實(shí)驗(yàn)四、革蘭氏染色法 ppt課件

1、思索題思索題1 1：培育基配置好后，為什么必需立刻：培育基配置好后，為什么必需立刻滅菌？如何檢查滅菌后的培育基能否為無(wú)菌滅菌？如何檢查滅菌后的培育基能否為無(wú)菌的？的？思索題思索題2 2：假設(shè)需求配制一種含有某抗生素：假設(shè)需求配制一種含有某抗生素的固體培育基，其中抗生素的終質(zhì)量濃度的固體培育基，其中抗生素的終質(zhì)量濃度或義務(wù)濃度為或義務(wù)濃度為50ug/mL50ug/mL，他將如何操作？，他將如何操作？提示：抗生素在高溫下易失效提示：抗生素在高溫下易失效實(shí)驗(yàn)四實(shí)驗(yàn)四 革蘭氏染色法革蘭氏染色法目的要求學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色法。學(xué)習(xí)并掌握革蘭氏染色法。了解革蘭氏染色原理。了解革蘭氏染色原理。穩(wěn)定顯微鏡的運(yùn)

2、用方法及無(wú)菌操作技術(shù)。穩(wěn)定顯微鏡的運(yùn)用方法及無(wú)菌操作技術(shù)。v菌種菌種v參考菌：金黃色葡萄球菌參考菌：金黃色葡萄球菌(G+), 大腸桿菌大腸桿菌 (G-)v待測(cè)菌：蠟樣芽孢桿菌、藍(lán)細(xì)菌待測(cè)菌：蠟樣芽孢桿菌、藍(lán)細(xì)菌(微囊藻微囊藻)v儀器儀器 顯微鏡顯微鏡v資料資料 載玻片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、載玻片、香柏油、二甲苯、擦鏡紙、吸水紙、染色缸等吸水紙、染色缸等v染料染料 草酸銨結(jié)晶紫染色液、盧戈氏碘液、草酸銨結(jié)晶紫染色液、盧戈氏碘液、95%乙醇、乙醇、0.5%番紅染色液番紅染色液v制片制片v初染初染v媒染媒染v脫色脫色v復(fù)染復(fù)染v鏡檢鏡檢主要操作步驟主要操作步驟制片制片v要用活潑生長(zhǎng)期的培育物進(jìn)展

3、革蘭氏染色要用活潑生長(zhǎng)期的培育物進(jìn)展革蘭氏染色; ;v留意練習(xí)無(wú)菌操作；留意練習(xí)無(wú)菌操作；v在載玻片上滴一小滴生理鹽水；在載玻片上滴一小滴生理鹽水；v取菌不要貪多，接種環(huán)上肉眼可見菌苔痕取菌不要貪多，接種環(huán)上肉眼可見菌苔痕跡即可；跡即可；v菌苔在生理鹽水中涂片要均勻，部分不宜菌苔在生理鹽水中涂片要均勻，部分不宜過(guò)厚過(guò)厚, ,以免脫色不完全呵斥假陽(yáng)性以免脫色不完全呵斥假陽(yáng)性v涂片涂片-室溫枯燥室溫枯燥-固定固定初染初染 將玻片置于玻片擱架上，加草酸銨將玻片置于玻片擱架上，加草酸銨結(jié)晶紫染色液結(jié)晶紫染色液( (加量以蓋滿菌膜為度加量以蓋滿菌膜為度) )，染，染色色1min1min。傾去染色液，用自

4、來(lái)水小心地沖。傾去染色液，用自來(lái)水小心地沖洗。洗。媒染媒染 滴加碘液沖去水跡，再染滴加碘液沖去水跡，再染1-2min1-2min，水洗。水洗。脫色脫色 吸水紙吸去多余水分吸水紙吸去多余水分, ,滴加滴加95%95%乙醇，乙醇，脫色脫色20-30s20-30s立刻水洗，以終止脫色。立刻水洗，以終止脫色。復(fù)染吸水紙吸去多余水分復(fù)染吸水紙吸去多余水分, ,滴加番紅，染色滴加番紅，染色2-3min2-3min，水洗。最后用吸水紙悄然吸干。，水洗。最后用吸水紙悄然吸干。 枯燥后，置顯微鏡下察看?？菰锖?，置顯微鏡下察看。 被染成藍(lán)紫色者即為革蘭氏陽(yáng)性菌被染成藍(lán)紫色者即為革蘭氏陽(yáng)性菌(G) 被染成紅色者是革

5、蘭氏陰性菌被染成紅色者是革蘭氏陰性菌(G-)革蘭氏陽(yáng)性和陰性菌細(xì)胞壁成分比較成分 占細(xì)胞壁干重的% 革蘭氏陽(yáng)性菌 革蘭氏陰性菌肽聚糖 含量很高50-90 含量很低10磷壁酸 含量較高50 無(wú)類脂質(zhì) 普通無(wú) 2 含量較高20蛋白質(zhì) 無(wú) 含量較高vG-菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂菌的細(xì)胞壁中含有較多易被乙醇溶解的類脂質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇質(zhì)，而且肽聚糖層較薄、交聯(lián)度低，故用乙醇或丙酮脫色時(shí)溶解了類脂質(zhì)，添加了細(xì)胞壁的或丙酮脫色時(shí)溶解了類脂質(zhì)，添加了細(xì)胞壁的通透性，使結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)通透性，使結(jié)晶紫和碘的復(fù)合物易于滲出，結(jié)果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)番紅復(fù)染后就成紅色。果細(xì)菌就被脫色，再經(jīng)番紅復(fù)染后就成紅色。vG菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂菌細(xì)胞壁中肽聚糖層厚且交聯(lián)度高，類脂質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處置后反而使肽聚糖層失質(zhì)含量少，經(jīng)脫色劑處置后反而使肽聚糖層失水、孔徑減少，通透性降低，因此細(xì)菌仍保管水、孔徑減少，通透性降低，因此細(xì)菌仍保管初染時(shí)的顏色，即結(jié)晶紫的藍(lán)紫色。初染時(shí)的顏色，即結(jié)晶紫的藍(lán)紫色。作作 業(yè)業(yè) 結(jié)果結(jié)果 簡(jiǎn)述簡(jiǎn)述4種細(xì)菌的染色結(jié)果外種細(xì)菌的染色