植物病害試驗與數(shù)據(jù)分析

1、云南農(nóng)業(yè)大學(xué)植物保護學(xué)院王揚第五節(jié) 線蟲類試驗與報告線蟲病病害概述根結(jié)線蟲土壤蟲量調(diào)查方法根結(jié)線蟲病害調(diào)查方法根結(jié)線蟲病抗病性測定試驗設(shè)計與數(shù)據(jù)處理根結(jié)線蟲病防治試驗設(shè)計與數(shù)據(jù)處理根結(jié)線蟲病產(chǎn)量損失預(yù)測線蟲是一類低等無脊椎動物，部分種類能夠寄生植物，造成產(chǎn)量損失或植物產(chǎn)品質(zhì)量變劣，引起植物病害；線蟲對植物的危害主要有：1. 線蟲口針穿刺和線蟲侵入引起的機械損傷，2. 食道腺分泌物對植物的致病作用；線蟲危害的部位包括植物的根系、幼芽、莖稈、葉片、花、果實、種子等，其中絕大多數(shù)種類危害地下部，屬于土傳病害，幾乎所有植物的根部都有線蟲寄生；線蟲病害發(fā)病進程緩慢，屬于積年流行性病害，地上部癥狀通常不明

2、顯，類似營養(yǎng)不良癥狀。根結(jié)線蟲生活史根結(jié)線蟲病是典型的積年流行性土傳病害，土壤中土壤中的活躍態(tài)二齡幼蟲是決定病害發(fā)生程度的重要因素；土壤蟲量調(diào)查是根結(jié)線蟲病害調(diào)查的基本內(nèi)容，通過初始蟲量的調(diào)查可以預(yù)測病害的發(fā)生程度，通過對作物整個生長季節(jié)中蟲量變化的調(diào)查可以評估作物對根結(jié)線蟲的抗性以及防治措施的效果。田間取樣方法 根結(jié)線蟲田間分布存在不均勻現(xiàn)象，因此土壤樣品采集采取“Z”字型或棋盤式取樣法，力求所獲數(shù)據(jù)能夠反映整個田塊的情況。 在每個選定的取樣點，用土壤取樣器，取深度為0-20cm的土柱，同一田塊的所有土樣混合均與，合為一個樣本，帶回室內(nèi)進行線蟲分離。活躍態(tài)土壤根結(jié)線蟲二齡幼蟲分離法-淺盤法

3、每份土樣，量取100ml土壤，移入覆蓋濾紙的篩網(wǎng)上置于淺盤中加水浸沒，靜止24h。浸出液先后通過200目和500目篩網(wǎng)，收集500目篩面上的線蟲，置于顯微鏡下觀察計數(shù)。每樣品重復(fù)三次，取平均值為樣品蟲量。ABCD土壤總蟲量分離計數(shù)-密度梯度離心法 量取10ml土壤樣品，轉(zhuǎn)入50ml離心管，加入30水懸浮土壤，4000轉(zhuǎn)/min離心1min，棄上清液，沉淀中加入45%蔗糖溶液再次懸浮，2000轉(zhuǎn)/min離心1min，上清液過500目篩網(wǎng)，篩面上收集土壤中的各蟲態(tài)線蟲和卵，顯微鏡下觀察計數(shù)。每樣品重復(fù)三次，平均值為樣品總蟲量個體病情調(diào)查-根結(jié)指數(shù)調(diào)查 挖出完整根系，用清水洗凈，估算帶根結(jié)的根占整個

