動物細胞融合與單克隆抗體(最新整合版)

1、離心、電激、振動離心、電激、振動聚乙二醇聚乙二醇利用滅活仙臺病毒是動物細胞融合所特有的。利用滅活仙臺病毒是動物細胞融合所特有的。 滅活的病毒對細胞沒有感染能力滅活的病毒對細胞沒有感染能力, ,并不破壞這些并不破壞這些病原體的抗原結(jié)構(gòu)。病原體的抗原結(jié)構(gòu)。因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂因為滅活的病毒能使細胞膜上的蛋白質(zhì)分子和脂質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，質(zhì)分子重新排布，細胞膜打開，細胞發(fā)生融合，不滅活的話會感染細胞，而不能誘導細胞融合。不滅活的話會感染細胞，而不能誘導細胞融合。滅活的滅活的病毒病毒融合融合有絲分裂有絲分裂兩個完整的兩個完整的雜交細胞雜交細胞不同不同DNAD

2、NA的兩個細胞的兩個細胞突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交成為可能成為可能比較項比較項目目細胞融合細胞融合的原理的原理細胞融合的細胞融合的方法方法誘導手段誘導手段用途用途植物體植物體細胞雜細胞雜交交細胞膜的細胞膜的流動性流動性纖維素酶、纖維素酶、果膠酶果膠酶去除去除細胞壁后誘細胞壁后誘導原生質(zhì)體導原生質(zhì)體融合融合離心、電刺離心、電刺激、振動、激、振動、聚乙二醇聚乙二醇克服遠源克服遠源雜交不親雜交不親和，獲得和，獲得雜種植株雜種植株動物細動物細胞融合胞融合細胞膜的細胞膜的流動性流動性用用胰蛋白酶胰蛋白酶使細胞分散使細胞分散后誘導細胞后誘導細胞融合融合除應(yīng)用植

3、物除應(yīng)用植物細胞雜交手細胞雜交手段外，段外，還有還有滅活病毒滅活病毒獲得雜種獲得雜種細胞、細胞、制備制備單克隆抗單克隆抗體體【例例1】能使動物細胞融合的特有的誘導因子是能使動物細胞融合的特有的誘導因子是 （ ）A.離心離心 B.滅活的病毒滅活的病毒 C.電刺激電刺激 D.振動振動【例例2】融合后的雜交細胞的遺傳物質(zhì)有何特點（融合后的雜交細胞的遺傳物質(zhì)有何特點（ ）具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息具有原來兩個或多個細胞的遺傳信息 B.能無限增殖能無限增殖 C.可形成新個體可形成新個體 D.培養(yǎng)過程會貼培養(yǎng)過程會貼壁壁【例例3】動物細胞融合的作用中最重要的是（動物細胞融合的作用中最重要的是（ ）A

4、.克服遠源雜交不親和克服遠源雜交不親和 B.制備單克隆抗體制備單克隆抗體 C.培育新物種培育新物種 D.生產(chǎn)雜種細胞生產(chǎn)雜種細胞 BBA抗體：能夠與抗原發(fā)生特抗體：能夠與抗原發(fā)生特異性結(jié)合的異性結(jié)合的免疫球蛋白免疫球蛋白。能產(chǎn)生抗體的細胞是能產(chǎn)生抗體的細胞是漿細漿細胞（即效應(yīng)胞（即效應(yīng)B細胞）。細胞）。二、單克隆抗體二、單克隆抗體抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗體的傳統(tǒng)生產(chǎn)方法抗原抗原 反復注射動物反復注射動物從動物的從動物的血清血清中分離抗體中分離抗體該法制備抗體的缺點：該法制備抗體的缺點：產(chǎn)量低、純度低，且抗產(chǎn)量低、純度低，且抗體的特異性差、靈敏度體的特異性差、靈敏度低。低。讀下面一段資料，讀下面一段

5、資料，找出單克隆抗體的概念找出單克隆抗體的概念 人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應(yīng)的過程中，體內(nèi)的B B細胞細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個B B細胞只細胞只分泌一種化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的分泌一種化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個單一抗體，必須用單個B B細胞進行無性繁殖，即克隆。細胞進行無性繁殖，即克隆。1.1.單克隆抗體的概念單克隆抗體的概念 單克隆單克隆抗體：單個抗體：單個B B細胞克隆產(chǎn)生的細胞克隆產(chǎn)生的化學化學性質(zhì)單一、特異性強性質(zhì)單一

6、、特異性強的抗體的抗體提示提示1 1：對：對B B細胞進行細胞培養(yǎng)可行嗎？細胞進行細胞培養(yǎng)可行嗎？提示提示2 2：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？問題：問題：如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設(shè)如何大量生產(chǎn)單克隆抗體？請嘗試設(shè)計一個方案。計一個方案。2.2.單克隆抗體的制備單克隆抗體的制備一個一個B B淋巴細胞只分泌一種特異性抗體淋巴細胞只分泌一種特異性抗體 骨髓瘤細胞能無限增殖骨髓瘤細胞能無限增殖雜交瘤細胞雜交瘤細胞動物細胞培養(yǎng)技術(shù)動物細胞培養(yǎng)技術(shù)設(shè)計方案：設(shè)計方案：動物細胞融合技術(shù)動物細胞融合技術(shù)單克隆單克隆抗體抗體 既能產(chǎn)生特異性抗體，既能產(chǎn)生特異性

