Customer 病毒去除

1、Platzhalter Bild賽多利斯的病毒去除技術(shù)賽多利斯的病毒去除技術(shù)2.病毒過濾3.病毒滅活 4.病毒吸附 1.法規(guī)方面內(nèi)容概要內(nèi)容概要2.Virus Filtration3.Virus Inactivation 4.Virus Adsorption 1.法規(guī)方面檢測原料血漿 (獻血者監(jiān)控, 檢測/生產(chǎn)監(jiān)控)生物工程 (原料,細胞系,基因穩(wěn)定性)哺乳動物細胞 (細胞來源跟蹤監(jiān)控)驗證病毒去除工藝病毒防護,病毒數(shù)降低程度,交叉污染控制檢測成品法規(guī): 安全策略Paul Ehrlich InstitutePaul Ehrlich InstitutePaul Ehrlich Institute

2、病毒去除 用戶方面 - 用戶須形成完備的病毒去除觀念綜合采用病毒滅活和病毒分離截留的方法 缺少相關(guān)的內(nèi)源和外源病毒樣品 法規(guī)要求病毒去除率應在 12 to 20 log10 至少使用兩種病毒去除方法 至少有一種方法是針對無包膜的小病毒CPMP/ICH/295/95: Note for Guidance on Quality of Biotechnological Products.“Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin. Octobe

3、r 1997”病毒污染- 污染機會 - 病毒顆粒和相關(guān)病毒 潛在的污染- 病毒意外污染 - 細胞系源于被病毒侵染的動物 操作處理中污染 污染的試劑ICH Q5A: Viral Safety Evaluation of Biotechnology Products Derived from Cell Lines of Human or Animal Origin, 1997病毒去除 工藝總結(jié) -病毒去除病毒滅活病毒滅活納濾 15nm to 75nm熱滅活 溶液加熱滅活 干熱滅活 蒸汽滅活光照滅活 射線紫外 微波分離法 層析 乙醇抽提 其他沉淀方法化學滅活 溶煤 去垢劑 化學試劑 pH病毒裂解 高

4、壓循環(huán) 超臨界流體病毒去除 主要供應商 - 病毒過濾 Asahi 病毒吸附 Pall Millipore GE Healthcare Merck Biorad病毒滅活 GE Healthcare New York Blood center patent Sartorius 提供全部技術(shù)完整的病毒去除平臺成品灌裝親和層析柱或其他純化步驟病毒截留濾芯 拋棄型濾器 病毒去除病毒去除 針對所有病毒 紫外滅活 拋棄型紫外滅活裝置 病毒滅活病毒滅活 針對非包膜小病毒膜吸附拋棄型層析裝置病毒吸附病毒吸附 針對所有病毒 還可去除HCP, DNA / RNA 和內(nèi)毒素內(nèi)容概要2.病毒截留過濾3.Virus In

5、activation 4.Virus Adsorption 1.Regulatory Aspects Virosart CPV 病毒截留過濾器 -膜材質(zhì)為聚醚砜典型病毒截留率 PPV 或 PP7 (約20nm粒徑) ，LRV 4PR772 (約50nm 粒徑) ，LRV 6完整性測試使用水 (4.5 bar max 22ml/min/10”)Sartopore 0,1m 作為預過濾蒸汽或高壓滅菌病毒去除至少 3 - 4 log，并且蛋白收率 95%相關(guān)的特定和非特定的標準病毒去除特性料液情況 (大分子蛋白，宿主細胞，等) 病毒截留濾器在工藝中的位置 挑戰(zhàn)性物質(zhì) (細胞碎片，宿主細胞等)具有可放

6、大性病毒截留濾器應驗證考察的方面 CPV上表面CPV下表面0,2m和 CPV 膜電鏡對比0,2m膜上表面0,2m膜下表面Virosart CPV 挑戰(zhàn)實驗，料液為 2% BSA ， PBS pH 6,9病毒粒徑nm核酸型包膜Log10 TCID50/ml料液體積mlLRVPPV18-25ss-DNANo8.1506,0Reo-360-80ds-RNANo8.8507.9HAV27-32ss-RNANo5.6505.4BVDV40-70ss-RNAYes7.150 5.9SV-4042ds-DNAYes7.6506.3MuLV80-110ss-RNAYes7.850 6.2Data determ

