復(fù)旦大學(xué)化學(xué)AII第十章液相色譜概述

1、2022-4-4第第2121章章 液相色譜分析法液相色譜分析法2022-4-4一一. HPLC與與GC的區(qū)別的區(qū)別流動(dòng)相分別為液體和氣體：擴(kuò)散系數(shù)流動(dòng)相分別為液體和氣體：擴(kuò)散系數(shù) DmDm液液/Dm/Dm氣氣=10=10-5-5 速率方程H=A+B/v+Cv A（渦流擴(kuò)散項(xiàng)）dp B（分子擴(kuò)散項(xiàng)）忽略不計(jì) C（傳質(zhì)阻力項(xiàng)）dp2 v1/dp2022-4-4填充柱氣相色譜柱，填料尺為填充柱氣相色譜柱，填料尺為80-10080-100目目(2(2毫米毫米););高效液相色譜的固定相粒度在高效液相色譜的固定相粒度在2 21010微米微米, ,因此需要因此需要很高的反壓。很高的反壓。高效液相色譜（高效

2、液相色譜（HPLC）又稱為：）又稱為： 高速液相高速液相 HSLC 高壓液相高壓液相 HPLC 高分辨液相高分辨液相 HRLC2022-4-4HPLCGC分析對(duì)象70%-80%化合物20-30%氣體和無(wú)機(jī)、有機(jī)流動(dòng)相液體（與組分有作用）氣體（化學(xué)惰性）柱溫低溫、室溫高溫流動(dòng)相產(chǎn)生高壓泵+貯液瓶高壓鋼瓶進(jìn)樣進(jìn)樣器直接進(jìn)樣柱形直型螺旋型載體粒子210um2mm柱 長(zhǎng)10 cm-25 cm1 m高壓液相色譜與氣相色譜的比較高壓液相色譜與氣相色譜的比較2022-4-42022-4-4二二. .高效液相色譜法的特點(diǎn)高效液相色譜法的特點(diǎn) feature of HPLC 特點(diǎn)：高壓、高效、高速特點(diǎn)：高壓、高

3、效、高速 高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。高沸點(diǎn)、熱不穩(wěn)定有機(jī)及生化試樣的高效分離分析方法。2022-4-4三三. . 液相色譜類(lèi)型液相色譜類(lèi)型 固定相固定相：固體吸附劑，如硅膠、氧化鋁等。 流動(dòng)相流動(dòng)相：各種不同極性的一元或多元溶劑。 基本原理基本原理：組分在固定相吸附劑上的吸附與解吸； 吸附色譜對(duì)中等分子量的油溶性樣品可獲得最佳的分離，適用于異構(gòu)體分離和同系物分離；而對(duì)強(qiáng)極性或離子型的樣品，有時(shí)會(huì)發(fā)生不可逆吸附，不能得到滿意的結(jié)果。 缺點(diǎn)缺點(diǎn)：非線形等溫吸附常引起峰的拖尾；1. 液液-固吸附色譜固吸附色譜liquid-solid adsorption chromatogr

4、aphy2022-4-41. 被測(cè)組分性質(zhì)（極性大?。罕粶y(cè)組分性質(zhì)（極性大小）： 烴 - - - - - - - - 羧酸，醇 2. 吸附劑的活性：吸附劑的活性： 吸附劑的活性大，對(duì)被測(cè)組分的吸附能力強(qiáng) 強(qiáng)極性物質(zhì)強(qiáng)極性物質(zhì)選擇弱吸附劑（固體固定相）選擇弱吸附劑（固體固定相） 弱極性物質(zhì)弱極性物質(zhì)選擇強(qiáng)吸附劑（固體固定相）選擇強(qiáng)吸附劑（固體固定相）3. 流動(dòng)相的選擇：流動(dòng)相的選擇： “相似相溶相似相溶”原則原則 基本原則基本原則是 極性大的試樣用極性較強(qiáng)的流動(dòng)相，極性小的極性大的試樣用極性較強(qiáng)的流動(dòng)相，極性小的則用低極性流動(dòng)相則用低極性流動(dòng)相。 吸附劑和流動(dòng)相的選擇：吸附劑和流動(dòng)相的選擇：