7、抗體， 又能大量增殖的細胞又能大量增殖的細胞B B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合的原因淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合的原因 1、每一個、每一個B淋巴細胞只能分泌一種淋巴細胞只能分泌一種特異性抗體，不同種類的特異性抗體，不同種類的B淋巴細胞淋巴細胞分泌的抗體不同分泌的抗體不同 2、B淋巴細胞在體外培養(yǎng)時不能無淋巴細胞在體外培養(yǎng)時不能無限增值，骨髓瘤細胞能夠無限增值限增值，骨髓瘤細胞能夠無限增值為什么給小鼠注射特定的為什么給小鼠注射特定的抗原蛋白？抗原蛋白？ 會有幾種融合方式？會有幾種融合方式？ 雜交瘤細胞是如何篩選出雜交瘤細胞是如何篩選出來的？有何特點？來的？有何特點？ 是否所有的雜交瘤細胞都是否所有的雜交

8、瘤細胞都能產(chǎn)生專一性抗體？能產(chǎn)生專一性抗體？ 如何大規(guī)模進行培養(yǎng)得到如何大規(guī)模進行培養(yǎng)得到大量的單克隆抗體？大量的單克隆抗體？BBBB 、B B瘤瘤 、瘤瘤瘤瘤 （B B、瘤）、瘤）5 5種種（一選）（一選）選選擇性培養(yǎng)基擇性培養(yǎng)基：只有只有雜交瘤雜交瘤細胞細胞才能存才能存活活獲得產(chǎn)生相應(yīng)獲得產(chǎn)生相應(yīng)抗體的抗體的B B細胞細胞（二選）：選（二選）：選能產(chǎn)生所需能產(chǎn)生所需專專一抗體的雜交一抗體的雜交瘤細胞瘤細胞B與與B融合、瘤瘤融合融合、瘤瘤融合自身融合的細胞：自身融合的細胞：未融合的細胞：未融合的細胞：雜交瘤細胞雜交瘤細胞： B細胞與骨髓瘤細胞融合細胞與骨髓瘤細胞融合5種種 3.單克隆制備過程

9、中用到的生單克隆制備過程中用到的生物技術(shù)手段物技術(shù)手段動物細胞融合動物細胞融合動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)診斷試劑診斷試劑最廣泛應(yīng)用最廣泛應(yīng)用準確、高效、簡易、快速準確、高效、簡易、快速單克隆抗體最主要的優(yōu)點：單克隆抗體最主要的優(yōu)點：特異性強，靈敏特異性強，靈敏度高，并能大量制備。度高，并能大量制備。疾病的診斷、治療和預防疾病的診斷、治療和預防各種癌癥、肝炎病毒、各種癌癥、肝炎病毒、SARSSARS病毒、細菌病毒、細菌 及血吸蟲等數(shù)百種疾病的診斷；及血吸蟲等數(shù)百種疾病的診斷；“生物導彈生物導彈” 單克隆抗體藥物單克隆抗體藥物 單抗導向，藥物為彈頭單抗導向，藥物為彈頭主要用于治療主要用于治療癌癥治療

10、癌癥治療，單克隆抗體作為載體，運載抗，單克隆抗體作為載體，運載抗癌藥物，形成癌藥物，形成“生物導彈生物導彈”，準確殺傷癌變細胞。準確殺傷癌變細胞?！纠? 4】科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融科學家用小鼠骨髓瘤細胞與某種細胞融合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單合，得到雜交細胞，經(jīng)培養(yǎng)可產(chǎn)生大量的單克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（克隆抗體，與骨髓瘤細胞融合的是（ ）A.A.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B B淋巴細胞淋巴細胞 C.C.經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的T T淋巴淋巴細胞細胞B.B.不經(jīng)過免疫的不經(jīng)過免疫的T T淋巴細胞淋巴細胞 D.D.不經(jīng)過免疫的不經(jīng)過免疫的B B淋淋巴細胞巴細胞【例例5 5】單

11、克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的單克隆抗體是由下列哪種細胞產(chǎn)生的 （ ）B B淋巴細胞淋巴細胞 B BT T淋巴細胞淋巴細胞 A.A. C C骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞 D D雜交瘤細胞雜交瘤細胞AD【例例6】用動物細胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下用動物細胞工程技術(shù)獲取單克隆抗體，下列實驗步驟中列實驗步驟中錯誤錯誤的是（的是（ ）A A將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的將抗原注入小鼠體內(nèi)，獲得能產(chǎn)生抗體的B B淋淋巴細胞巴細胞B B用纖維素酶處理用纖維素酶處理B B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞C C用聚乙二醇作誘導劑，促使能產(chǎn)生抗體的用聚乙二醇作誘導劑，促使能產(chǎn)生抗體的B B淋淋巴

