分子生物學(xué)復(fù)習(xí)題

1、WORD格式1、分子生物學(xué)的定義。從分子水平研究生物大分子的構(gòu)造與功能從而說(shuō)明生命現(xiàn)象本質(zhì)的科學(xué) ，主要指遺傳信息的傳遞復(fù)制、保持損傷和修復(fù)、基因的表達(dá)轉(zhuǎn)錄和翻譯與調(diào)控。2、簡(jiǎn)述分子生物學(xué)的主要研究?jī)?nèi)容。a.DNA重組技術(shù)基因工程 1可被用于大量生產(chǎn)某些在正常細(xì)胞代謝中產(chǎn)量很低的多肽 ; 2可用于定向改造某些生物的基因組構(gòu)造 ; 3可被用來(lái)進(jìn)展根底研究b. 基因的表達(dá)調(diào)控在個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育過(guò)程中生物遺傳信息的表達(dá)按一定時(shí)序發(fā)生變化時(shí)序調(diào)節(jié)，并隨著內(nèi)外環(huán)境的變化而不斷加以修正環(huán)境調(diào)控。c. 生物大分子的構(gòu)造和功能研究( 構(gòu)造分子生物學(xué)一個(gè)生物大分子，無(wú)論是核酸、蛋白質(zhì)或多糖，在發(fā)揮生物學(xué)功能時(shí)，必須

2、具備兩個(gè)前提：(1) 擁有特定的空間構(gòu)造三維構(gòu)造；(2) 發(fā)揮生物學(xué)功能的過(guò)程中必定存在著構(gòu)造和構(gòu)象的變化。構(gòu)造分子生物學(xué)就是研究生物大分子特定的空間構(gòu)造及構(gòu)造的運(yùn)動(dòng)變化與其生物學(xué)功能關(guān)系的科學(xué)。它包括 3 個(gè)主要研究方向：(1) 構(gòu)造的測(cè)定 (2) 構(gòu)造運(yùn)動(dòng)變化規(guī)律的探索 (3) 構(gòu)造與功能相互關(guān)系d. 基因組、功能基因組與生物信息學(xué)研究3、談?wù)勀銓?duì)分子生物學(xué)未來(lái)開(kāi)展的看法？(1) 分子生物學(xué)的開(kāi)展提醒了生命本質(zhì)的高度有序性和一致性，是人類認(rèn)識(shí)論上的重大飛躍。 生命活動(dòng)的一致性， 決定了二十一世紀(jì)的生物學(xué)將是真正的系統(tǒng)生物學(xué)，是生物學(xué)X圍內(nèi)所有學(xué)科在分子水平上的統(tǒng)一。(2) 分子生物學(xué)是目前

3、自然學(xué)科中進(jìn)展最迅速、最具活力和生氣的領(lǐng)域，也是新世紀(jì)的帶頭學(xué)科。專業(yè)資料整理WORD格式(3) 分子生物學(xué)是由生物化學(xué)、生物物理學(xué)、遺傳學(xué)、微生物學(xué)、細(xì)胞學(xué)、以及信息科學(xué)等多學(xué)科相互滲透、 綜合融會(huì)而產(chǎn)生并開(kāi)展起來(lái)的， 同時(shí)也推動(dòng)這些學(xué)科的開(kāi)展。(4) 分子生物學(xué)涉及認(rèn)識(shí)生命的本質(zhì)，它也就自然廣泛的滲透到醫(yī)學(xué)、藥學(xué)各學(xué)科領(lǐng)域中，成為現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)重要的根底。1、DNA雙螺旋模型是哪年、由誰(shuí)提出的簡(jiǎn)述其根本內(nèi)容。DNA 雙螺旋模型在1953 年由 Watson 和 Crick 提出的。根本內(nèi)容：(1)兩條反向平行的多核苷酸鏈圍繞同一中心軸相互纏繞，兩條鏈均為右手雙螺旋。(2) 嘌呤與嘧啶堿位于雙螺

4、旋的內(nèi)側(cè)， 3,5 - 磷酸與核糖在外側(cè)，彼此通過(guò)磷酸二酯鍵相連接，形成 DNA分子的骨架。(3) 雙螺旋的平均直徑為 2nm,兩個(gè)相鄰堿基對(duì)之間相距的高度即堿基堆積距離。為 0.34nm, 兩個(gè)核苷酸之間的夾角為 36 。(4) 兩條核苷酸鏈依靠彼此堿基之間形成的氫鍵相連系而結(jié)合在一起，A與 T相配對(duì)形成兩個(gè)氫鍵， G與 C相配對(duì)形成 3 個(gè)氫鍵。(5) 堿基在一條鏈上的排列順序不受任何限制， 但根據(jù)堿基互補(bǔ)配對(duì)原那么， 當(dāng)一條多核苷酸的序列被確定后，即可決定另一條互補(bǔ)鏈的序列。專業(yè)資料整理WORD格式2、DNA的雙螺旋構(gòu)造有哪幾種不同形式，各有何特點(diǎn)？形式： A-DNA構(gòu)象、 B-DNA構(gòu)

5、象、 Z-DNA構(gòu)象A-DNA 構(gòu)象：外型粗短，右手雙螺旋，大溝很窄很深，小溝很寬而淺，糖苷鍵構(gòu)象為反式。B-DNA 構(gòu)象：外型適中，右手雙螺旋，大溝很寬較深，小溝窄而深，糖苷鍵構(gòu)象為反式。Z-DNA 構(gòu)象：外型細(xì)長(zhǎng)，左手雙螺旋，大溝平坦，小溝較窄很深，磷酸核糖骨架呈 Z 字性走向，糖苷鍵構(gòu)象為C、T 反式， G順式。3、簡(jiǎn)述 DNA的 C-值以及 C-值矛盾 C Value paradox 。(1) C- 值是一種生物的單倍體基因組 DNA的總量。(2) 形態(tài)學(xué)的復(fù)雜程度物種的生物復(fù)雜性與 C-值大小的不一致，稱為 C-值矛盾 (C- 值悖理 ) 。4、簡(jiǎn)述真核生物染色體上組蛋白的種類，組蛋

