實(shí)驗(yàn)六--血細(xì)胞計(jì)數(shù)及血涂片制作

1、實(shí)驗(yàn)六實(shí)驗(yàn)六 血細(xì)胞計(jì)數(shù)及血涂片制作血細(xì)胞計(jì)數(shù)及血涂片制作血細(xì)胞計(jì)數(shù)1熟悉并清洗計(jì)數(shù)板和蓋玻片2稀釋血液： 血樣采集：兔耳緣靜脈采血 血樣抗凝：肝素鈉抗凝 血樣稀釋：如下實(shí)驗(yàn)操作 紅細(xì)胞稀釋液：生理鹽水 白細(xì)胞稀釋液：冰醋酸 (鹽酸) 紅細(xì)胞計(jì)數(shù)：0.9% NaCl 1.99mL + 0.01mL血，稀釋200倍 白細(xì)胞計(jì)數(shù)：1% HCL 0.38mL + 0.02mL 血，稀釋20倍3充池：（混勻，從中間取）4靜置計(jì)數(shù)板 2min5計(jì)數(shù) 6計(jì)數(shù)原則：數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右7. 計(jì)算：紅細(xì)胞數(shù)/L=N*50*106*200=N*1010 白細(xì)胞數(shù)/L=N/4*10*20*106=N*5*107

2、血細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)板血細(xì)胞計(jì)數(shù)計(jì)數(shù)板保證計(jì)數(shù)板和蓋玻片清潔；以防影響計(jì)數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性 。一次完成充池，如充池過少、過多、有氣泡或出現(xiàn)任何碎片，應(yīng)拭凈計(jì)數(shù)板及蓋玻片后重新操作。充池后平放計(jì)數(shù)板，不能移動(dòng)蓋玻片。計(jì)數(shù)板中細(xì)胞如果嚴(yán)重分布不均，應(yīng)重新充池計(jì)數(shù)。凡壓線的細(xì)胞應(yīng)按照數(shù)上不數(shù)下、數(shù)左不數(shù)右的原則，避免漏數(shù)或重復(fù)計(jì)數(shù)。注意事項(xiàng)血液涂片的制備血液涂片的制備1 1、每份樣本制作、每份樣本制作3 3張血涂片。要求所用玻片清潔、干燥、無塵，大張血涂片。要求所用玻片清潔、干燥、無塵，大小為小為25 mm25 mm75mm75mm，厚度為，厚度為0.80.81.2mm1.2mm。并有明確標(biāo)記。如果樣本。并有

3、明確標(biāo)記。如果樣本中白細(xì)胞數(shù)量少時(shí)，需要制備更多血涂片（如中白細(xì)胞數(shù)量少時(shí)，需要制備更多血涂片（如6 6張）。張）。2 2、使用、使用EDTAEDTAK2K2抗凝血液樣本時(shí)，應(yīng)在采集后抗凝血液樣本時(shí)，應(yīng)在采集后4 4小時(shí)內(nèi)制備血涂片。小時(shí)內(nèi)制備血涂片。在制片前，樣本應(yīng)充分混勻。注意，樣本不能冷藏。在制片前，樣本應(yīng)充分混勻。注意，樣本不能冷藏。3 3、用楔形技術(shù)制備血涂片。在玻片近一端、用楔形技術(shù)制備血涂片。在玻片近一端1/31/3處，加一滴（約處，加一滴（約0.05ml0.05ml）充分混勻的血液，握住另一張較狹窄的、邊緣光滑的推片，）充分混勻的血液，握住另一張較狹窄的、邊緣光滑的推片，以以3

4、0304545角使血滴沿推片迅速散開，快速、平穩(wěn)地推動(dòng)推片至玻角使血滴沿推片迅速散開，快速、平穩(wěn)地推動(dòng)推片至玻片的另一端。片的另一端。4 4、在、在1 1小時(shí)內(nèi)，用染液染色；或在小時(shí)內(nèi)，用染液染色；或在1 1小時(shí)內(nèi)，用無水甲醇（含水量小時(shí)內(nèi)，用無水甲醇（含水量3%3%）固定后染色。）固定后染色。推片技巧推片技巧 推片傾斜推片傾斜451，推成血膜長度，推成血膜長度2535mm，寬度，寬度1820mm，血膜四周留有空隙，血膜四周留有空隙區(qū)，血膜終尾離玻片終端至少區(qū)，血膜終尾離玻片終端至少10mm，血膜均，血膜均勻，薄如蟬翼，尾端形如弧狀，迅速扇（搖）勻，薄如蟬翼，尾端形如弧狀，迅速扇（搖）干，血膜

5、具有頭、體、尾不同厚薄區(qū)域。此干，血膜具有頭、體、尾不同厚薄區(qū)域。此外，涂片時(shí)，還要考慮患者的血液狀態(tài)，如外，涂片時(shí)，還要考慮患者的血液狀態(tài)，如貧血程度、血液粘稠度、貧血程度、血液粘稠度、WBC或有核細(xì)胞多或有核細(xì)胞多少 等 因 素 ， 調(diào) 整 推 片 技 巧 。少 等 因 素 ， 調(diào) 整 推 片 技 巧 。 血膜至玻片邊緣約5mm血膜至玻片一端約為總長1/3血涂片頭部，涂片厚血涂片體 部 的檢查區(qū)域血涂片尾部，涂片太薄染色步驟染色步驟取新鮮血液涂片，晾干；取新鮮血液涂片，晾干；加劉加劉A溶液（覆蓋血涂片為宜），染色溶液（覆蓋血涂片為宜），染色30s； 加劉加劉B溶液于溶液于A液上（約為液上（