7、ined by Analysis GmbH Kln, Germany 2004 Virosart CPV 產(chǎn)品線 - 5cm 拋棄型 Virosart CPV Minisart 20cm拋棄型 Virosart CPV Midisart 150cm拋棄型 Virosart CPV 囊式濾器 0.7m拋棄型 Virosart CPV 囊式濾器 1.4m拋棄型 Virosart CPV 囊式濾器 2.1m拋棄型 Virosart CPV 囊式濾器Analysis Dr. Andreas ImmelmannBiomedizinische Test GmbHGottfried Hagen-Strass

8、e 62D 51105 KlnGermanyPhone: +49-221-346-1800Fax: +49-221-346-1801Email: infoanalysis-gmbh.dewww.anaylsis-gmbh.de德國獨立的病毒實驗室 New Lab BioQuality AG Dr. Klaus KellingsMax Planck- Srasse 15AD 40699 ErkrathGermanyPhone: +49-211-92-55-300Fax: +49-211-92-55-333Email: infonewlab.dewww.newlab.deVirosart CPV

9、文件 -Virosart CPV launch packageVirosart CPV 完整的文件 -文件貨號產(chǎn)品手冊85030-521-89產(chǎn)品信息85030-522-03操作手冊SPK6520-e05021驗證指南85030-522-02病毒信息指南85030-521-91Virosart CPV 標準濾芯訂貨信息 - 產(chǎn)品貨號Virosart CPV 10” 濾芯5452528V1Virosart CPV 20” 濾芯5452528V2Virosart CPV 30” 濾芯5452528V3Virosart CPV 囊式濾器定貨信息 - 產(chǎn)品貨號Virosart CPV 10” Maxi

10、Caps5452528V1-SSVirosart CPV 20” MaxiCaps5452528V2-SS Virosart CPV 30” MaxiCaps5452528V3-SS 內(nèi)容概要2.Virus Filtration3.病毒紫外滅活 4.Virus Adsorption 1.Regulatory Aspects 紫外滅活自1940s紫外滅活病毒方法已經(jīng)被證實有效Wolf AM, Mason J, et al. (1947). Ultraviolet irradiation of human plasma to control homologous serum jaundice. J

11、AMA 135: 476 - 477.最新的研究已經(jīng)確認紫外法是一種有效的病毒滅活方法Hart H, Reid K & Hart W (1993). Inactivation of viruses during ultraviolet light treatment of human intravenous immunoglobulin and albumin. Vox Sang. 64: 82 88Chin S, Jin R, et al. (1997). Virucidal treatment of blood protein products with UVC radiation

12、. Photochem. Photobiol. 65: 432 435Wang J, Mauser A, Chao SF, Remington K, Treckmann R, Kaiser K, Pifat D, Hotta J. Virus inactivation and protein recovery in a novel ultraviolet-C reactor. Vox Sang. 2004 May;86(4):230-8.紫外滅活技術(shù) X-raysUltraviolet LightVisible LightInfrared780400315280200100Hg low pre

13、ssurelamp 254 nmSpectral curve ofDNA/RNA damageWavelength nmUVCUVBUVAVacuum UV破壞病毒的 DNA / RNA Dean Vortices 迪恩渦技術(shù)優(yōu)化病毒滅活工藝Dean Vorticeslight intensity depth of penetration Minimised residence times; controlled mixing & within laminar flow by dean vortices紫外滅活病毒保留時間 00,511,52相對保留時間相對保留時間病毒蛋白量病毒蛋白量

14、一般反應裝置 帶有環(huán)狀帽損傷蛋白區(qū)域低病毒滅活區(qū)域特氟龍螺旋管紫外燈石英玻璃管內(nèi)部凸緣紫外滅活裝置結(jié)構(gòu)不同規(guī)模的紫外病毒滅活裝置 2 to 20 l/h20 to 150 l/h小試規(guī)模生產(chǎn)規(guī)模紫外病毒滅活裝置驗證方面參數(shù)MuLVBVDVReo-3HAVPPV單抗收率*包膜YesYesNoNoNo-核酸類型RNARNARNARNADNA-LRV at 50 J/m4,35,736,814,736,5297%LRV at 38 J/m3,33,852,562,923,1698%LRV at 30 J/m3,33,402,033,043,4098%Data determined by Analys

15、is GmbH, Germany 2004 病毒滅活：蛋白完整性研究*紫外光照能量 (J/cm)單體a活性a% 單體% 收率 mg/ml% 收率0.00077.09100%4.98100%0.00976.94100%4.9299%0.02477.00100%4.8998%0.04976.6499%4.8698%0.07276.3799%4.7896%0.14475.1397%4.8197%0.28871.9193%4.4690%0.43169.4390%4.3287%(a average of triplicate samples)* Wang J, Mauser A, Chao SF, Re