6、白修飾的種類及其生物學(xué)意義。真核生物染色體上組蛋白的種類：H1、H2A、H2B、H3、H4。組蛋白修飾的種類：甲基化、乙?；?、磷酸化、泛素化及ADP核糖基化等。H3、H4 修飾作用較普遍， H2B有乙?；饔?， H1有磷酸化作用。組蛋白修飾的意義：(1) 改變?nèi)旧w的構(gòu)造，直接影響轉(zhuǎn)錄活性；(2) 核小體外表發(fā)生改變， 使其他調(diào)控蛋白易于和染色質(zhì)相互接觸， 從而間接影響轉(zhuǎn)錄活性。專業(yè)資料整理WORD格式5、比較原核、真核基因組的特點(diǎn)。(1) 原核生物基因組構(gòu)造特點(diǎn)a. 基因組很小，大多只有一條染色體b. 原核生物基因主要是單拷貝基因c. 構(gòu)造簡(jiǎn)煉d. 存在轉(zhuǎn)錄單元 (trnascription

7、al operon)e. 多順?lè)醋?(polycistron)f. 有重疊基因 Sanger 發(fā)現(xiàn)(2) 真核生物基因組構(gòu)造特點(diǎn)a. 真核基因組構(gòu)造龐大 , 一般遠(yuǎn)大于原核的b. 含有大量重復(fù)序列c. 非編碼序列多 , 多于編碼序列d. 轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為單順?lè)醋觘. 基因不連續(xù)性斷裂基因interrupted gene、內(nèi)含子 (intron)、外顯子 (exon)f. 存在大量的順式作用元件。啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等g. 存在大量的 DNA多態(tài)性 (DNA序列中發(fā)生變異而導(dǎo)致的個(gè)體間核苷酸序列的差異 )h. 端粒構(gòu)造 ( 端粒是真核染色體末端的蛋白質(zhì) -DNA構(gòu)造 , 其功能是完成染色體末端的復(fù)制 , 可

8、防止染色體融合、重組和降解。端粒的構(gòu)造和功能都是十分保守的 )專業(yè)資料整理WORD格式1、請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)一個(gè)實(shí)驗(yàn)來(lái)證明DNA復(fù)制是以半保存方式進(jìn)展的。專業(yè)資料整理WORD格式將大腸桿菌長(zhǎng)期在以 15N作氮源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，通培養(yǎng)液中培養(yǎng)，然后在不同時(shí)刻收集大腸桿菌并提取,再將其轉(zhuǎn)移到含14N的普DNA，再將 DNA在氯化銫專業(yè)資料整理WORD格式密度梯度離心，記錄其位置，假設(shè)離心后有三條帶( 自上而下為15N,15N/14N,14N),那么專業(yè)資料整理WORD格式證明 DNA復(fù)制是以半保存方式進(jìn)展的。專業(yè)資料整理WORD格式2、名詞解釋岡崎片段 ：在 DNA復(fù)制過(guò)程中，前導(dǎo)鏈能連續(xù)合成，而滯后鏈只能是

9、斷續(xù)的合成 53的多個(gè)短片段，這些不連續(xù)的小片段稱為岡崎片段。Replicon ：是指遺傳物質(zhì)的傳代，以母鏈DNA為模板合成子鏈DNA 的過(guò)程。semi-conservative replication：由親代DNA生成子代DNA時(shí)，每個(gè)新形成的子代DNA中，一條鏈來(lái)自親代DNA，而另一條鏈那么是新合成的，這種復(fù)制方式稱半保留復(fù)制。3、原核 DNA合成酶中 C 的主要功能是合成前導(dǎo)鏈和岡崎片段A、DNA聚合酶B 、DNA聚合酶C 、DNA聚合酶D 、引物酶專業(yè)資料整理WORD格式1、簡(jiǎn)要說(shuō)明細(xì)胞中DNA的錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)。Dam 甲基化酶使母鏈位于 5-GATC序列中腺苷酸的 N6位甲基化，一旦復(fù)

10、制叉通過(guò)復(fù)制起始點(diǎn)， 母鏈就會(huì)在開(kāi)場(chǎng) DNA合成前的幾秒鐘至幾分鐘內(nèi)被甲基化。 此后，只要兩條 DNA鏈上堿基配對(duì)出現(xiàn)錯(cuò)誤，錯(cuò)配修復(fù)系統(tǒng)根據(jù)“保存母鏈，修正子鏈的原那么，找到錯(cuò)誤堿基所在的 DNA鏈，并在對(duì)應(yīng)于母鏈甲基化腺苷酸上游鳥(niǎo)苷酸的 5位置切開(kāi)子鏈，再根據(jù)錯(cuò)配堿基相對(duì)于 DNA切口的方位啟動(dòng)修復(fù)途徑，合成新的子鏈 DNA片段。2、簡(jiǎn)要說(shuō)明細(xì)胞中DNA的堿基切除修復(fù)系統(tǒng)。所有細(xì)胞中都帶有不同類型，能識(shí)別受損核酸位點(diǎn)的核苷酸水解酶，它能特異性切除受損核苷酸上的 N-糖苷鍵，在 DNA鏈上形成去嘌呤或去嘧啶位點(diǎn)，統(tǒng)稱 AP位點(diǎn)。DNA分子中一旦產(chǎn)生 AP位點(diǎn)，AP核酸內(nèi)切酶把受損核苷酸的糖苷-

