細胞融合技術(中圖版 好

1、細胞融合技術細胞融合技術 第三節(jié)第三節(jié) 一一.細胞融合技術細胞融合技術 概念：兩個或兩個以上的概念：兩個或兩個以上的同種同種或或異種異種細胞細胞 融合成為一個細胞的過程融合成為一個細胞的過程 閱讀課本第閱讀課本第30-3130-31頁內容，回答問題：頁內容，回答問題：1.1.什么叫細胞融合技術？什么叫細胞融合技術？ 2.2.常用的人工誘導細胞融合的方法有哪幾種？哪一種重常用的人工誘導細胞融合的方法有哪幾種？哪一種重復性強，對原生質體傷害小，方法簡單，可控性強？復性強，對原生質體傷害小，方法簡單，可控性強？用人工方法誘導細胞融合，并在一定條件下使融合細胞用人工方法誘導細胞融合，并在一定條件下使融

2、合細胞分化再生，形成新物種或新品種的過程。分化再生，形成新物種或新品種的過程。物理法：離心、振動、物理法：離心、振動、電刺激（傷害小，可控性強）電刺激（傷害小，可控性強）化學法：用聚乙二醇（）誘導化學法：用聚乙二醇（）誘導滅活的病毒：仙臺病毒、皰疹病毒等滅活的病毒：仙臺病毒、皰疹病毒等（適合動物）（適合動物）動物細胞融合（細胞雜交）動物細胞融合（細胞雜交）2個或多個動個或多個動物細胞結合形成一個細胞的過程物細胞結合形成一個細胞的過程細胞細胞A細胞細胞B雜種細胞雜種細胞滅活的病毒滅活的病毒物理法物理法化學法化學法仙臺病毒仙臺病毒皰疹病毒皰疹病毒新城雞瘟病毒新城雞瘟病毒用滅活的病毒誘導動物細胞融合

3、過程用滅活的病毒誘導動物細胞融合過程細胞核細胞核病毒顆粒病毒顆粒細胞核細胞核 細胞電融合儀？讀下面一段文字資料，思考以下問題：讀下面一段文字資料，思考以下問題：長期以來，為了獲得抗體，采用的是把某長期以來，為了獲得抗體，采用的是把某種抗原反復注射到動物體內，然后種抗原反復注射到動物體內，然后從動物從動物血清中分離出所需抗體的方法血清中分離出所需抗體的方法。用這種方。用這種方法獲得的抗體，不僅法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低產(chǎn)量低，而且抗體的，而且抗體的特異性差，純度低，反應不夠靈敏特異性差，純度低，反應不夠靈敏。人們。人們發(fā)現(xiàn)，在發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內的內的

4、B B細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體性抗體，但是，但是每個每個B B細胞只分泌一種化學性細胞只分泌一種化學性質單一、特異性強的抗體質單一、特異性強的抗體。要想獲得大量。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個的單一抗體，必須用單個B B細胞進行無性繁細胞進行無性繁殖，即克隆殖，即克隆。 1、請從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念、請從以上文字資料中找出單克隆抗體的概念2、怎樣才能獲得單克隆抗體？、怎樣才能獲得單克隆抗體？提示提示1 1：僅用細胞培養(yǎng)技術可行嗎？：僅用細胞培養(yǎng)技術可行嗎？提示提示2 2：我們所學的哪種細胞是可以無限增殖的？：我們所學的哪種細胞是可

5、以無限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B細胞產(chǎn)生抗體的能力細胞產(chǎn)生抗體的能力和腫瘤細胞無限增殖能力同時具備呢？和腫瘤細胞無限增殖能力同時具備呢？用單個用單個B B細胞進行克隆，得到的細胞群能夠分泌細胞進行克隆，得到的細胞群能夠分泌一種化學性質單一、特異性強的抗體，這種抗體一種化學性質單一、特異性強的抗體，這種抗體就叫做單克隆抗體。就叫做單克隆抗體。1 1、如何獲得化學性質單一、特異性強的抗體？、如何獲得化學性質單一、特異性強的抗體？問題討論問題討論提示：提示：2 2、瘤細胞和癌細胞有何區(qū)別？、瘤細胞和癌細胞有何區(qū)別？B B淋巴細胞淋巴細胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋

6、白骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合融合（只考慮兩兩融合）（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細胞有幾培養(yǎng)液中細胞有幾種類型？融合細胞種類型？融合細胞幾種類型？幾種類型？骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞-骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞B B淋巴細胞淋巴細胞- B- B淋巴細胞淋巴細胞B B淋巴細胞淋巴細胞-骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞多種多種雜交細胞雜交細胞在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)在具有篩選作用的培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體檢驗陽性專一抗體檢驗陽性克隆上述雜交細胞克隆上述雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細胞檢驗陽性細胞單克隆抗體單克隆抗體注射到小鼠體內注射到小鼠體內體外培

7、養(yǎng)體外培養(yǎng) 該細胞繼承該細胞繼承雙親細胞雙親細胞的遺傳特性，既能的遺傳特性，既能產(chǎn)生專產(chǎn)生專一抗體一抗體又能又能無限增殖無限增殖。雜交瘤細胞有何特點？雜交瘤細胞有何特點？特異性強，靈敏度高特異性強，靈敏度高腹腔注射法腹腔注射法免疫小鼠免疫小鼠培養(yǎng)骨髓瘤細胞培養(yǎng)骨髓瘤細胞融合融合骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞B B淋巴細胞淋巴細胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)選擇培養(yǎng)基上培養(yǎng)專一抗體專一抗體檢驗陽性檢驗陽性專一抗體專一抗體檢驗陽性檢驗陽性注射到小鼠體內注射到小鼠體內體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)單克隆抗體單克隆抗體克隆雜交細胞克隆雜交細胞分開不同雜交細胞，克隆分開不同雜交細胞，克隆專一抗體，檢驗陽性細

8、胞專一抗體，檢驗陽性細胞多種雜交細胞多種雜交細胞雜交瘤細胞有何特點？雜交瘤細胞有何特點？本過程利用的那些技術？本過程利用的那些技術？動物細胞融合技術動物細胞融合技術動物細胞培養(yǎng)技術動物細胞培養(yǎng)技術是否注射抗原是否注射抗原（只考慮兩兩融合）培（只考慮兩兩融合）培養(yǎng)液中細胞有幾種類型？養(yǎng)液中細胞有幾種類型？幾種融合細胞？幾種融合細胞？（二）、單克隆抗體制備過程（二）、單克隆抗體制備過程與傳統(tǒng)制備的抗體相與傳統(tǒng)制備的抗體相比具有什么特點？比具有什么特點？（三）單克隆抗體的應用（三）單克隆抗體的應用準確、高效、簡易、快速準確、高效、簡易、快速（導向作用，導向作用，作為載體，作為載體，生物導彈生物導彈=

9、單克隆抗體單克隆抗體+藥物，藥物，治療腫瘤）治療腫瘤）診斷乳腺癌單克隆抗體診斷乳腺癌單克隆抗體兩個過程兩個過程動物細胞融合過程動物細胞融合過程動物細胞培養(yǎng)過程動物細胞培養(yǎng)過程“一二三一二三”二次篩選二次篩選篩選雜交瘤細胞、能篩選雜交瘤細胞、能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細胞一個新細胞一個新細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞三個優(yōu)勢三個優(yōu)勢產(chǎn)量大、特異性產(chǎn)量大、特異性強、靈敏度高強、靈敏度高(理化性質單一理化性質單一)的優(yōu)勢的優(yōu)勢動植物細胞在結構上有何區(qū)別？這與它們動植物細胞在結構上有何區(qū)別？這與它們雜交或融合過程有什么影響？雜交或融合過程有什么影響？問題討論問題討論動物細胞無細胞壁，動物

10、細胞融合過程中動物細胞無細胞壁，動物細胞融合過程中不須去除細胞壁和再生出細胞壁。不須去除細胞壁和再生出細胞壁。問題討論問題討論、動物細胞融合與植物原生質體融合的基本、動物細胞融合與植物原生質體融合的基本原理是否相同？原理是否相同？相同，都是細胞膜的流動性相同，都是細胞膜的流動性問題討論問題討論突破了有性雜交方法的局限，突破了有性雜交方法的局限，使遠源雜交成為可能。使遠源雜交成為可能。有何同？不同？有何同？不同？動物細胞融合動物細胞融合植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較植物體細胞雜交與動物細胞融合的比較細胞工程細胞工程植物體細胞雜交植物體細胞雜交動物細胞融合動物細胞融合實質內容實質內容改變遺傳物

