植物病害試驗與數(shù)據分析

1、云南農業(yè)大學植物保護學院王揚第五節(jié) 線蟲類試驗與報告線蟲病病害概述根結線蟲土壤蟲量調查方法根結線蟲病害調查方法根結線蟲病抗病性測定試驗設計與數(shù)據處理根結線蟲病防治試驗設計與數(shù)據處理根結線蟲病產量損失預測線蟲是一類低等無脊椎動物，部分種類能夠寄生植物，造成產量損失或植物產品質量變劣，引起植物病害；線蟲對植物的危害主要有：1. 線蟲口針穿刺和線蟲侵入引起的機械損傷，2. 食道腺分泌物對植物的致病作用；線蟲危害的部位包括植物的根系、幼芽、莖稈、葉片、花、果實、種子等，其中絕大多數(shù)種類危害地下部，屬于土傳病害，幾乎所有植物的根部都有線蟲寄生；線蟲病害發(fā)病進程緩慢，屬于積年流行性病害，地上部癥狀通常不明

2、顯，類似營養(yǎng)不良癥狀。根結線蟲生活史根結線蟲病是典型的積年流行性土傳病害，土壤中土壤中的活躍態(tài)二齡幼蟲是決定病害發(fā)生程度的重要因素；土壤蟲量調查是根結線蟲病害調查的基本內容，通過初始蟲量的調查可以預測病害的發(fā)生程度，通過對作物整個生長季節(jié)中蟲量變化的調查可以評估作物對根結線蟲的抗性以及防治措施的效果。田間取樣方法 根結線蟲田間分布存在不均勻現(xiàn)象，因此土壤樣品采集采取“Z”字型或棋盤式取樣法，力求所獲數(shù)據能夠反映整個田塊的情況。 在每個選定的取樣點，用土壤取樣器，取深度為0-20cm的土柱，同一田塊的所有土樣混合均與，合為一個樣本，帶回室內進行線蟲分離。活躍態(tài)土壤根結線蟲二齡幼蟲分離法-淺盤法

3、每份土樣，量取100ml土壤，移入覆蓋濾紙的篩網上置于淺盤中加水浸沒，靜止24h。浸出液先后通過200目和500目篩網，收集500目篩面上的線蟲，置于顯微鏡下觀察計數(shù)。每樣品重復三次，取平均值為樣品蟲量。ABCD土壤總蟲量分離計數(shù)-密度梯度離心法 量取10ml土壤樣品，轉入50ml離心管，加入30水懸浮土壤，4000轉/min離心1min，棄上清液，沉淀中加入45%蔗糖溶液再次懸浮，2000轉/min離心1min，上清液過500目篩網，篩面上收集土壤中的各蟲態(tài)線蟲和卵，顯微鏡下觀察計數(shù)。每樣品重復三次，平均值為樣品總蟲量個體病情調查-根結指數(shù)調查 挖出完整根系，用清水洗凈，估算帶根結的根占整個

4、根系的百分比。根據根結指數(shù)劃分病級： 0級：無根結 1級：輕微感染，僅有少量根結，根結百分率小于5% 2級：根結明顯，根結百分率小于25 3級：根結百分率2650 4級：根結百分率5175 5級：根結百分率76以上群體病情調查 發(fā)病率= 100% 病情指數(shù)= 100發(fā)病株數(shù)調查株數(shù)調查總株數(shù)根結指數(shù)的最高級數(shù)該級別株數(shù)）（根結指數(shù)級數(shù)盆栽接種測定煙草對花生根結線蟲抗性 1. 供試根結線蟲接種源制備花生根結線蟲（M. arenaria）采自云南牟定縣，經單卵塊純化，通過種類鑒定，在感病的番茄品種Rutgers上擴大繁殖，收獲病根，用次氯酸鈉處理，獲得卵懸浮液，顯微鏡下計數(shù)定量。 2. 待測煙株的

5、接種 各個煙草品種在播種前先用2%福爾馬林溶液表面播種土為腐殖土細砂按體積比1:1混勻，濕熱滅菌。煙苗長至56片葉時，移栽試驗盆中，同時接種根結線蟲，盆土為腐殖土 ：沙=1:2的滅菌土。根結線蟲按3000卵/盆接種，設重復4盆，同時設不接卵對照，重復4盆，隨機排列，接種后常規(guī)管理，澆水，施肥，適時噴藥，防止其它病蟲干擾。3. 病害調查及抗性評價 接種60天后將接種過的植株整株倒出，清水洗凈根部。調查每煙株根部發(fā)病情況，根據病害癥狀描述，記載病情級別及單位根重的卵數(shù)，計算根結指數(shù)。平均根結指數(shù)0-1為免疫、1-2為高抗、2-3為中抗、3-4為中感、4-5為高感。4. 數(shù)據分析 應用軟件SAS進行