11、 磷酸鍵切開(kāi)，并移去包括 AP位點(diǎn)核苷酸在內(nèi)的小片段 DNA，由 DNA聚合酶合成新的片段，最終由 DNA連接酶把兩者連成新的被修復(fù)的 DNA鏈。3、簡(jiǎn)要說(shuō)明細(xì)胞中DNA的核苷酸切除修復(fù)系統(tǒng)。首先由 DNA切割酶在已損傷的核苷酸 5和 3位分別切開(kāi)磷酸糖苷鍵，產(chǎn)生一個(gè)由 12-13 個(gè)核苷酸 ( 原核生物 ) 或 27-29 個(gè)核苷酸 ( 真核生物 ) 的小片段，移去小片段后由 DNA聚合酶 ( 原核 ) 或( 真核 ) 合成新的片段，并由 DNA連接酶將切口補(bǔ)平。專業(yè)資料整理WORD格式4、簡(jiǎn)要說(shuō)明細(xì)胞中SOS修復(fù)系統(tǒng)。SOS修復(fù)是指 DNA受到嚴(yán)重?fù)p傷、 細(xì)胞處于危急狀態(tài)時(shí)所誘導(dǎo)的一種 D

12、NA修復(fù)方式，修復(fù)結(jié)果只是能維持基因組的完整性，提高細(xì)胞的生存率，但留下的錯(cuò)誤較多。當(dāng)細(xì)胞 DNA復(fù)制受阻時(shí)， LexA 蛋白被 RecA蛋白觸發(fā)，發(fā)生自身催化的水解作用， SOS系統(tǒng)被激活， LexA 基因表達(dá)也增加。DNA 復(fù)制正常后， RecA蛋白失活， LexA 蛋白恢復(fù)對(duì) SOS系統(tǒng)的阻遏作用。5、名詞解釋轉(zhuǎn)座子： 基因組上不必借助于同源序列就可移動(dòng)的DNA片段稱為轉(zhuǎn)座子（ transposons 或轉(zhuǎn)座元件。轉(zhuǎn)座：轉(zhuǎn)座子復(fù)制，一個(gè)拷貝插入基因組的新位置，原來(lái)位置上仍保存一個(gè)拷貝的過(guò)程。復(fù)合轉(zhuǎn)座子： 一類帶有某些抗藥性基因或其他宿主基因的轉(zhuǎn)座子，其兩翼往往是兩個(gè)一樣或高度同源的IS

13、序列。一、名詞解釋：Transcription：DNA分子中的遺傳信息轉(zhuǎn)移到RNA分子中的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)錄。即生物體以 DNA為模板合成 RNA的過(guò)程。轉(zhuǎn)錄的不對(duì)稱性： 在 RNA的合成中， DNA的二條鏈中僅有一條鏈可作為轉(zhuǎn)錄的模板，稱為轉(zhuǎn)錄的不對(duì)稱性。編碼鏈：與 mRNA序列一樣的那條 DNA鏈稱為編碼鏈 coding strand 或稱有意義鏈 sense strand 。專業(yè)資料整理WORD格式二、選擇題、填空題：1、以下有關(guān) TATA盒(Hognessbox) 的表達(dá) , 哪個(gè)是正確的 : (B)專業(yè)資料整理WORD格式A.它位于第一個(gè)構(gòu)造基因處B.它和RNA聚合酶結(jié)合專業(yè)資料整理WOR

14、D格式C.它編碼阻遏蛋白D.它和反密碼子結(jié)合專業(yè)資料整理WORD格式2. 轉(zhuǎn)錄需要的原料是 : (D)專業(yè)資料整理WORD格式A.dNTPB.dNDPC.dNMPD.NTPE.NMP專業(yè)資料整理WORD格式3、原核生物 RNA 聚合酶核心酶由 2 個(gè)亞基、 1 個(gè)亞基、 1 個(gè) 亞基和 1個(gè)亞基 組成，全酶由核心酶和一個(gè) 亞基 組成。4、DNA模板鏈為 5 -ATTCAG-3 ,其轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是 : (D)A. 5-GACTTA-3B. 5-CTGAAT-3C. 5-UAAGUC-3D. 5-CUGAAU-3專業(yè)資料整理WORD格式5、真核生物的mRNA加工過(guò)程中 ,5 端加上 7- 甲基鳥(niǎo)核苷三

15、磷酸m7Gppp帽，在 3端加上多聚腺苷酸 poly A 尾巴，后者由多聚腺苷酸聚合酶催化。如果被轉(zhuǎn)錄基因是不連續(xù)的， 那么，內(nèi)含子一定要被切除， 并通過(guò) 剪接 過(guò)程將 外顯子連接在一起。6、10 位的 TATAAT區(qū)和 35 位的 TTGACA區(qū)是 RNA聚合酶與啟動(dòng)子的結(jié)合位點(diǎn)，能與 因子相互識(shí)別而具有很高的親和力。7、下面那一項(xiàng)不屬于原核生物mRNA的特征 C A ：半衰期短B：存在多順?lè)醋拥男问紺：5端有帽子構(gòu)造D：3端沒(méi)有或只有較短的多聚A構(gòu)造8、真核細(xì)胞中的mRNA帽子構(gòu)造是 A A. 7-甲基鳥(niǎo)嘌呤核苷三磷酸B. 7-甲基尿嘧啶核苷三磷酸專業(yè)資料整理WORD格式C. 7-甲基腺嘌