11、質、產(chǎn)生新的性狀，獲得細胞產(chǎn)品改變遺傳物質、產(chǎn)生新的性狀，獲得細胞產(chǎn)品(使后代具有雙親使后代具有雙親的特性的特性)理論基礎理論基礎細胞膜的流動性細胞膜的流動性;植物細胞全能性植物細胞全能性細胞膜的流動性細胞膜的流動性;細胞增殖細胞增殖誘導手段誘導手段物理法：離心、振動、電激物理法：離心、振動、電激化學法：聚乙二醇化學法：聚乙二醇物理法：離心、振動、電激物理法：離心、振動、電激化學法：聚乙二醇化學法：聚乙二醇生物法：滅活的病毒生物法：滅活的病毒誘導過程誘導過程去細胞壁去細胞壁(纖維素酶、果膠酶纖維素酶、果膠酶)原生質體融合原生質體融合(獲得雜種原生質體獲得雜種原生質體)植物細胞培養(yǎng)植物細胞培養(yǎng)(

12、獲得植株獲得植株)獲得分離的單個動物細胞獲得分離的單個動物細胞(胰蛋白酶處理胰蛋白酶處理)誘導融合誘導融合動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)(細胞產(chǎn)品細胞產(chǎn)品)應用應用獲得白菜獲得白菜甘藍等雜種植物甘藍等雜種植物主要用于單克隆抗體的制備主要用于單克隆抗體的制備(雜交瘤細胞雜交瘤細胞) 1.下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌的下圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)破傷風桿菌的抗體實驗方案抗體實驗方案2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？、該方案能達到預期效果嗎？為什么？4、圖中、圖中B為為_過程，常用過程，常用_作為誘導劑，該細胞繼作為誘導劑，該細胞繼承承_的遺傳特性，既能的遺傳特

13、性，既能_,又能又能_。1、該實驗方案的目的是、該實驗方案的目的是_3、A是從小鼠的脾臟中取得是從小鼠的脾臟中取得_,該細胞能夠產(chǎn)生該細胞能夠產(chǎn)生_5、C過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括過程指細胞培養(yǎng)，該過程包括_培養(yǎng)和培養(yǎng)和_培養(yǎng)兩個階段，其培養(yǎng)兩個階段，其中中_代以內的的細胞屬于細胞株。代以內的的細胞屬于細胞株。制備單克隆抗體制備單克隆抗體B細胞細胞抗體抗體細胞融合細胞融合滅活病毒滅活病毒雙親細胞雙親細胞分泌抗體分泌抗體無限增殖無限增殖原代原代傳代傳代50B骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞雜交瘤細胞雜交瘤細胞足夠數(shù)量的細胞群足夠數(shù)量的細胞群A體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔C體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)不能

14、，未對小鼠免疫處理不能，未對小鼠免疫處理2.人人CD20單克隆抗體是治療一些惡性腫瘤的特效藥物，目前主要是通過培養(yǎng)單克隆抗體是治療一些惡性腫瘤的特效藥物，目前主要是通過培養(yǎng)哺乳動物細胞的方式生產(chǎn)。我國科學家已哺乳動物細胞的方式生產(chǎn)。我國科學家已 培育出世界上第一頭轉入了培育出世界上第一頭轉入了CD20抗體基因的轉基因牛，可以從它產(chǎn)抗體基因的轉基因牛，可以從它產(chǎn) 的牛奶中直接提取的牛奶中直接提取CD20抗體。這項技術抗體。這項技術成熟后，有望使這一特效藥成熟后，有望使這一特效藥 的生產(chǎn)成本降至現(xiàn)在的的生產(chǎn)成本降至現(xiàn)在的1/10。請回答：。請回答： (1)單克隆抗體的制備過程需先將單克隆抗體的制備

15、過程需先將_和和 _融合，這一過程的誘導方法與植物體細胞雜融合，這一過程的誘導方法與植物體細胞雜交不同的是交不同的是_。 (2)動物細胞培養(yǎng)需要在含動物細胞培養(yǎng)需要在含_混合氣體的培混合氣體的培養(yǎng)箱中進行，培養(yǎng)液中通常需加入養(yǎng)箱中進行，培養(yǎng)液中通常需加入_等一些天等一些天然成分。然成分。 (3)轉基因技術的核心是轉基因技術的核心是_。該過程。該過程用到的工具酶有用到的工具酶有 _和和_。經(jīng)過免疫的經(jīng)過免疫的B淋巴細胞淋巴細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞用滅活的病毒誘導用滅活的病毒誘導95%O2加加5%CO2血清、血漿血清、血漿基因表達載體的構建基因表達載體的構建限制性核酸內切酶限制性核酸內切酶(限制酶

