血時的檢測值降低，這類項目主要有Ca2+、Na+、Cl-、UA等。二是血細胞成分進入血清中后因化學(xué)反應(yīng)而引起其他物質(zhì)的濃度改變，如溶血后紅細胞的磷脂進入血清被血清中的磷酸酯酶水解，其結(jié)果造成血清無機磷濃度顯著增高。三是血紅蛋白本身顏色對檢測的光學(xué)干擾，血紅蛋白的顏色在431nm和555nm波長附近能使比色、比濁法的吸光度增高，如溶血引起重氮單試劑法膽紅素測定結(jié)果明

4、顯升高。實際上，以上三類干擾在溶血標(biāo)本中同時存在并可相互作用，因而使受影響的檢項更為復(fù)雜，這在超微量、高精度和多指標(biāo)的檢測分析中顯然不可忽視，因此，嚴(yán)控標(biāo)本溶血是保證檢驗質(zhì)量的重要方面。 .2脂血對生化檢測的干擾:血液脂濁可散射光線，所以對吸光度一般產(chǎn)生正向干擾，導(dǎo)致某些項目如ALB、UA、總蛋白（TP）23等測定結(jié)果。而在pH10以上的環(huán)境中，乳糜中的TG會皂化可使血清逐漸變清，使許多比色法測定如Ca2+、Cr、ALP、TP等結(jié)果產(chǎn)生負誤差。 6.3 黃疸 膽紅素對反應(yīng)結(jié)果產(chǎn)生黃色化合物的比色分析影響很大，一般可以用樣本空白或兩點比色法、連續(xù)監(jiān)測法來消除膽紅素對黃色結(jié)果的影響，但由于膽紅素不

5、穩(wěn)定，隨著膽紅素被氧化為膽綠素、膽褐素而變色，此時如果使用兩點法、連續(xù)監(jiān)測法同樣也不能排除膽紅素對結(jié)果的干擾。此外膽紅素作為一種還原劑對氧化反應(yīng)有干擾，如氧化酶法測定GLU、TG、UA、膽固醇等，因為膽紅素可以與上述過程中H2O2分解產(chǎn)生的新生態(tài)氧發(fā)生反應(yīng)，從而使新生態(tài)氧與氧化酶法反應(yīng)中的色源物質(zhì)結(jié)合減少，導(dǎo)致結(jié)果偏低。此時也可用雙波長法或設(shè)計樣本空白消除干擾，亦或當(dāng)外觀檢查發(fā)現(xiàn)是黃疸血清時可先除蛋白，然后加膽紅素氧化酶預(yù)先將膽紅素氧化成較穩(wěn)定的氧化產(chǎn)物膽褐素，可大大減低甚至消除膽紅素的干擾。 返回 二、環(huán)境的因素包括生化分析儀的用水、電源以及環(huán)境的溫濕度等方面對生化檢測的結(jié)果都會產(chǎn)生影響。

6、分析中因素 確立測定系統(tǒng)的概念 測定系統(tǒng)包括測定原理、試劑、儀器、校準(zhǔn)品四要素。對于一個臨床檢測項目，如果所用方法的測定原理、試劑、儀器、校準(zhǔn)品中任何一個不同，都可能得到不同的測定結(jié)果。如果我們想要得到準(zhǔn)確可靠的測定結(jié)果，而該結(jié)果又具有與國際、國內(nèi)其他實驗室的可比性，應(yīng)該自己建立一個標(biāo)準(zhǔn)測定系統(tǒng)。 生化分析儀的校準(zhǔn) 對測定標(biāo)本的儀器一定要求進行校準(zhǔn)，校準(zhǔn)時要選擇合適的（配套的）標(biāo)準(zhǔn)品/校準(zhǔn)品；如有可能，校準(zhǔn)品應(yīng)能溯源到參考方法或/和參考物質(zhì)；對不同的分析項目要根據(jù)其特性確立各自的校準(zhǔn)頻率. 儀器的精密度檢查 儀器的維護保養(yǎng) 用已糖激酶（HK）法則定葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液時，葡萄糖的消耗與NADH的生成是