16、呤核苷三磷酸D. 7-甲基胞嘧啶核苷三磷酸專業(yè)資料整理WORD格式三、名詞解釋核酶：具有催化功能的RNA分子。RNA的剪接： 切除 RNA內(nèi)含子序列相應(yīng)的外顯子序列連接成一個(gè)連續(xù)的過(guò)程。mRNA的專業(yè)資料整理WORD格式RNA的編輯： 指轉(zhuǎn)錄后的 RNA在編碼區(qū)發(fā)生堿基的突變、參加或喪失等現(xiàn)象。四、簡(jiǎn)答：分別說(shuō)出5 種以上 RNA的功能？(1) 作為遺傳物質(zhì)。某些病毒以 RNA為遺傳物質(zhì)。(2) 參與基因表達(dá)的調(diào)控，與生物的生長(zhǎng)發(fā)育密切相關(guān)。(3) 作為細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)生物合成的主要參與者。(4) 催化作用。核酶是一類具有催化功能的 RNA分子。(5) 核糖體的構(gòu)造成分。核糖體由 rRNA和蛋白質(zhì)

17、組成。書(shū)本 P1134、簡(jiǎn)述 RNA轉(zhuǎn)錄的概念及根本過(guò)程。轉(zhuǎn)錄 (transcription)：DNA分子中的遺傳信息轉(zhuǎn)移到RNA分子中的過(guò)程稱為轉(zhuǎn)錄。即生物體以DNA為模板合成 RNA的過(guò)程。根本過(guò)程：模板識(shí)別、轉(zhuǎn)錄起始、通過(guò)啟動(dòng)子及轉(zhuǎn)錄的延伸和終止。專業(yè)資料整理WORD格式(1) 起始位點(diǎn)的識(shí)別： RNA聚合酶與啟動(dòng)子 DNA雙鏈相互作用并與之相結(jié)合的過(guò)程。(2) 轉(zhuǎn)錄起始： RNA鏈上第一個(gè)磷酸二酯鍵的產(chǎn)生。(3) RNA鏈的延伸： a. 亞基脫落， RNA聚合酶核心酶變構(gòu)，與模板結(jié)合松弛，沿著 DNA模板前移； b. 在核心酶作用下， NTP不斷聚合， RNA鏈不斷延長(zhǎng)。(4) 轉(zhuǎn)錄終

18、止： RNA聚合酶起始基因轉(zhuǎn)錄后，它就會(huì)沿著模板 53方向不斷移動(dòng)，合成 RNA鏈，直到碰上終止信號(hào)時(shí)才與模板 DNA相脫離并釋放新生 RNA鏈。終止發(fā)生時(shí)，所有參與形成 RNA-DNA雜合體的氫鍵都必須被破壞， 模板 DNA鏈才能與有意義鏈重新組合成 DNA鏈。6、大腸桿菌的RNA聚合酶由哪些組成成分，各個(gè)亞基的作用如何？大腸桿菌 RNA 聚合酶由核心酶 2 個(gè)亞基、 1 個(gè)亞基、 1 個(gè) 亞基和 1 個(gè)亞基和一個(gè) 亞基組成。亞基 核心酶組裝，啟動(dòng)子識(shí)別亞基， 亞基共同形成 RNA合成的活性中心亞基 存在多種 因子，用于識(shí)別不同的啟動(dòng)子亞基 未知8、簡(jiǎn)述因子的作用。(1) 負(fù)責(zé)模板鏈的選擇和

19、轉(zhuǎn)錄的開(kāi)場(chǎng)，是酶的別構(gòu)效應(yīng)物，使酶專一性識(shí)別模板上的啟動(dòng)子。(2) 極大地提高 RNA聚合酶對(duì)啟動(dòng)子區(qū) DNA序列的親和力，酶底結(jié)合常數(shù)提高 103倍，酶底復(fù)合物的半衰期可達(dá)數(shù)小時(shí)甚至數(shù)十小時(shí)。專業(yè)資料整理WORD格式(3) 使 RNA聚合酶與模板 DNA上非特異性位點(diǎn)的結(jié)合常數(shù)降低 104倍，使非特異性位點(diǎn)酶底復(fù)合物的半衰期小于 1s.(4) 在某些細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)含有能識(shí)別不同啟動(dòng)子的 因子，以適應(yīng)不同生長(zhǎng)發(fā)育階段的要求，調(diào)控不同基因轉(zhuǎn)錄的起始。9、什么是Pribnow box？它的保守序列是什么？Pribnow box指在被RNA聚合酶保護(hù)的DNA片段中有一個(gè)由 5 個(gè)核苷酸組成的共同序列，是

20、 RNA聚合酶嚴(yán)密結(jié)合位點(diǎn)。保守序列為 TATAAT。11、簡(jiǎn)述原核生物和真核生物mRNA的區(qū)別。(1) 原核生物 mRNA的特征半衰期短；多以多順?lè)醋拥男问酱嬖趩雾樂(lè)醋?mRNA：只編碼一個(gè)蛋白質(zhì)的 mRNA。(2)真核生物 mRNA的特征多順?lè)醋?mRNA：編碼多個(gè)蛋白質(zhì)的 mRNA。5端存在“帽子構(gòu)造；多數(shù) mRNA 3端具有 poly A 尾巴組蛋白除外；以單順?lè)醋拥男问酱嬖凇?14、真核生物的初級(jí)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物必須經(jīng)過(guò)哪些加工才能成為成熟 mRNA，以用作蛋白質(zhì)的合成模板。(1) 5 端加帽： 5端的一個(gè)核苷酸總是 7- 甲基鳥(niǎo)核苷三磷酸 (m7Gppp)(2) 3 端加尾：多聚腺苷酸尾巴