16、限制酶)DNA連接酶連接酶3. 野生馬鈴薯品種的植株具有較強的抗病、抗蟲、抗鹽堿、抗野生馬鈴薯品種的植株具有較強的抗病、抗蟲、抗鹽堿、抗寒能力，但塊莖不能食用。俄、德、芬蘭專家共同做實驗研究，寒能力，但塊莖不能食用。俄、德、芬蘭專家共同做實驗研究， 用野生馬鈴薯與馬鈴薯的體細胞進行雜交，培育出了生活能力強用野生馬鈴薯與馬鈴薯的體細胞進行雜交，培育出了生活能力強的雜交系馬鈴薯。據(jù)圖分析回答問題：的雜交系馬鈴薯。據(jù)圖分析回答問題：(1)過程植物細胞原生質體的分離需經(jīng)過酶解，其中過程植物細胞原生質體的分離需經(jīng)過酶解，其中“酶解酶解”所用的酶應該包括所用的酶應該包括_。(2)過程可用聚乙二醇過程可用聚

17、乙二醇(PEG)，其目的是，其目的是_。纖維素酶、果膠酶纖維素酶、果膠酶誘導原生質體融合誘導原生質體融合(3)請用文字和箭頭表示出技術過程的實驗流程：請用文字和箭頭表示出技術過程的實驗流程：_。由此過程可以看出植物細胞有形成完整個體的可能性，這是由此過程可以看出植物細胞有形成完整個體的可能性，這是_的表現(xiàn)。的表現(xiàn)。(4)在培養(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，原生質體會再生出細胞壁?？稍谂囵B(yǎng)基上培養(yǎng)一段時間后，原生質體會再生出細胞壁?？梢匀?，通過以取樣，通過_實驗來鑒別細胞實驗來鑒別細胞壁是否已經(jīng)再生。壁是否已經(jīng)再生。(5)請說明運用植物體細胞雜交法的最大好處：請說明運用植物體細胞雜交法的最大好處：_。融

18、合細胞融合細胞 愈傷組織愈傷組織 幼苗幼苗植物細胞具有全能性植物細胞具有全能性植物細胞的質壁分離與復原植物細胞的質壁分離與復原可以克服不同生物遠緣雜交不親和的障礙可以克服不同生物遠緣雜交不親和的障礙4下圖為細胞融合的簡略過程，請據(jù)圖回答：下圖為細胞融合的簡略過程，請據(jù)圖回答：(1)若若A、B是植物細胞，在細胞融合之前已用是植物細胞，在細胞融合之前已用_處理，除去處理，除去_；A、B到細胞到細胞C的過程中，常用的物理方法是的過程中，常用的物理方法是_。融。融合完成的標志是合完成的標志是_.(2)若若A、B是植物細胞，則形成的是植物細胞，則形成的D細胞還要應用細胞還要應用_技術把技術把D培養(yǎng)培養(yǎng)成

19、植株。成植株。(3)若若A、B是動物細胞，一般取自是動物細胞，一般取自_,然后然后用用_使其分散開來，使其分散開來，A、B到到C的過程中，常用的不同于植物細胞的的過程中，常用的不同于植物細胞的手段是手段是_，所形成的，所形成的D稱為稱為_(4)若該過程是制備單克隆抗體，若該過程是制備單克隆抗體，A為小鼠為小鼠B淋巴細胞，那么，在獲得此細胞之前，淋巴細胞，那么，在獲得此細胞之前，小鼠已被注射了小鼠已被注射了_，注射后小鼠身體產(chǎn)生了相應的，注射后小鼠身體產(chǎn)生了相應的_，生成了，生成了_。圖中。圖中B為為_。(5)若該過程仍是制備單克隆抗體，在若該過程仍是制備單克隆抗體，在A、B到到C的過程中，所形