5、依據(jù)被測(cè)組分、吸附劑和流動(dòng)相的性質(zhì)2022-4-4極性吸附劑上有機(jī)化合物的保留順序如下（極性強(qiáng)保留時(shí)間長(zhǎng)）：氟碳化合物飽和烴 烯烴芳烴有機(jī)鹵化物醚硝基化合物腈叔胺酯醛酮醇伯胺酰胺羧酸 甲酰胺 乙腈 甲醇 乙醇 丙醇 丙酮 二氧六環(huán) 四氫呋喃 甲乙酮 正丁醇 乙酸乙酯 乙醚 異丙醚 二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳環(huán)己烷己烷煤油(最小)2022-4-4四、液相色譜儀器四、液相色譜儀器 high performance liquid chromatograph2022-4-4液相色譜儀（液相色譜儀（2）2022-4-4液相色譜儀（液相色譜儀（3）2022-4-4液相色譜儀（液相色譜儀（4）20

6、22-4-41、主要部件、主要部件 Main assembly of HPLC(1).(1).流程流程2022-4-4(2). 液相色譜檢測(cè)器液相色譜檢測(cè)器 a. 紫外檢測(cè)器紫外檢測(cè)器 應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。應(yīng)用最廣，對(duì)大部分有機(jī)化合物有響應(yīng)。 特點(diǎn)：特點(diǎn)： 靈敏度高: 10-10g/ml 線形范圍高； 流通池可做的很?。?mm 10mm ，容積 8L）； 對(duì)流動(dòng)相的流速和溫度變化不敏感； 波長(zhǎng)可選，易于操作； 可用于梯度洗脫。 2022-4-4光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器 紫外檢測(cè)器的重要進(jìn)展；紫外檢測(cè)器的重要進(jìn)展； 光電二極管陣列檢測(cè)器：光電二極管陣列檢測(cè)器：10

7、24個(gè)二極管陣列，各檢測(cè)特定波長(zhǎng)，計(jì)算機(jī)快速處理，三維立體譜圖，如圖所示。2022-4-42022-4-4光電二極管陣列檢測(cè)器光電二極管陣列檢測(cè)器2022-4-4b. 示差折光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器（differential refractive index detector） 除紫外檢測(cè)器之外應(yīng)用最多的檢測(cè)器； 可連續(xù)檢測(cè)參比池和樣品池中流動(dòng)相之間的折光指數(shù)差值。差值與濃度呈正比； 通用型檢測(cè)器（每種物質(zhì)具有不同的折光指數(shù)）； 靈敏度低(10-7g/ml)、對(duì)溫度敏感、不能用于梯度洗脫； 偏轉(zhuǎn)式、反射式和干涉型三種；2022-4-4示差折光檢測(cè)器示差折光檢測(cè)器2022-4-4c. 熒光檢測(cè)器熒

8、光檢測(cè)器（fluorescence detector） 高靈敏度(10-12g/ml)、高選擇性； 對(duì)多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類(lèi)化合物、農(nóng)藥、藥物、氨基酸、甾類(lèi)化合物等有響應(yīng)；2022-4-4(3). 高壓輸液泵高壓輸液泵主要部件之一，壓力：20-80大氣壓。為了獲得高柱效而使用粒度很小的固定相（10m），液體的流動(dòng)相高速通過(guò)時(shí)，將產(chǎn)生很高的壓力，因此高壓、高速是高效液相色譜的特點(diǎn)之一。應(yīng)具有壓力平穩(wěn)、脈沖小、流量穩(wěn)定可調(diào)、耐腐蝕等特性2022-4-4氣相色譜分離條件：氣相色譜分離條件：1.1.柱溫；柱溫；2.2.氣體壓力、流速氣體壓力、流速程程序序升升溫溫2022-4-4(4).

9、梯度淋洗裝置梯度淋洗裝置外梯度外梯度: 利用兩臺(tái)高壓輸液泵，將兩種不同極性的溶劑按一定的比例送入梯度混合室，混合后進(jìn)入色譜柱。內(nèi)梯度內(nèi)梯度: 一臺(tái)高壓泵, 通過(guò)比例調(diào)節(jié)閥,將兩種或多種不同極性的溶劑按一定的比例抽入高壓泵中混合。2022-4-4(5). 進(jìn)樣裝置進(jìn)樣裝置 流路中為高壓力工作狀態(tài)， 通常使用耐高壓的六通閥進(jìn)樣裝置， 其結(jié)構(gòu)如圖所示：2022-4-4(6). 高效分離柱高效分離柱 柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑柱體為直型不銹鋼管，內(nèi)徑16 mm，柱長(zhǎng)柱長(zhǎng)540 cm。發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。發(fā)展趨勢(shì)是減小填料粒度和柱徑以提高柱效。2022-4-4五五. 分離類(lèi)型選擇分離類(lèi)型選擇 Choice of separation types反相反相HPLC吸附色譜或正相吸附色譜或正相HPLC陰離子交換、離子對(duì)陰離子交