21、(3) RNA 的剪接(4) RNA 的編輯專業(yè)資料整理WORD格式17、什么是 RNA編輯？其生物學(xué)意義？RNA 編輯指轉(zhuǎn)錄后的RNA在編碼區(qū)發(fā)生堿基的突變、參加或喪失等現(xiàn)象。生物學(xué)意義 :(1) 校正作用 : 有些基因在突變過(guò)程中喪失的遺傳信息可能通過(guò)RNA編輯修復(fù)。(2) 調(diào)控翻譯 : 通過(guò)編輯可以構(gòu)建和去除起始或終止密碼子，是基因表達(dá)調(diào)控的一種方式。(3) 擴(kuò)大遺傳信息 : 能是基因產(chǎn)物獲得新的構(gòu)造和功能，有利于生物進(jìn)化。1、簡(jiǎn)述 PCR的根本原理。聚合酶鏈?zhǔn)椒错?(Polymerase Chain Reaction，PCR)首先將雙鏈 DNA分子加熱別離成兩條單鏈， DNA聚合酶以單

22、鏈 DNA為模板并利用反響混合物中的四種dNTP合成新生的 DNA互補(bǔ)鏈。PCR的根本原理：變性、復(fù)性、半保存復(fù)制PCR三步曲：變性 90 97、退火 45 55、延伸 72 左右。2、簡(jiǎn)述實(shí)時(shí)定量PCR的原理和過(guò)程。實(shí)時(shí)定量 PCR是基于 PCR技術(shù)的利用不同的熒光檢測(cè)來(lái)給核酸定量的技術(shù)。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR技術(shù)原理是在 PCR反響體系中參加熒光基團(tuán)， 利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)展定量分析的方法。專業(yè)資料整理WORD格式3、簡(jiǎn)述基因組 DNA 文庫(kù)的構(gòu)建流程。專業(yè)資料整理WORD格式(1) 載體的制備；(2) 高純度大分子量基因組 DNA的提?。?3

23、)高分子量 HMW DNA的局部酶切與脈沖電泳分級(jí)別離PFGEsize selection；(4) 載體與外源片段的連接與轉(zhuǎn)化或侵染宿主細(xì)胞；(5) 重組克隆的挑取和保存。4、蛋白質(zhì)組學(xué)的研究對(duì)象和目的是什么？主要有哪些技術(shù)和方法？研究對(duì)象和目的：在大規(guī)模水平上研究蛋白質(zhì)的特征，包括蛋白質(zhì)的表達(dá)水平，翻譯后的修飾，蛋白與蛋白相互作用等，由此獲得蛋白質(zhì)水平上的關(guān)于疾病發(fā)生，細(xì)胞代謝等過(guò)程的整體而全面的認(rèn)識(shí)。技術(shù)和方法： Western印跡法、蛋白質(zhì)的質(zhì)譜分析技術(shù)、雙向電泳技術(shù)、熒光差異顯示雙向電泳技術(shù)。雙向電泳技術(shù)two-dimensional electrophoresis是等電聚焦電泳和SD

24、S-PAGE的組合，即先進(jìn)展等電聚焦電泳，然后再進(jìn)展 SDS-PAGE按照分子大小，經(jīng)染色得到的電泳圖是個(gè)二維分布的蛋白質(zhì)圖。5、真核細(xì)胞 mRNA的哪一構(gòu)造特征可用來(lái)別離純化mRNA？請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)別離純化真核細(xì)胞 mRNA。mRNA 分子最顯著的構(gòu)造特征：5-m7G帽子， 3-poly尾巴。設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)別離純化真核細(xì)胞mRNA：1、異硫氰酸胍 - 苯酚抽提法抽提總RNA，2、寡聚 (dT)- 纖維素柱色譜法純化mRNA：專業(yè)資料整理WORD格式(1)利用 mRNA含有 3-poly尾巴，當(dāng) RNA流經(jīng)寡聚 (dT)- 纖維素柱時(shí)， mRNA被特異性的結(jié)合在柱上；(2) 然后用低鹽溶液或蒸餾水洗脫

25、mRNA。6、名詞解釋克隆：個(gè)體水平 ：表示由具有一樣基因型的同一物種的兩個(gè)或數(shù)個(gè)個(gè)體組成的群體。如：?jiǎn)温央p生。細(xì)胞水平 ：指由同一個(gè)祖細(xì)胞分裂而來(lái)的一群帶有完全一樣遺傳物質(zhì)的子細(xì)胞。分子水平 ：將外源 DNA插入具有復(fù)制能力的載體DNA中，使之得以永久保存和復(fù)制的過(guò)程。cDNA 文庫(kù)：以 mRNA為模板，經(jīng)反轉(zhuǎn)錄酶催化，在體外反轉(zhuǎn)錄成cDNA，與適當(dāng)?shù)妮d體常用噬菌體或質(zhì)粒載體連接后，通過(guò)受體菌轉(zhuǎn)化，那么每個(gè)受體菌含有一段 cDNA，并能繁殖擴(kuò)增，這樣包含著細(xì)胞全部mRNA信息的 cDNA克隆集合稱為該組織細(xì)胞的cDNA文庫(kù)。SNP ：指單核苷酸多態(tài)位點(diǎn)， 指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所