20、成的的過程中，所形成的C有有_種，用來培養(yǎng)的種，用來培養(yǎng)的D的細胞應該是的細胞應該是_。從中選擇出它的方法是。從中選擇出它的方法是_培養(yǎng)，獲得培養(yǎng)，獲得D后，常用的培養(yǎng)方法是后，常用的培養(yǎng)方法是_和和_。纖維素酶和果膠酶纖維素酶和果膠酶細胞壁細胞壁電刺激、振動、離心電刺激、振動、離心 產(chǎn)生細胞壁產(chǎn)生細胞壁植物組織培養(yǎng)植物組織培養(yǎng)動物胚胎或幼齡動物的器官或組織動物胚胎或幼齡動物的器官或組織胰蛋白酶胰蛋白酶滅活的病毒誘導滅活的病毒誘導雜種細胞雜種細胞效應效應B細胞細胞 抗原抗原抗體和記憶細胞抗體和記憶細胞骨髓瘤細胞骨髓瘤細胞3雜交瘤細胞雜交瘤細胞用特定的選擇培養(yǎng)基用特定的選擇培養(yǎng)基培養(yǎng)基中培養(yǎng)培養(yǎng)

21、基中培養(yǎng) 小鼠腹腔內增殖小鼠腹腔內增殖(1)AB(2)CD5.（09山東）人類在預防與診療傳染性疾病中，經(jīng)常使用疫苗和山東）人類在預防與診療傳染性疾病中，經(jīng)常使用疫苗和抗體。已知某傳染性疾病病原體為抗體。已知某傳染性疾病病原體為RNA病毒，該病毒表面病毒，該病毒表面A蛋蛋白為主要抗原，其疫苗生產(chǎn)和抗體制備的流程之一如下圖：白為主要抗原，其疫苗生產(chǎn)和抗體制備的流程之一如下圖：請回答：請回答：（1）過程代表的是）過程代表的是_。（2）過程構建）過程構建A基因表過載體時，必須使用基因表過載體時，必須使用_和和 _兩種工具酶。兩種工具酶。（3）過程采用的實驗技術是）過程采用的實驗技術是_，獲得的，獲得

22、的X是是_。（4）對健康人進行該傳染病免疫預防時，可選用圖中基因工程）對健康人進行該傳染病免疫預防時，可選用圖中基因工程生產(chǎn)的生產(chǎn)的 _ 所制備的疫苗。對該傳染病疑似患者確診時，從所制備的疫苗。對該傳染病疑似患者確診時，從疑似患者體內分離病毒，與已知病毒進行疑似患者體內分離病毒，與已知病毒進行_比較；比較；或用圖中的或用圖中的_進行特異性結合檢測。進行特異性結合檢測。逆轉錄逆轉錄限制酶(限制性內切酶） DNA連接酶細胞融合雜交瘤細胞 A蛋白 核酸（基因）序列抗A蛋白的單克隆抗體6.(09年寧夏年寧夏)回答下列有關動物細胞培養(yǎng)的問題：回答下列有關動物細胞培養(yǎng)的問題：（1）動物細胞培養(yǎng)過程中。當貼

23、壁細胞分裂生長到細胞表面）動物細胞培養(yǎng)過程中。當貼壁細胞分裂生長到細胞表面_時，時，細胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞細胞會停止分裂增殖，這種現(xiàn)象稱為細胞_。此時，瓶壁上形成的。此時，瓶壁上形成的細胞層數(shù)是細胞層數(shù)是_。要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，。要使貼壁的細胞從瓶壁上分離下來，需要用酶處理，可用的酶是可用的酶是_。（2）隨著細胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細胞分裂停止，進而出現(xiàn)）隨著細胞傳代次數(shù)的增多，絕大部分細胞分裂停止，進而出現(xiàn)_現(xiàn)象；但極少數(shù)細胞可以連續(xù)增殖，其中有些細胞會因遺傳物現(xiàn)象；但極少數(shù)細胞可以連續(xù)增殖，其中有些細胞會因遺傳物質發(fā)生改變而變成質發(fā)生改變而變成_

24、細胞，該種細胞的黏著性細胞，該種細胞的黏著性_，細胞膜表面蛋，細胞膜表面蛋白質（糖蛋白）的量白質（糖蛋白）的量_。（3）現(xiàn)用某種大分子染料，對細胞進行染色時，觀察到死細胞被染色，而活）現(xiàn)用某種大分子染料，對細胞進行染色時，觀察到死細胞被染色，而活細胞不染色，原因是細胞不染色，原因是_（4）檢查某種毒物是否能改變細胞染色體的數(shù)目，最好選用細胞分裂到）檢查某種毒物是否能改變細胞染色體的數(shù)目，最好選用細胞分裂到_期的細胞用顯微鏡進行觀察。期的細胞用顯微鏡進行觀察。（5）在細胞培養(yǎng)過程中，通常在）在細胞培養(yǎng)過程中，通常在_條件下保存細胞。因為條件下保存細胞。因為在這種條件下，細胞中在這種條件下，細胞中