4、根系的百分比。根據(jù)根結(jié)指數(shù)劃分病級： 0級：無根結(jié) 1級：輕微感染，僅有少量根結(jié)，根結(jié)百分率小于5% 2級：根結(jié)明顯，根結(jié)百分率小于25 3級：根結(jié)百分率2650 4級：根結(jié)百分率5175 5級：根結(jié)百分率76以上群體病情調(diào)查 發(fā)病率= 100% 病情指數(shù)= 100發(fā)病株數(shù)調(diào)查株數(shù)調(diào)查總株數(shù)根結(jié)指數(shù)的最高級數(shù)該級別株數(shù)）（根結(jié)指數(shù)級數(shù)盆栽接種測定煙草對花生根結(jié)線蟲抗性 1. 供試根結(jié)線蟲接種源制備花生根結(jié)線蟲（M. arenaria）采自云南牟定縣，經(jīng)單卵塊純化，通過種類鑒定，在感病的番茄品種Rutgers上擴大繁殖，收獲病根，用次氯酸鈉處理，獲得卵懸浮液，顯微鏡下計數(shù)定量。 2. 待測煙株的

5、接種 各個煙草品種在播種前先用2%福爾馬林溶液表面播種土為腐殖土細砂按體積比1:1混勻，濕熱滅菌。煙苗長至56片葉時，移栽試驗盆中，同時接種根結(jié)線蟲，盆土為腐殖土 ：沙=1:2的滅菌土。根結(jié)線蟲按3000卵/盆接種，設(shè)重復(fù)4盆，同時設(shè)不接卵對照，重復(fù)4盆，隨機排列，接種后常規(guī)管理，澆水，施肥，適時噴藥，防止其它病蟲干擾。3. 病害調(diào)查及抗性評價 接種60天后將接種過的植株整株倒出，清水洗凈根部。調(diào)查每煙株根部發(fā)病情況，根據(jù)病害癥狀描述，記載病情級別及單位根重的卵數(shù)，計算根結(jié)指數(shù)。平均根結(jié)指數(shù)0-1為免疫、1-2為高抗、2-3為中抗、3-4為中感、4-5為高感。4. 數(shù)據(jù)分析 應(yīng)用軟件SAS進行

6、數(shù)據(jù)分析，用Duncans方法對數(shù)據(jù)進行比較。原始數(shù)據(jù)處理結(jié)果 采用Duncans多重比較，不同小寫字母的數(shù)據(jù)代表處理之間差異顯著(P0.05)大田自然發(fā)病測定煙草品種抗病性 1.試驗地點的選擇 選擇土質(zhì)、坡向均一，且有根結(jié)線蟲病發(fā)病歷史的田塊，種植前徹底翻犁采集田中各區(qū)域的土樣，分離土壤中的根結(jié)線蟲二齡幼蟲，確定田塊中線蟲分布均勻程度，并通過分子生物學(xué)方法確定土壤中根結(jié)線蟲的種類及組成。 2. 小區(qū)設(shè)置 田塊內(nèi)劃分出面積相等的18個小區(qū)，每個小區(qū)內(nèi)按照標(biāo)準種植規(guī)格起墑，小區(qū)間設(shè)置寬度為1m的隔離溝，將在無菌土培育的6個品種的煙苗移栽入小區(qū)內(nèi)，每小區(qū)種植1個品種，每品種包含3個重復(fù)小區(qū)，各品種

7、重復(fù)小區(qū)隨機排布。 3. 病情調(diào)查與抗性評價 移栽后按常規(guī)方法管理，適時統(tǒng)一防治其他地上部病害，90天后進行病情調(diào)查，每小區(qū)隨機選取20株煙株，盡可能完整挖出根系，清水洗凈后調(diào)查根結(jié)指數(shù)，計算各小區(qū)的病情指數(shù)和發(fā)病率。平均病情指數(shù)25以下為高抗、25-50為中抗、50-75為中感、75以上為高感。 4. 數(shù)據(jù)分析 應(yīng)用軟件SAS進行數(shù)據(jù)分析，用Duncans方法對數(shù)據(jù)進行比較。藥劑殺線蟲活性的室內(nèi)測定 1. 線蟲的制備 收集根結(jié)線蟲卵與濾紙上，移入培養(yǎng)皿中并保持濕潤狀態(tài)，置于25下培養(yǎng)2-3天，用清水沖洗濾紙，沖洗液過500目篩網(wǎng)，篩面上收集根結(jié)線蟲二齡幼蟲，顯微鏡下計數(shù)。 2. 藥劑處理 取