26、引起的一種 DNA序列多態(tài)性。單個(gè)核苷酸的變異，包括置換、顛換、缺失和插入。一、選擇題：1、一個(gè)操縱子元通常含有B(A) 數(shù)個(gè)啟動(dòng)序列和一個(gè)編碼基因(B) 一個(gè)啟動(dòng)序列和數(shù)個(gè)編碼基因?qū)I(yè)資料整理WORD格式(C) 一個(gè)啟動(dòng)序列和一個(gè)編碼基因(D) 兩個(gè)啟動(dòng)序列和數(shù)個(gè)編碼基因(E) 數(shù)個(gè)啟動(dòng)序列和數(shù)個(gè)編碼基因2、乳糖操縱子元的直接誘導(dǎo)劑是E 專業(yè)資料整理WORD格式(A)葡萄糖(B)乳糖(C)一半乳糖苷酶專業(yè)資料整理WORD格式(D)透過(guò)酶(E)異構(gòu)乳糖專業(yè)資料整理WORD格式3、Lac 阻遏蛋白結(jié)合乳糖操縱子元的B 專業(yè)資料整理WORD格式(A) CAP結(jié)合位點(diǎn)(B) O序列(C) P序列專業(yè)

27、資料整理WORD格式(D) Z基因(E) I基因?qū)I(yè)資料整理WORD格式4、cAMP與 CAP結(jié)合、 CAP介導(dǎo)正性調(diào)節(jié)發(fā)生在C (A) 葡萄糖及 cAMP濃度極高時(shí)(B) 沒(méi)有葡萄糖及 cAMP較低時(shí)(C) 沒(méi)有葡萄糖及 cAMP較高時(shí)(D) 有葡萄糖及 cAMP較低時(shí)(E) 有葡萄糖及 CAMP較高時(shí)5、Lac 阻遏蛋白由D 專業(yè)資料整理WORD格式(A) Z基因編碼(B) Y基因編碼(C) A基因編碼專業(yè)資料整理WORD格式(D) I基因編碼(E)以上都不是專業(yè)資料整理WORD格式二、問(wèn)答題：1、簡(jiǎn)述乳糖操縱子調(diào)控模型。 Z 、Y、A 基因的產(chǎn)物由同一條多順?lè)醋拥膍RNA分子所編碼；專業(yè)

28、資料整理WORD格式這個(gè) mRNA分子的啟動(dòng)子緊接著 O區(qū)，而位于 I 與 O之間的啟動(dòng)子區(qū) P，不能單獨(dú)起動(dòng)合成- 半乳糖苷酶和透過(guò)酶的生理過(guò)程；操縱基因是 DNA上的一小段序列僅為 26bp，是阻遏物的結(jié)合位點(diǎn)；當(dāng)阻遏物與操縱基因結(jié)合時(shí)， lac mRNA 的轉(zhuǎn)錄起始受到抑制；誘導(dǎo)物通過(guò)與阻遏物結(jié)合，改變它的三維構(gòu)象，使之不能與操縱基因結(jié)合，從而激發(fā) lac mRNA的合成。當(dāng)有誘導(dǎo)物存在時(shí)，操縱基因區(qū)沒(méi)有被阻遏物占據(jù)，所以啟動(dòng)子能夠順利起始 mRNA的合成。2、分別簡(jiǎn)述 lacI、lacO 突變或 Crp基因突變對(duì)乳糖操縱子表達(dá)的影響。當(dāng) lacI 基因由弱啟動(dòng)子突變成強(qiáng)啟動(dòng)子， 細(xì)胞內(nèi)

29、就不可能產(chǎn)生足夠的誘導(dǎo)物來(lái)抑制阻遏狀態(tài)，整個(gè) lac 操縱子在這些突變體中就不可誘導(dǎo)。無(wú)誘導(dǎo)物， lacI 構(gòu)造基因不表達(dá)， lacI 基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生阻遏物單體，結(jié)合形成同源四體，與 O區(qū) DNA相結(jié)合，阻遏基因轉(zhuǎn)錄；誘導(dǎo)物啟動(dòng) lacI 構(gòu)造基因轉(zhuǎn)錄，使 lacI 變成不能與 O區(qū)相結(jié)合的非活性形式， RNA聚合酶與 lac 啟動(dòng)子相結(jié)合，起始基因轉(zhuǎn)錄， mRNA被轉(zhuǎn)錄成 3 個(gè)蛋白質(zhì)。代謝物激活蛋白 CAP/ 環(huán)腺苷酸受體蛋白 CRP由 Crp 基因編碼，能與cAMP形成復(fù)合物。無(wú)葡萄糖，cAMP濃度高時(shí)促進(jìn)轉(zhuǎn)錄；有葡萄糖，cAMP濃度低時(shí)不促進(jìn)轉(zhuǎn)錄。3、什么是葡萄糖效應(yīng)？簡(jiǎn)述其作用機(jī)理。葡

30、萄糖效應(yīng)：有葡萄糖存在的情況下， 即使在細(xì)菌培養(yǎng)基中參加乳糖、 半乳糖、阿拉伯糖或麥芽糖等誘導(dǎo)物， 與其相對(duì)應(yīng)的操縱子也不會(huì)啟動(dòng)， 產(chǎn)生出代謝這些專業(yè)資料整理WORD格式糖的酶的現(xiàn)象。機(jī)理：添加葡萄糖后，葡萄糖是最方便的能源，細(xì)菌所需要的能量可從葡萄糖中得到滿足， 無(wú)需開(kāi)啟一些不常用的基因去利用這些稀有糖類。葡萄糖的存在會(huì)抑制細(xì)菌的腺苷酸環(huán)化酶活性，減少環(huán)腺苷酸 (cAMP)的合成，與它相結(jié)合的蛋白質(zhì)即環(huán)腺苷酸受體蛋白(CRP)又稱分解代謝物激活蛋白(CAP)因找不到配體而不能形成復(fù)合物。三、名詞解釋：組成 ( 永久 ) 型表達(dá)： 指不受環(huán)境變化或代謝狀態(tài)影響的一類基因表達(dá)。適應(yīng)型調(diào)節(jié)型表達(dá)：