25、_的活性降低，細胞的活性降低，細胞_的速率降低。的速率降低。（6）給患者移植經(jīng)細胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因為）給患者移植經(jīng)細胞培養(yǎng)形成的皮膚組織后，發(fā)生了排斥現(xiàn)象，這是因為機體把移植的皮膚組織當作機體把移植的皮膚組織當作_進行攻擊。進行攻擊。相互接觸相互接觸單層（一層）單層（一層）接觸抑制接觸抑制胰蛋白酶胰蛋白酶衰老甚至死亡衰老甚至死亡不死性不死性降低降低減少減少 由于活細胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能由于活細胞的膜具有選擇透過性，大分子染料不能進入活細胞內，故活細胞不能著色進入活細胞內，故活細胞不能著色中中冷凍（超低溫、液氮）冷凍（超低溫、液氮）新陳代謝新陳代謝酶酶

26、抗原抗原7.（10福建卷）紅細胞生成素福建卷）紅細胞生成素(EPO)是體內促進是體內促進紅細胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧紅細胞生成的一種糖蛋白，可用于治療腎衰性貧血等疾病。由于天然血等疾病。由于天然EPO來源極為有限，目前臨來源極為有限，目前臨床上使用的紅細胞生成素主要來自于基因工程技床上使用的紅細胞生成素主要來自于基因工程技術生產(chǎn)的重組人紅細胞生成素術生產(chǎn)的重組人紅細胞生成素(rhEPO)，其簡要，其簡要生產(chǎn)流程如右圖。請回答：生產(chǎn)流程如右圖。請回答：(1)圖中圖中所指的是所指的是_技術。技術。(2)圖中圖中所指的物質是所指的物質是_，所指的物質是所指的物質是_。(3)培養(yǎng)重組培養(yǎng)

27、重組CHO細胞時，為便于清除代謝產(chǎn)物，細胞時，為便于清除代謝產(chǎn)物，防止細胞產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害，應定期防止細胞產(chǎn)物積累對細胞自身造成危害，應定期更換更換_。(4)檢測檢測rhEPO的體外活性需用抗的體外活性需用抗rhEPO的單克的單克隆抗體。分泌該單克隆抗體的隆抗體。分泌該單克隆抗體的_細胞，可細胞，可由由rhEPO免疫過的小鼠免疫過的小鼠B淋巴細胞與小鼠骨髓瘤淋巴細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合而成。細胞融合而成。PCR PCR mRNAmRNArhEPOrhEPO培養(yǎng)液培養(yǎng)液雜交瘤雜交瘤第一節(jié)動物細胞培養(yǎng)第一節(jié)動物細胞培養(yǎng) 知識能力化知識能力化1為了使用于培養(yǎng)的動物組織細胞分散開以便配制成一

28、定濃度為了使用于培養(yǎng)的動物組織細胞分散開以便配制成一定濃度的細胞懸浮液，選取來的動物組織應選用下列哪種物質處理的細胞懸浮液，選取來的動物組織應選用下列哪種物質處理A.胃蛋白酶胃蛋白酶 B.胰蛋白酶胰蛋白酶 C.鹽酸鹽酸 D.胰脂肪酶胰脂肪酶2下列與動物細胞培養(yǎng)有關的表述中，不正確的是下列與動物細胞培養(yǎng)有關的表述中，不正確的是 （ ）A培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血培養(yǎng)液通常含有葡萄糖、氨基酸、無機鹽、維生素和動物血清等清等B原代培養(yǎng)的細胞一般傳至原代培養(yǎng)的細胞一般傳至10代左右便會出現(xiàn)生長停滯代左右便會出現(xiàn)生長停滯C動物細胞培養(yǎng)一般能夠傳到動物細胞培養(yǎng)一般能夠傳到4050

29、代，但其遺傳物質發(fā)生代，但其遺傳物質發(fā)生了改變了改變D動物細胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質和獲得大量自身健康細胞動物細胞培養(yǎng)可用于檢測有毒物質和獲得大量自身健康細胞3動物細胞培養(yǎng)的細胞來自于動物細胞培養(yǎng)的細胞來自于（ ）A任何個體的細胞任何個體的細胞 B只能取自幼齡動物的組織細胞只能取自幼齡動物的組織細胞C只能只能取自動物胚胎細胞取自動物胚胎細胞 D胚胎或幼齡動物的器官和組織細胞胚胎或幼齡動物的器官和組織細胞BCD4動物細胞工程常用的技術手段中，最基礎的是動物細胞工程常用的技術手段中，最基礎的是 （ ） A.動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) B.動物細胞融合動物細胞融合 C.單克隆杭體單克隆杭體 D.胚胎、