7、等摩爾關(guān)系，校準(zhǔn)生化分析儀340nm處NAD(P)H的摩爾吸光系數(shù)。可用ALP測定試劑的緩沖液作為測定試劑，對硝基苯酚標(biāo)準(zhǔn)液作為血清標(biāo)本，實際測定405nm的吸光度值，根據(jù)對硝基苯酚的濃度可計算值。 檢測方法的選擇 不同的檢測方法對檢測結(jié)果的影響是不言而預(yù)的,我們應(yīng)優(yōu)先選擇國際、國內(nèi)，行業(yè)內(nèi)權(quán)威機構(gòu)推薦的方法，沒有推薦常規(guī)方法的，應(yīng)該選擇公認(rèn)的測定方法。 試劑的影響 生化試劑盒有許多生產(chǎn)廠家，不同廠家產(chǎn)品的質(zhì)量、技術(shù)含量等常有區(qū)別，有時即使同一廠家不同批號的同種試劑因原料來源、純度不同以及生產(chǎn)條件變動，會產(chǎn)生批間變異。同一批號的同種試劑盒在儲存、運輸時的情況有所不同，性能也可能發(fā)生變化。同項目

8、試劑盒之間作比較，如果穩(wěn)定性好、線性范圍寬、正向型試劑空白吸光度低、反向型試劑空白吸光度高、試劑空白速率低、瓶間差小者可視為優(yōu)質(zhì)試劑。 校準(zhǔn)品（Calibrationmaterials）含有已知量的欲測物，用以校準(zhǔn)該測定方法的數(shù)值，它與該方法及試劑、儀器是相關(guān)聯(lián)的。校準(zhǔn)品的作用是為了減少或消除儀器、試劑等造成的系統(tǒng)誤差。 在全自動生化分析儀上使用配套的試劑和標(biāo)準(zhǔn)品，各儀器廠家均有自己的標(biāo)準(zhǔn)測定系統(tǒng),對于校準(zhǔn)品不能亂用。關(guān)于酶活性測定校準(zhǔn)問題 常用K值有以下幾種： a) 理論K值：根據(jù)理論摩爾消光系數(shù)（）來計算，如NADH為6.22103 b) 實測K值：由于儀器波長的精密及半寬度不同，而應(yīng)根據(jù)

9、實測值來設(shè)定K值 c) 廠家給的K值：廠家生產(chǎn)試劑盒說明書上提供的K值（有的廠家提供6.3103） d) 校準(zhǔn)K值：通過校準(zhǔn)物直接校準(zhǔn)得到的K值。 從上述K值中不難發(fā)現(xiàn)實測K值大于理論K值，這說明生化分析儀的測光系統(tǒng)還存在著一定誤差，如波長、半寬度及光徑等偏差，使儀器達不到理論上的最佳狀態(tài)； 校準(zhǔn)K值與實測K值之間也存在一定的差距，即使指示物和儀器相同，其差異可能由試劑及校準(zhǔn)品造成的；校準(zhǔn)K值應(yīng)有其溯源性。 試劑間的相互干擾 全自動生化分析儀的吸樣針、試劑針、攪拌捧及比色杯是常見交叉污染的原因，稱互為干擾的項目為交叉污染對。測定試劑中含有下一測試所要測定的底物，直接干擾下一檢測的測定結(jié)果;試劑

10、中含有的某種試劑成分與下一反應(yīng)所要測定的底物有作用，因而干擾下一反應(yīng)的測定結(jié)果。；該試劑中所引導(dǎo)的反應(yīng)對下一個項目的反應(yīng)進程帶來間接的干擾，下一項目所測定的是前后兩個項目反應(yīng)的綜合作用結(jié)果。 項目參數(shù)的設(shè)置對結(jié)果的影響 項目參數(shù)主要包括:標(biāo)本用量、試劑的配比及用量、反應(yīng)的溫度、延遲時間、反應(yīng)時間、監(jiān)測的主波長、次波長、反應(yīng)類型、監(jiān)測的時間、空白吸光度、底物耗盡及前帶現(xiàn)象的監(jiān)測、額外的清洗。必須要針對不同類型的反應(yīng)，不同試劑的性質(zhì)設(shè)置合理的檢測參數(shù)。 分析后階段 目前大多數(shù)檢驗科室都實行了計算機網(wǎng)絡(luò)管理技術(shù)，病人資料、檢驗數(shù)據(jù)網(wǎng)上共享，各實驗室當(dāng)天的測試結(jié)果通過聯(lián)機即時傳達電腦網(wǎng)絡(luò)，這種模式提高