16、mington K, Treckmann R, Kaiser K, Pifat D, Hotta J. Virus inactivation and protein recovery in a novel ultraviolet-C reactor. Vox Sang. 2004 May;86(4):230-8.Platzhalter Bild病毒滅活:蛋白確認研究光照處理抗體 (2mg/ml PBS 緩沖液)侵染法檢測 PPV病毒去除 log10 值 4 log10 PPV 抗體性質(zhì)研究 (二維凝膠電泳, Maldi-Toff) 紫外光照處理 未進行紫外光照處理 賽多利斯公司與用戶進行研發(fā)和

17、臨床前研究研究紫外光照對目標蛋白的影響 在賽多利斯公司或用戶處進行在賽多利斯公司或用戶處進行單體活性裂解理化分析SDS 電泳, HPLC, 二維凝膠電泳. 賽多利斯公司與用戶進行臨床研究1st 生產(chǎn)期臨床樣品前進行病毒挑戰(zhàn)研究生產(chǎn)期臨床樣品前進行病毒挑戰(zhàn)研究 2nd 生產(chǎn)生產(chǎn)III 期臨床樣品前進行病毒挑戰(zhàn)研究期臨床樣品前進行病毒挑戰(zhàn)研究病毒滅活研究內(nèi)容概要2.Virus Filtration3.Virus Inactivation 4.病毒吸附 1.Regulatory Aspects 膜層析技術(shù): 基本原理膜層析產(chǎn)品與顆粒膠電鏡照片對比孔徑 顆粒膠與層析膜對比 -顆粒膠顆粒膠粒徑分布為：

18、15 -160 m孔徑分布為： 15 - 40 nm層析膜高開孔結(jié)構(gòu)孔徑： 250 - 3000 nm 膜層析技術(shù): 基本原理“不是過濾膜”開放孔結(jié)構(gòu) 3 m低壓力降單純的對流傳質(zhì) 擴散效應最小化應用于去除：宿主細胞蛋白，DNA，內(nèi)毒素和病毒膜層析產(chǎn)品與顆粒膠電鏡照片對比病毒去除至少 3 - 4 log，并且蛋白收率 95%相關(guān)的特定和非特定的標準病毒去除特性 物質(zhì)平衡和獨立的吸附機制具有可放大性膜層析系統(tǒng)應驗證考察的方面 層析膜形成層析床單張層析膜厚度0.275 mm最多 60層疊加形成16mm厚柱床36cm 膜面積= 1ml 床體積= 30mg 載量膜床體積： 1l 到2.1ml 載量：

19、30g到 60mg 拋棄型技術(shù) 捕獲，精致和病毒去除 膜層析 拋棄型實驗室規(guī)模產(chǎn)品 -膜層析 生產(chǎn)規(guī)模拋棄型產(chǎn)品 - 膜床體積： 7ml 到 530ml 載量： 0.2 到16g拋棄型技術(shù)捕獲，精致和病毒去除 膜層析 可重復使用產(chǎn)品 - 膜床體積： 35ml 到 2.130ml 載量： 1 到 64g 反復使用技術(shù) 捕獲和精制膜層析去除病毒病毒粒徑(nm) 包膜 Sartobind Q去除因子 (log10) Run 1 Sartobind Q去除因子 (log10) Run 2SV-40: Simian Virus -4045no1.25 0.461.34 0.43Reo-3: Reovir

20、us Type III75-80no4.07 0.503.62 0.42MuLV: Murine Leukemia Virus80-110yes3.80 0.394.40 0.56PRV: Pseudorabies virus150-250yes3.97 0.443.88 0.38Galliher, P., Fowler, E., Millennium Pharmaceuticals Inc.), “Validation of Impurity Removal by the CMAPATH-1H Biomanufacturing Process”IBCs Biopharmaceutical P

21、roduction Week, Paradise Point Resort San Diego, CA, November 12-15, 2001膜層析去除病毒病毒粒徑(nm)包膜 Sartobind Q去除因子 (log10) Run 1 Sartobind Q去除因子 (log10) Run 2MMV: Minute Mouse Virus16 - 25no6.67 0.244.41 0.37Reo-3: Reovirus Type III75-80no7.28 0.307.53 0.29MuLV: Murine Leukemia Virus80-110yes5.57 0.256.29 0.32PRV: Pseudorabies virus