30、核移植胚胎、核移植5在動物細胞培養(yǎng)中有部分細胞可能在培養(yǎng)條件下無在動物細胞培養(yǎng)中有部分細胞可能在培養(yǎng)條件下無限制地傳代下去，這種傳代細胞稱之為限制地傳代下去，這種傳代細胞稱之為: A原代培養(yǎng)原代培養(yǎng) B傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng) C細胞株細胞株 D細胞系細胞系6衛(wèi)生部衛(wèi)生部2005年年4月月6日發(fā)布了蘇丹紅危險性報告評日發(fā)布了蘇丹紅危險性報告評估，報道中提到蘇丹紅一號是一種人工色素估，報道中提到蘇丹紅一號是一種人工色素(工業(yè)染工業(yè)染料料)，它在人體內代謝生成相應的胺類?？蒲腥藛T欲采用，它在人體內代謝生成相應的胺類?？蒲腥藛T欲采用一定的技術手段探究蘇丹紅是否對人體有危害，你認為一定的技術手段探究蘇丹紅是否

31、對人體有危害，你認為采取下列哪種技術手段最合適：采取下列哪種技術手段最合適： A動物細胞融合動物細胞融合 B動物細胞培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng) C胚胎移植胚胎移植 D核移植核移植ADB7下列有關動物細胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是下列有關動物細胞培養(yǎng)的敘述，不正確的是A.用于培養(yǎng)的細胞大都取自胚胎或幼齡動物的器官或用于培養(yǎng)的細胞大都取自胚胎或幼齡動物的器官或組織組織B.將所取的組織先用胰蛋白酶等進行處理使其分散成將所取的組織先用胰蛋白酶等進行處理使其分散成單個細胞單個細胞C.在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細胞從瓶壁上脫離，在培養(yǎng)瓶中要定期用胰蛋白酶使細胞從瓶壁上脫離，制成懸浮液制成懸浮液D.動物細胞培養(yǎng)只能傳動

32、物細胞培養(yǎng)只能傳50代左右，所培養(yǎng)的細胞就會代左右，所培養(yǎng)的細胞就會衰老死亡衰老死亡8用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出用于動物細胞培養(yǎng)的組織和細胞大都取自胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣生不久的幼齡動物的器官或組織，其主要原因是這樣的組織細胞的組織細胞 （ ）A.容易產(chǎn)生各種變異容易產(chǎn)生各種變異 B具有更強的全能性具有更強的全能性C.取材十分方便取材十分方便 D分裂增殖的能力強分裂增殖的能力強DD第二節(jié)植物組織培養(yǎng)第二節(jié)植物組織培養(yǎng) 知識能力化知識能力化1 1用高度分化的植物細胞、組織和器官進行組織培養(yǎng)可以形成用高度分化的植物細胞、組織和器官進行組織培養(yǎng)可以形

33、成愈傷組織，下列敘述錯誤的是（愈傷組織，下列敘述錯誤的是（ ）A.A.該愈傷組織是細胞經(jīng)過脫分化和分裂形成的該愈傷組織是細胞經(jīng)過脫分化和分裂形成的B.B.該愈傷組織的細胞沒有全能性該愈傷組織的細胞沒有全能性C.C.該愈傷組織是由排列疏松的薄壁細胞組成該愈傷組織是由排列疏松的薄壁細胞組成D.D.該愈傷組織可以形成具有生根發(fā)芽能力的胚狀結構該愈傷組織可以形成具有生根發(fā)芽能力的胚狀結構2.2.要將胡蘿卜韌皮部細胞培養(yǎng)成完整植株，不需要（要將胡蘿卜韌皮部細胞培養(yǎng)成完整植株，不需要（ ）A A具有完整細胞核的細胞具有完整細胞核的細胞 B B離體狀態(tài)離體狀態(tài)C C導入外源基因導入外源基因 D D一定的營養(yǎng)