12、細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合D D篩選雜交細胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的篩選雜交細胞，并從中選出能產(chǎn)生所需抗體的細胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體細胞群，培養(yǎng)后提取單克隆抗體B兩個過程兩個過程動物細胞培養(yǎng)過程動物細胞培養(yǎng)過程單克隆抗體制備過程單克隆抗體制備過程三個三個“一一”一個誘導細胞融合的新方法一個誘導細胞融合的新方法 滅活病毒滅活病毒一個新細胞雜交瘤細胞一個新細胞雜交瘤細胞一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性一個優(yōu)勢單克隆抗體特異性 強、靈敏度高的優(yōu)勢強、靈敏度高的優(yōu)勢1.1.下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術(shù)的方法，設(shè)計的生產(chǎn)破傷風桿菌的實

13、驗方案風桿菌的實驗方案2 2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？、該方案能達到預期效果嗎？為什么？4 4、圖中、圖中B B為為_過程，常用過程，常用_作為誘導劑，該細胞繼作為誘導劑，該細胞繼承承_的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能_,_,又能又能_。1 1、該實驗方案的目的是、該實驗方案的目的是_3 3、A A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,_,該細胞能夠產(chǎn)生該細胞能夠產(chǎn)生_5 5、C C過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個階段，其培養(yǎng)兩個階段，其中中_代以內(nèi)的的細胞屬于細胞株。代以內(nèi)的的細胞屬于細胞株。制備單克隆抗體制備單克隆抗體B細胞細胞抗體

14、抗體細胞融合細胞融合滅活的病毒滅活的病毒雙親細胞雙親細胞分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖原代原代傳代傳代50B體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群足夠數(shù)量的細胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔AC沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的沒有將抗原注入小鼠體內(nèi)，無法獲得產(chǎn)生單一抗體的B淋巴細胞淋巴細胞.2 2、下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。、下圖是單克隆抗體制備流程階段示意圖。（1 1）_技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。技術(shù)是單克隆抗體技術(shù)的基礎(chǔ)。（2 2）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類，圖中）根據(jù)培養(yǎng)基的用途分類，圖中HATHAT培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。培

15、養(yǎng)基。（3 3）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是）單克隆抗體與常規(guī)的血清抗體相比，最大的優(yōu)越性是_。（4 4）動物細胞融合除了采用植物細胞原生質(zhì)體融合常用的誘導劑外，還可以采）動物細胞融合除了采用植物細胞原生質(zhì)體融合常用的誘導劑外，還可以采用用_。（5 5）選出的雜交瘤細胞既具備骨髓瘤細胞的）選出的雜交瘤細胞既具備骨髓瘤細胞的_特點，又具備淋特點，又具備淋巴細胞的巴細胞的_特點。特點。（6 6）淋巴細胞是由動物體）淋巴細胞是由動物體_中的中的_細胞分化、發(fā)育而來。細胞分化、發(fā)育而來。（7 7）雜交瘤細胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基酸的主要方式是）雜交瘤細胞從培養(yǎng)基中吸收葡萄糖、氨基

16、酸的主要方式是_。動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)選擇選擇特異性強特異性強,靈敏度高靈敏度高滅活的病毒滅活的病毒在體外大量增殖在體外大量增殖分泌特異性抗體分泌特異性抗體骨髓骨髓造血干細胞造血干細胞主動運輸主動運輸1515、（1）單克隆抗體是指）單克隆抗體是指 。（2 2）制備單克隆抗體的步驟：）制備單克隆抗體的步驟：將將_注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細注入小鼠體內(nèi)，從小鼠脾臟中獲得淋巴細胞，其中至少胞，其中至少1 1個淋巴細胞帶有抗該抗原的抗體。個淋巴細胞帶有抗該抗原的抗體。將步驟獲得的將步驟獲得的B B淋巴細胞與步驟培養(yǎng)的骨髓瘤細胞淋巴細胞與步驟培養(yǎng)的骨髓瘤細胞在在_的誘導下融合。的誘導下融合

17、。將誘導后產(chǎn)生的多種細胞，放在將誘導后產(chǎn)生的多種細胞，放在_培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)基的多孔培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。培養(yǎng)板上培養(yǎng)，篩選。這樣獲得的雜交瘤細胞既具有這樣獲得的雜交瘤細胞既具有B B淋巴細胞淋巴細胞_的能力，又具有的能力，又具有_的本領(lǐng)。的本領(lǐng)。檢測和分離帶有抗檢測和分離帶有抗X X抗體的陽性細胞，培養(yǎng)板中每孔放抗體的陽性細胞，培養(yǎng)板中每孔放一個細胞進行培養(yǎng)。一個細胞進行培養(yǎng)。將陽性細胞進行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克將陽性細胞進行增殖，從而制備出大量抗該抗原的單克隆抗體。隆抗體?；瘜W性質(zhì)單一，特異性強的抗體化學性質(zhì)單一，特異性強的抗體抗原抗原聚乙二醇聚乙二醇選擇性選擇性無限增殖無限增殖產(chǎn)生專一抗體產(chǎn)生專一抗體（3）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：）大量制備單克隆抗體的方法主要有兩種：體外培養(yǎng)法，可獲得體外培養(yǎng)法，可獲得10 g/m