8、等量的線蟲分別移入含有不同濃度的供試藥劑的培養(yǎng)皿中，同時設(shè)置清水處理為對照。室溫下靜止12-48小時，顯微鏡下觀察各處理中線蟲的存活狀況，計數(shù)死蟲和活蟲的數(shù)量。計算各處理的校正死亡率。 校正死亡率=處理組死亡率-對照組死亡率 3. 藥劑的致死中濃度的計算 獲得的各濃度線蟲下線蟲的校正死亡率，代入公式y(tǒng)=a+bx，其中y為校正死亡率，x為藥劑濃度，a和b為比例系數(shù)，求解線性方程 ，獲得a和b的數(shù)值，獲得線蟲死亡率與藥劑濃度的直線回歸方程，計算y=50%時的x值，該數(shù)值即為藥劑的致死中濃度，藥劑的致死中濃度越低則藥劑的防治效果越好。例 不同濃度的生物藥劑A處理12小時線蟲的校正死亡率經(jīng)計算可以得到

9、藥劑濃度與線蟲死亡率的回歸方程y=43.96+0.066x，計算其致死中濃度為91.24ug/ml 大田藥劑防治煙草根結(jié)線蟲病試驗 1. 試驗田的選擇 同大田抗病性測定 2. 小區(qū)設(shè)置 采取完全隨機法設(shè)置小區(qū)，每個小區(qū)面積相等，按照設(shè)計要求將供試藥劑施于各小區(qū)土壤中，再移栽入健康無病的煙苗，每種處理至少設(shè)置3個以上重復(fù)小區(qū)，同時設(shè)置無藥劑處理的空白對照小區(qū)。煙草生長期間管理按煙草栽培管理進行，不使用其他的化學(xué)藥劑。3. 病情調(diào)查 煙葉采收完畢后立即進行病情調(diào)查，每小區(qū)隨機挑選20株煙株完整挖出根系，調(diào)查根結(jié)指數(shù)，計數(shù)各小區(qū)病指數(shù)，最后計數(shù)出每種藥劑的相對防效。相對防效= 100% 4. 數(shù)據(jù)處

10、理 對試驗結(jié)果進行方差分析，比較各藥劑的防效差異，選出最優(yōu)藥劑?？瞻讓φ詹∏橹笖?shù)-處理區(qū)病情指數(shù)空白對照病情指數(shù)1. 試驗?zāi)康?根結(jié)線蟲病是積年流行性土傳病害，土壤中的二齡幼蟲初始蟲量決定了后期發(fā)病的嚴重程度，因此可以研究土壤初試蟲量與作物產(chǎn)量的相關(guān)性，來達到預(yù)測作物蟲量損失的目的。2. 試驗設(shè)計 采用大田微區(qū)試驗法，選擇根結(jié)線蟲危害的田塊，并用化學(xué)熏蒸劑消毒土壤，將50cm深，直徑50cm的塑料圓筒埋入土中，內(nèi)部填充消毒土，作為一個相對隔離的微區(qū)。3. 微區(qū)設(shè)置 4. 接種方法 按幾何級數(shù)設(shè)計14級根結(jié)線蟲接種梯度（0、0.0625、0.125、0.25、0.5、1、2、4、8、16、32、64、128、256卵/ml土），準確稱取含有所需蟲量的病根段，與消毒土充分混勻作為接種土，填充于塑料圓筒內(nèi)。移栽入健康煙苗。 5. 微區(qū)管理與數(shù)據(jù)采集 微區(qū)試驗嚴格按照烤煙生產(chǎn)規(guī)程進行耕作、水肥、病蟲害防治和采烤管理，記錄各微區(qū)的煙株存活時間、烤煙葉重、均價和最終土壤蟲量。 6. 數(shù)據(jù)處理 將所采集數(shù)據(jù)與Seinhorst線蟲病害產(chǎn)量損失模型