31、指環(huán)境的變化容易使其表達(dá)水平變動(dòng)的一類基因的表達(dá)。正轉(zhuǎn)錄調(diào)控： 如果在沒(méi)有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)存在時(shí)基因是關(guān)閉的， 參加這種調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)后基因活性就被開(kāi)啟，這樣的調(diào)控稱正轉(zhuǎn)錄調(diào)控。負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控： 在沒(méi)有調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)存在時(shí)基因是表達(dá)的，參加這種調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)后基因表達(dá)活性便被關(guān)閉，這樣的調(diào)控稱負(fù)轉(zhuǎn)錄調(diào)控?？烧T導(dǎo)調(diào)節(jié)： 指一些基因在特殊的代謝物或化合物的作用下，由原來(lái)關(guān)閉的狀態(tài)轉(zhuǎn)變?yōu)楣ぷ鳡顟B(tài)，即在某些物質(zhì)的誘導(dǎo)下使基因活化?？勺瓒粽{(diào)節(jié)： 基因平時(shí)是開(kāi)啟的，處在產(chǎn)生蛋白質(zhì)或酶的工作過(guò)程中，由于一些特殊代謝物或化合物的積累而將其關(guān)閉，阻遏了基因的表達(dá)。核糖體結(jié)合位點(diǎn) (RBS)：mRNA鏈上起始密碼子AUG上游的一段非翻

32、譯區(qū)。撫慰誘導(dǎo)物： 如果某種物質(zhì)能夠促使細(xì)菌產(chǎn)生酶而本身又不被分解， 這種物質(zhì)被稱為撫慰誘導(dǎo)物，如 IPTG異丙基 - -D- 硫代半乳糖苷。DNA中可導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄過(guò)早終止的一段核甘酸序列 123-150 區(qū)。弱化子：專業(yè)資料整理WORD格式四、什么是操縱子 operon) 試說(shuō)明色氨酸操縱子 Trp operon) 在原核基因表達(dá)調(diào)控中的調(diào)控機(jī)制和重要作用。操縱子 operon) 是基因表達(dá)的協(xié)調(diào)單位，由啟動(dòng)子、操縱基因及其所控制的一組功能上相關(guān)的構(gòu)造基因所組成。操縱基因受調(diào)節(jié)基因產(chǎn)物的控制。調(diào)控機(jī)制： (1)trp 操縱子阻遏系統(tǒng)：系統(tǒng)中效應(yīng)物分子是色氨酸，是由trp操縱子所編碼的生物合成途徑

33、的末端終產(chǎn)物。當(dāng)培養(yǎng)基中色氨酸含量較高時(shí)，它與游離的輔阻遏蛋白相結(jié)合，并使之與操縱區(qū)DNA嚴(yán)密結(jié)合；當(dāng)培養(yǎng)基中色氨酸供應(yīng)缺乏，輔阻遏物失去色氨酸并從操縱區(qū)解離，trp 操縱子去阻遏。(2) trp 操縱子弱化作用：mRNA轉(zhuǎn)錄的終止是通過(guò)前導(dǎo)肽基因的翻譯來(lái)調(diào)節(jié)的，在前導(dǎo)肽基因中有兩個(gè)相鄰的色氨酸密碼子， 前導(dǎo)肽的翻譯必定對(duì) tRNATrp的濃度敏感。當(dāng)培養(yǎng)基中色氨酸濃度很低時(shí)， 負(fù)載有色氨酸的 tRNATrp也就少，翻譯通過(guò)兩個(gè)相鄰色氨酸密碼子的速度就會(huì)很慢， 當(dāng) 4 區(qū)被轉(zhuǎn)錄完成時(shí)， 核糖體才進(jìn)展到 1 區(qū)( 或停留在兩個(gè)相鄰的trp密碼子處 ) ，這時(shí)的前導(dǎo)區(qū)構(gòu)造是 2-3 配對(duì)，不形成

34、3-4 配對(duì)的終止構(gòu)造，所以轉(zhuǎn)錄可繼續(xù)進(jìn)展，直到將trp操縱子中的構(gòu)造基因全部轉(zhuǎn)錄；當(dāng)培養(yǎng)基中色氨酸濃度高時(shí)， 核糖體可順利通過(guò)兩個(gè)相鄰的色氨酸密碼子，在 4 區(qū)被轉(zhuǎn)錄之前，核糖體就到達(dá) 2 區(qū)，這樣使 2-3 不能配對(duì)， 3-4 區(qū)可以自由配對(duì)形成莖 - 環(huán)狀終止子構(gòu)造， 轉(zhuǎn)錄停頓，trp操縱子中的構(gòu)造基因被關(guān)閉而不再合成色氨酸。重要作用： (1) 細(xì)菌通過(guò)弱化作用彌補(bǔ)阻遏作用的缺乏， 因?yàn)樽瓒糇饔弥荒苁罐D(zhuǎn)錄不起始，對(duì)于已經(jīng)起始的轉(zhuǎn)錄，只能通過(guò)弱化作用使之中途停下來(lái)。(2)阻遏作用的信號(hào)是細(xì)胞內(nèi)色氨酸的多少；弱化作用的信號(hào)那么是細(xì)胞內(nèi)載有色專業(yè)資料整理WORD格式氨酸的 tRNA的多少。(3