6、數(shù)據分析，用Duncans方法對數(shù)據進行比較。原始數(shù)據處理結果 采用Duncans多重比較，不同小寫字母的數(shù)據代表處理之間差異顯著(P0.05)大田自然發(fā)病測定煙草品種抗病性 1.試驗地點的選擇 選擇土質、坡向均一，且有根結線蟲病發(fā)病歷史的田塊，種植前徹底翻犁采集田中各區(qū)域的土樣，分離土壤中的根結線蟲二齡幼蟲，確定田塊中線蟲分布均勻程度，并通過分子生物學方法確定土壤中根結線蟲的種類及組成。 2. 小區(qū)設置 田塊內劃分出面積相等的18個小區(qū)，每個小區(qū)內按照標準種植規(guī)格起墑，小區(qū)間設置寬度為1m的隔離溝，將在無菌土培育的6個品種的煙苗移栽入小區(qū)內，每小區(qū)種植1個品種，每品種包含3個重復小區(qū)，各品種

7、重復小區(qū)隨機排布。 3. 病情調查與抗性評價 移栽后按常規(guī)方法管理，適時統(tǒng)一防治其他地上部病害，90天后進行病情調查，每小區(qū)隨機選取20株煙株，盡可能完整挖出根系，清水洗凈后調查根結指數(shù)，計算各小區(qū)的病情指數(shù)和發(fā)病率。平均病情指數(shù)25以下為高抗、25-50為中抗、50-75為中感、75以上為高感。 4. 數(shù)據分析 應用軟件SAS進行數(shù)據分析，用Duncans方法對數(shù)據進行比較。藥劑殺線蟲活性的室內測定 1. 線蟲的制備 收集根結線蟲卵與濾紙上，移入培養(yǎng)皿中并保持濕潤狀態(tài)，置于25下培養(yǎng)2-3天，用清水沖洗濾紙，沖洗液過500目篩網，篩面上收集根結線蟲二齡幼蟲，顯微鏡下計數(shù)。 2. 藥劑處理 取

8、等量的線蟲分別移入含有不同濃度的供試藥劑的培養(yǎng)皿中，同時設置清水處理為對照。室溫下靜止12-48小時，顯微鏡下觀察各處理中線蟲的存活狀況，計數(shù)死蟲和活蟲的數(shù)量。計算各處理的校正死亡率。 校正死亡率=處理組死亡率-對照組死亡率 3. 藥劑的致死中濃度的計算 獲得的各濃度線蟲下線蟲的校正死亡率，代入公式y(tǒng)=a+bx，其中y為校正死亡率，x為藥劑濃度，a和b為比例系數(shù)，求解線性方程 ，獲得a和b的數(shù)值，獲得線蟲死亡率與藥劑濃度的直線回歸方程，計算y=50%時的x值，該數(shù)值即為藥劑的致死中濃度，藥劑的致死中濃度越低則藥劑的防治效果越好。例 不同濃度的生物藥劑A處理12小時線蟲的校正死亡率經計算可以得到

9、藥劑濃度與線蟲死亡率的回歸方程y=43.96+0.066x，計算其致死中濃度為91.24ug/ml 大田藥劑防治煙草根結線蟲病試驗 1. 試驗田的選擇 同大田抗病性測定 2. 小區(qū)設置 采取完全隨機法設置小區(qū)，每個小區(qū)面積相等，按照設計要求將供試藥劑施于各小區(qū)土壤中，再移栽入健康無病的煙苗，每種處理至少設置3個以上重復小區(qū)，同時設置無藥劑處理的空白對照小區(qū)。煙草生長期間管理按煙草栽培管理進行，不使用其他的化學藥劑。3. 病情調查 煙葉采收完畢后立即進行病情調查，每小區(qū)隨機挑選20株煙株完整挖出根系，調查根結指數(shù)，計數(shù)各小區(qū)病指數(shù)，最后計數(shù)出每種藥劑的相對防效。相對防效= 100% 4. 數(shù)據處

10、理 對試驗結果進行方差分析，比較各藥劑的防效差異，選出最優(yōu)藥劑。空白對照病情指數(shù)-處理區(qū)病情指數(shù)空白對照病情指數(shù)1. 試驗目的 根結線蟲病是積年流行性土傳病害，土壤中的二齡幼蟲初始蟲量決定了后期發(fā)病的嚴重程度，因此可以研究土壤初試蟲量與作物產量的相關性，來達到預測作物蟲量損失的目的。2. 試驗設計 采用大田微區(qū)試驗法，選擇根結線蟲危害的田塊，并用化學熏蒸劑消毒土壤，將50cm深，直徑50cm的塑料圓筒埋入土中，內部填充消毒土，作為一個相對隔離的微區(qū)。3. 微區(qū)設置 4. 接種方法 按幾何級數(shù)設計14級根結線蟲接種梯度（0、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64、128、256卵/ml土），準確稱取含有所需蟲量的病根段，與消毒土充分混勻作為接種土，填充于塑料圓筒內。移栽入健康煙苗。 5. 微區(qū)管理與數(shù)據采集 微區(qū)試驗嚴格按照烤煙生產規(guī)程進行耕作、水肥、病蟲害防治和采烤管理，記錄各微區(qū)的煙株存活時間、烤煙葉重、均價和最終土壤蟲量。 6. 數(shù)據處理 將所采集數(shù)據與Seinhorst線蟲病害產量損失模型