11、了工作效率，也避免了以往由人為抄錄結(jié)果時發(fā)生的誤差。由于標(biāo)本量大，影響因素多而復(fù)雜，加上審核人員的經(jīng)驗等原因的影響 生化檢驗的幾種異常結(jié)果的分析 1.體檢標(biāo)本中的Glu結(jié)果普遍偏低； 2.體檢標(biāo)本中部分TG,T-CH結(jié)果偏低; 3.CK-MB大于CK; 4.Mg、TBA、K等項目的結(jié)果在與其它一些項目在一起檢測的結(jié)果與單獨檢測的結(jié)果差距較大； 5.黃疸標(biāo)本中的UA、Cr、Glu等結(jié)果偏低； 6.溶血標(biāo)本中的K、LDH、AST、DBIL、CRP等結(jié)果偏高； 7.ALT檢測中原倍結(jié)果遠遠大于標(biāo)本稀釋的檢測結(jié)果； 血清ALT測定，血清中的內(nèi)源性丙酮酸及其它酮酸也可與試劑中的指示酶（乳酸脫氫酶）起反應(yīng)

12、，使結(jié)果偏高。若先加入缺乏-酮戊二酸的第一試劑，使其它酮酸與指示酶反應(yīng)之后再加入含有-酮戊二酸的第二試劑，啟動真正的ALT酶促反應(yīng)生成丙酮酸，而丙酮酸與乳酸脫氫酶的反應(yīng)消耗的NAD能真正反映ALT的活性，從而消除以上副反應(yīng)的影響。 8.部分項目原倍的檢測結(jié)果正常,稀釋后的結(jié)果顯著升高; 9.部分免疫比濁法項目的檢測結(jié)果 小于0 應(yīng)對措施 1 . 完善制度，認(rèn)真實施 完善的規(guī)章制度，規(guī)范的文件體系是全面質(zhì)量管理體系必須具備的要素，根據(jù)實際情況，制定各級管理制度，如:標(biāo)本查對制度，儀器校準(zhǔn)、保養(yǎng)管理制度，試劑管理制度，各種實驗的標(biāo)準(zhǔn)操作（SOP文件），新項目新方法的評價，質(zhì)量控制操作程序，實驗操作

13、考核制度，差錯登記、安全管理制度等等。各種制度緊密結(jié)合，始終貫穿檢驗分析前、分析中、分析后的全過程。 2 . 加強與客戶的溝通 檢驗科與臨床配合的好壞直接影響診療的質(zhì)量，兩者結(jié)合是提高臨床診治水平的重要環(huán)節(jié)。因分析前質(zhì)量控制大部分是由臨床完成的，這就要求檢驗科需加強與臨床聯(lián)系，對標(biāo)本正確采集及影響測定的各種因素進行告知和培訓(xùn)，為臨床正確分析結(jié)果提供參考意見，促進檢驗醫(yī)學(xué)和諧發(fā)展。 4.3 做好臨床常規(guī)生化的室內(nèi)質(zhì)量控制 每日工作前，執(zhí)行嚴(yán)格的校準(zhǔn)程序，先測定質(zhì)控血清以監(jiān)測儀器的工作狀態(tài)及試劑的質(zhì)量，一旦發(fā)現(xiàn)失控，及時分析原因，采取措施，改善后方可進行當(dāng)天標(biāo)本的檢測。在每批標(biāo)本測定的同時，隨機測定質(zhì)控血清，以監(jiān)控儀器測定的漂移。為保證檢驗質(zhì)量，使用的質(zhì)控血清統(tǒng)一向臨床檢驗中心購買。使用質(zhì)控品時，實驗室要重復(fù)檢測以決定每批質(zhì)控品在本室的統(tǒng)計學(xué)參數(shù)。在報告檢驗結(jié)果前，質(zhì)控品結(jié)果必須達到實驗室設(shè)定的可接受標(biāo)準(zhǔn)。 4.4 積極參與各級臨檢中心的室間質(zhì)控評比活動 室間質(zhì)控是實驗室認(rèn)可的重要依據(jù)，是保證實驗室開展項目的基礎(chǔ)，反映了實驗室的準(zhǔn)確度和可信度。臨床常規(guī)生化室間質(zhì)量評比活動是相互校正各參與實驗室測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，并使各實驗室之間的結(jié)果有可比性，減少實驗室內(nèi)的系統(tǒng)誤差等。 4.5 危機值報告制度的建立與應(yīng)用 危急值是一組代表會危及患者生命的數(shù)據(jù)，應(yīng)采取及時、有