35、) 色氨酸操縱子通過(guò)前導(dǎo)肽的翻譯來(lái)控制轉(zhuǎn)錄的進(jìn)展，在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)這兩種作用相輔相成，表達(dá)著生物體內(nèi)周密的調(diào)控作用。五、簡(jiǎn)述反義 RNA的調(diào)控機(jī)制。細(xì)菌響應(yīng)環(huán)境壓力 ( 氧化壓力、滲透壓、溫度等 ) 的改變，會(huì)產(chǎn)生一些非編碼的小 RNA分子，能與 mRNA中特定序列配對(duì)并改變所配對(duì) mRNA分子的構(gòu)象，導(dǎo)致翻譯過(guò)程被開(kāi)啟或關(guān)閉，也可能導(dǎo)致目標(biāo) mRNA分子的快速降解。六、簡(jiǎn)述原核基因轉(zhuǎn)錄后調(diào)控的不同方式。(1) mRNA 自身構(gòu)造對(duì)翻譯起始的調(diào)控(2) mRNA 穩(wěn)定性對(duì)轉(zhuǎn)錄水平的影響(3) 調(diào)節(jié)蛋白的調(diào)控作用(4) 反義 RNA的調(diào)節(jié)作用(5) 翻譯的阻遏(6) 稀有密碼子對(duì)翻譯的影響(7) 重

36、疊基因?qū)Ψg的影響(8) RNA 高級(jí)構(gòu)造對(duì)翻譯的影響(9) 魔斑核苷酸水平對(duì)翻譯的影響1、試說(shuō)明真核細(xì)胞與原核細(xì)胞在基因轉(zhuǎn)錄，翻譯及DNA的空間構(gòu)造方面存在的主要差異，表現(xiàn)在哪些方面？專業(yè)資料整理WORD格式(1) 在真核細(xì)胞中，一條成熟的 mRNA鏈只能翻譯出一條多肽鏈，很少存在原核生物中常見(jiàn)的多基因操縱子形式。(2) 真核細(xì)胞 DNA與組蛋白和大量非組蛋白相結(jié)合， 只有一小局部 DNA是裸露的。(3) 高等真核細(xì)胞 DNA中很大局部是不轉(zhuǎn)錄的， 大局部真核細(xì)胞的基因中間還存在不被翻譯的內(nèi)含子。(4) 真核生物能夠有序地根據(jù)生長(zhǎng)發(fā)育階段的需要進(jìn)展 DNA片段重排，還能在需要時(shí)增加細(xì)胞內(nèi)某些

37、基因的拷貝數(shù)。(5) 在真核生物中， 基因轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)區(qū)相對(duì)較大， 它們可能遠(yuǎn)離啟動(dòng)子達(dá)幾百個(gè)甚至上千個(gè)堿基對(duì)，這些調(diào)節(jié)區(qū)一般通過(guò)改變整個(gè)所控制基因5上游區(qū) DNA構(gòu)型來(lái)影響它與 RNA聚合酶的結(jié)合能力。在原核生物中，轉(zhuǎn)錄的調(diào)節(jié)區(qū)都很小，大都位于啟動(dòng)子上游不遠(yuǎn)處，調(diào)控蛋白結(jié)合到調(diào)節(jié)位點(diǎn)上可直接促進(jìn)或抑制RNA聚合酶與它的結(jié)合。(6) 真核生物的 RNA在細(xì)胞核中合成，只有經(jīng)轉(zhuǎn)運(yùn)穿過(guò)核膜，到達(dá)細(xì)胞質(zhì)后，才能被翻譯成蛋白質(zhì)；原核生物中不存在這樣嚴(yán)格的空間間隔。(7) 許多真核生物的基因只有經(jīng)過(guò)復(fù)雜的成熟和剪接過(guò)程，才能順利地翻譯成蛋白質(zhì)。2、反式作用因子上的幾種重要的DNA結(jié)合構(gòu)造域有哪幾種？常見(jiàn)的

38、 DNA結(jié)合構(gòu)造域包括：堿性氨基酸結(jié)合域、酸性激活域、專業(yè)資料整理WORD格式谷氨酰胺 (Q) 富含域、脯氨酸 (P) 富含域等。螺旋 - 轉(zhuǎn)折 - 螺旋 Helix-turn-helix，H-T-H構(gòu)造鋅指構(gòu)造 zinc finger堿性 - 亮氨酸拉鏈 basic - leucine zipper堿性 - 螺旋 - 環(huán)- 螺旋 basic - helix /loop /helix，bHLH專業(yè)資料整理WORD格式3、簡(jiǎn)述增強(qiáng)子的特點(diǎn)。(1)增強(qiáng)效應(yīng)十清楚顯，一般能使基因轉(zhuǎn)錄頻率增加10-200倍有的可以增加上專業(yè)資料整理WORD格式千倍。專業(yè)資料整理WORD格式(2) 增強(qiáng)效應(yīng)與其位置和取向無(wú)關(guān)， 不管增強(qiáng)子以什么方向排列 53或 35，甚至和靶基因相距 3kb，或在靶基因下游，均表現(xiàn)出增強(qiáng)效應(yīng)；(3) 大多為重復(fù)序列，一般長(zhǎng)約 50bp，適合與某些蛋白因子結(jié)合。其內(nèi)部常含有一個(gè)核心序列： GTGGA/TA/TA/TG，該序列是產(chǎn)生增強(qiáng)效應(yīng)時(shí)所必需的；(4) 增強(qiáng)效應(yīng)有嚴(yán)密的組織和細(xì)胞特異性， 說(shuō)明增強(qiáng)子只有與特定的蛋白質(zhì) 轉(zhuǎn)錄因子相互作用才能發(fā)揮其功