34、物質和激素一定的營養(yǎng)物質和激素3.3.甘薯種植多年后易積累病毒而導致品種退化。目前生產(chǎn)上采用甘薯種植多年后易積累病毒而導致品種退化。目前生產(chǎn)上采用莖尖分生組織離體培養(yǎng)的方法快速繁殖脫毒的種苗，以保證該品莖尖分生組織離體培養(yǎng)的方法快速繁殖脫毒的種苗，以保證該品種的品質和產(chǎn)量水平。這種通過分生組織離體培養(yǎng)獲得種苗的過種的品質和產(chǎn)量水平。這種通過分生組織離體培養(yǎng)獲得種苗的過程不涉及細胞的（程不涉及細胞的（ ）A A有絲分裂有絲分裂 B B分化分化 C C減數(shù)分裂減數(shù)分裂 D D全能性全能性BCC4.4.下列關于植物組織培養(yǎng)的敘述中，錯誤的是（下列關于植物組織培養(yǎng)的敘述中，錯誤的是（ ）A A培養(yǎng)基中

35、添加蔗糖的目的是提供營養(yǎng)和調節(jié)滲透壓培養(yǎng)基中添加蔗糖的目的是提供營養(yǎng)和調節(jié)滲透壓B B培養(yǎng)基中的生長素和細胞分裂素影響愈傷組織的生長和分化培養(yǎng)基中的生長素和細胞分裂素影響愈傷組織的生長和分化C C離體器官或組織的細胞都必須通過脫分化才能形成愈傷組織離體器官或組織的細胞都必須通過脫分化才能形成愈傷組織D D同一株綠色開花植物不同部位的細胞經(jīng)培養(yǎng)獲得的愈傷組織基同一株綠色開花植物不同部位的細胞經(jīng)培養(yǎng)獲得的愈傷組織基因相同因相同5.5.將基因型為將基因型為AaBbAaBb的水稻的水稻( (具有具有2424條染色體條染色體) )的葉肉細胞通過無菌的葉肉細胞通過無菌操作接入含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基的試管

36、中，在一定條件下形操作接入含有全部營養(yǎng)成分的培養(yǎng)基的試管中，在一定條件下形成試管幼苗，其過程如下圖所示：成試管幼苗，其過程如下圖所示： (1)(1)圖中的圖中的11叫叫_，圖中的，圖中的2_2_。(2)(2)在在33過程最重要的兩種植物激素是過程最重要的兩種植物激素是_、_。(3)(3)如果如果44是無病毒植株，則水稻的細胞應選用是無病毒植株，則水稻的細胞應選用_或或 _細胞。其培養(yǎng)成的植株的基因型為細胞。其培養(yǎng)成的植株的基因型為_。D脫分化脫分化再分化再分化生長素生長素細胞分裂素細胞分裂素根尖根尖莖尖莖尖AaBbAaBb (4)(4)如果某種細胞選用的是水稻花粉細胞，則如果某種細胞選用的是水

37、稻花粉細胞，則44稱為稱為_。基因型可能是?；蛐涂赡苁莀。植株。植株特點為特點為_，需用，需用_處理，處理，使其恢復正常體細胞染色體數(shù)才可育，其基因型為使其恢復正常體細胞染色體數(shù)才可育，其基因型為_。(5)(5)如果此過程是為了生產(chǎn)水稻的人工種子，則人工種如果此過程是為了生產(chǎn)水稻的人工種子，則人工種皮包裹的是皮包裹的是 _ _。單倍體植物單倍體植物ABAB、AbAb、aBaB、abab（矮小瘦弱）（矮小瘦弱）高度不育高度不育秋水仙素秋水仙素AABBAABB、AAbbAAbb、aaBBaaBB、aabbaabb3 3 胚狀體胚狀體 單：一個雜交瘤細胞 克隆：該細胞增殖分化為相同的細胞群 抗體：該細胞群產(chǎn)生的抗體。 特點：特異性強 靈敏度高單克隆抗體制備單克隆抗體制備應用了哪些技術手段雜交瘤技術的基本原理雜交瘤技術的基本原理主要用于制備主要用于制備單克隆抗體單克隆抗體獲得雜種植株獲得雜種植株物理、化學方法物理、化學方法（同左）（同左）滅活的病毒滅活的病毒物理（離心、振物理（離心、振蕩、電激）蕩、電激）化學（聚乙二醇）化學（聚乙二醇）使細胞分散后誘使細胞分散后誘導細胞融合導細胞融合去除細胞壁后誘去除細胞壁后誘導原生質體融合導原生質體融合細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性細胞膜的流動性用途用途誘導方法誘導方法步驟步驟融合的原理融合的原理動物細胞融合動物細胞融合